ANTICUERPOS

Monoclonales
 ANTICUERPOS POLICLONALES Y MONOCLONALES

La respuesta inmunitaria a un patógeno tiene como resultado típico la producción de

inmunoglobulinas (Ig) dirigidas frente a los numerosos determinantes antigénicos
presentes en el patógeno . Solamente unas pocas de las muchas Ig están dirigidas
frente a cada uno de los determinantes antigénicos.

El antisuero resultante es una mezcla compleja de anticuerpos diferentes, llamados

anticuerpos policlonales derivados de muchas células B individuales. El suero se
denomina antisuero policlonal.
Los antisueros policlonales suministran una adecuada protección inmunitaria al
hospedador, pero no son reproducibles con precisión, porque son la suma de
las respuestas de anticuerpos de un individuo a un antígeno complejo en un
momento concreto.
 HIBRIDOMAS Y ANTICUERPOS MONOCLONALES

Cada Ig es producida por un único linfocito B . Como resultado, un clon de células B

in vitro puede producir cantidades limitadas de un único anticuerpo monoespecífico; a
esto se le llama anticuerpo monoclonal.

Sin embargo, las células B productoras de anticuerpos mueren después de varias

semanas en cultivo celular(in vitro).Para producir clones de células B de larga vida,
las células B productoras de anticuerpos se fusionan con células B tumorales
llamadas mielomas. Los mielomas son capaces de dividirse indefinidamente y son
por tanto líneas celulares inmortales.
 Las líneas celulares inmortales que resultan de la fusión célula B-mieloma son
líneas de células híbridas llamadas hibridomas. Las líneas de hibridomas comparten
propiedades de las dos células parentales.

Crecen indefinidamente in vitro y producen anticuerpos

La técnica de hibridoma y la
producción de anticuerpos
monoclonales. Los hibridomas
pueden cultivarse indefinidamente
por pases a través de animales
como un tumor.
Las células de hibridoma también
pueden almacenarse congeladas y
reconstituirse cuando sea necesario
en cultivo de tejidos o en un hospedador
animal apropiado.
Para producir un anticuerpo monoclonal, se inmuniza un ratón con el antígeno que
interesa. Durante varias semanas siguientes, las células B específicas de antígeno
proliferan y empiezan a producir anticuerpos en el ratón.

Se extrae del ratón tejido del bazo o de los ganglios linfáticos,rico en células B, y las
células B se fusionan con células de mieloma .

Muchas células se fusionan y empiezan a crecer en el cultivo, pero sólo un pequeño

número son hibridomas productores de anticuerpos
Los hibridomas se seleccionan de las otras células por adición de Hipoxantina,
Aminopterina y Timidina (HAT) al medio de cultivo de las células in vitro. El medio

HAT detiene el crecimiento de las células de mieloma que no se han fusionado

porque las células de mieloma, aunque capaces de crecer indefinidamente en
cultivo celular, son incapaces de usar los metabolitos hipoxantina y timidina para
superar el bloqueo metabólico causado por la aminopterina, un veneno celular.

En cambio, las células de hibridoma fusionadas pueden usar la hipoxantina y

timidina para superar el bloqueo de la aminopterina y crecen normalmente en el
medio HAT; poseen los genes necesarios para utilizar hipoxantina y timidina,
recibidos de la célula B parental.
Aminopterina

Es un fármaco desarrollado como un análogo estructural del ácido fólico. Como

antagonista del ácido fólico, bloquea la síntesis de purinas al inhibir numerosas
enzimas regulatorias.
Las células B no fusionadas mueren en pocos días porque no pueden crecer
indefinidamente en cultivo. Después de la fusión, se identifican los clones de
hibridoma productores del anticuerpo deseado.

Un ensayo de inmunoabsorbente unido a enzima (ELISA, del inglés enzyme

-linked immunosorbent assay)puede usarse para identificar hibridomas que
producen anticuerpos monoclonales. De una fusión típica, se aíslan varios clones
distintos, cada uno de los cuales hace un anticuerpo monoclonal.
Una vez que se han identificado los clones de interés, pueden crecer en ratones
bajo la forma de un tumor productor de anticuerpos, o pueden crecer en cultivo
celular. El anticuerpo puede recogerse de un tumor o del sobrenadante de un cultivo
celular.
Los hibridomas pueden crecer indefinidamente o pueden almacenarse como células
congeladas y posteriormente reconstituirse para suministrar los anticuerpos
monoclonales deseados.
Los anticuerpos monoclonales han reemplazado a los anticuerpos policlonales en
muchas aplicaciones inmunodiagnósticas porque son biorreactivos más específicos
Usos diagnósticos y terapéuticos

