Test de Coombs

Historia

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Robins Coombs 09/01/21-25/01/06
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Veterinario - Inmunologista británico
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1945 Coombs , Arthur Mourant, Robert Russell
Race describieron el Test de Coombs indirecto, la
PAGHI.
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Italiano 1908, Carlo Moreschi, publicó un
“antisuero que reacciona con suero”.
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Coombs, mas tarde reconoce este estudio y publica
en base a este mismo.
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Finalizando y perfeccionando sus estudios ensayan
con Eritrocitos fetales con EHRN.
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Hablan de “Sensibilizados” o anticuerpos
incompletos y que la técnica lo evidencia.
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Junto con los colaboradores demuestran que los RN
con EHRN tienen la prueba positiva y los niños sanos
tienen la prueba negativa.
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A excepción de 2 RN.
– Un RN sin EHRN, con prueba positiva, que resulto ser una
Sífilis congénita.
– Otro RN sano con resultado positivo. Luego de estudiar se
pudo demostrar que el RN había heredado un antígeno del
padre que la madre había generado un anticuerpo. Esta
madre era la señora Kell. Donde Race investigó.
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Robert COOMBS: “un ANTICUERPO INCOMPLETO UNIDO
A UN ERITROCITO SE PUEDE EVIDENCIAR CON OTRO
ANTICUERPO QUE SE UNA A ÉL Y PROVOCAR
AGLUTINACIÓN”
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1947 Coomb y Mourant demostraron que la fracción
proteica responsable de la sensibilización de los
hematíes era una globulina, diferenciando entre ellas a
los anticuerpos “completos”, los actualmente conocidos
como IgM, de los “incompletos”, denominados como IgG
o anticuerpos irregulares.
¿Que es el Test de COOMBS DIRECTO?

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Es la técnica inmunohematológica para evidenciar
que el eritrocito, en estudio, tiene anticuerpos
humanos adheridos a su membrana. Por lo tanto
evidencia que el Eritrocito en cuestión esta
sensibilizado”
Principios de la PAGH

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Los Anticuerpos son globulinas
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La inmunización de un animal genera la
producción de Anticuerpos anti globulina humana.
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Anticuerpos AGH reaccionan con al región FC
(cadenas pesadas de la IG) formando puentes
intercelulares.
PAGHD

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Objetivo:
– Evidenciar o detectar anticuerpos y componentes del
complemento sobre la membrana eritrocitria.
Como el mercado fabrica la Inmunoglobulina
específica anti humana .

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Inmunización animal. Conejo, caballo, cabras….
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Hibridomas (Linfocitos de ratón, estimulados y
fusionados en un mieoloma. Generando alta
velocidad en la producción de Anticuerpos
monoclonales.
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Poliespecífico.
– Anti Ig G, Anti C3d.

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Monoespecífico.
– IgG
– Anti C3d, C3b, C4b...
Diferencia entre monoclonales y poli

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Los anticuerpos son secretados por los linfocitos B.
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La representación clásica de un anticuerpo es una
molécula en forma de Y compuesta por cuatro
polipéptidos: dos cadenas pesadas y dos cadenas
ligeras. Cada punta de la “Y” contiene un parátopo que
es específica para un epítope particular en un antígeno,
lo que permite que estas dos estructuras se unan con
precisión.
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Estos anticuerpos se pueden clasificar en dos tipos de
anticuerpo primario: los monoclonal y los policlonales.
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Los anticuerpos policlonales son una mezcla heterogénea de anticuerpos
que generalmente son producidos por diferentes clones de células B.
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Pueden reconocer y unirse a muchos epítopos diferentes de un solo
antígeno.
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Los anticuerpos policlonales se producen inyectando un inmunógeno en
un animal. Después de ser inyectado con el antígeno específico para
provocar una respuesta inmune primaria, al animal se le administra una
segunda inmunización, e incluso una