Los anticuerpos monoclonales son ampliamente usados en pruebas de

diagnóstico clínico, tipado inmunológico de bacterias, e identificación de células
portadoras de antígenos extraños en su superficie (por ejemplo, células
infectadas con virus). También se han usado anticuerpos monoclonales en
ingeniería genética para identificar y medir niveles de productos de genes que no
pueden detectarse por otros métodos, y también para incrementar la especificidad
de pruebas clínicas como el tipado de sangre y de tejidos.
A causa de su especificidad, los anticuerpos monoclonales también se usan para
detectar y tratar cánceres humanos.

Las células malignas poseen antígenos superficiales no expresados en células

normales. Estos antígenos tumorales son proteínas únicas, específicas de la
célula tumoral. Los anticuerpos monoclonales preparados frente a antígenos
tumorales marcan específicamente a las células malignas y se han utilizado como
vehículos para liberar toxinas directamente en ellas.

La especificidad de los tratamientos con anticuerpos monoclonales puede

mejorar mucho la terapia del cáncer, ofreciendo una alternativa a la quimioterapia
y la radioterapia que daña a las células normales del hospedador.
 SEROLOGÍA
El estudio de las reacciones antígeno-anticuerpo in vitro se llama serología. Las
reacciones serológicas se usan para muchas pruebas inmunológicas de diagnóstico.

Las reacciones antígeno-anticuerpo dependen de la interacción específica del

determinante antigénico con la región variable de la molécula de anticuerpo . Se usan
varias pruebas serológicas para identificar antígenos,dependiendo de las propiedades
del antígeno y de las condiciones elegidas para la reacción
Especificidad y sensibilidad
La utilidad de las pruebas serológicas para fines diagnósticos depende la
especificidad y sensibilidad de las pruebas.

La especificidad es la capacidad de una preparación de anticuerpos para

reconocer un antígeno único. La especificidad óptima implica que el anticuerpo es
específico para un único antígeno, que no ocurrirán reacciones cruzadas con otro
antígeno y que, por tanto, no se obtendrán datos falsamente positivos
La especificidad debe definirse en términos de reacciones con antígenos de
controles positivo y negativo. La especificidad para cada prueba debe determinarse
experimentalmente y verificarse cada vez que se utiliza dicha prueba.

La sensibilidad define la menor cantidad de antígeno que puede detectarse. El

mayor nivel de sensibilidad requiere que, en una prueba, el anticuerpo sea capaz
de identificar una sola molécula de antígeno. Una sensibilidad alta previene las
reacciones falsamente negativas.
La cantidad de antígeno detectada por cada sistema de pruebas es proporcional
a la cantidad de anticuerpo usado.
Por ejemplo,las técnicas de inmunoprecipitación requieren una gran cantidad de
anticuerpos y generalmente detectan cantidades de 0,1-1,0 mg de antígeno. Por
eso, las pruebas de precipitación son las pruebas serológicas menos sensibles
En contraste, las pruebas ELISA requieren 100.000 veces menos anticuerpos y
pueden detectar 1 millón de veces menos antígeno (cantidades de 0,1-1,0 ng) que
las pruebas de precipitación.
Por tanto,las pruebas ELISA están entre las pruebas serológicas más sensibles.
s
La especificidad y la sensibilidad definen la utilidad de un ensayo individual. Las
reacciones de precipitación y neutralización producen resultados visibles
consecuencia de la interacción antígeno-anticuerpo.

En las reacciones serológicas, una alta especificidad previene las reacciones

falsamente positivas. La alta sensibilidad previene las reacciones falsamente
negativas.
Se usan pruebas de aglutinación directa para la determinación de los grupos
sanguíneos. Hay pruebas de aglutinación pasiva disponibles para la identificación

de una diversidad de patógenos y de productos relacionados con patógenos. Las

pruebas de aglutinación son rápidas, relativamente sensibles, muy específicas, de
fácil realización y baratas.
Los anticuerpos fluorescentes se usan para la identificación rápida y precisa de
patógenos y otras sustancias antigénicas en muestras de tejidos, sangre y otras
mezclas complejas.

Los métodos basados en anticuerpos fluorescentes se usan para la identificación,

enumeración cuantitativa y separación de una diversidad de tipos de células procariotas
y eucariotas.
ELISA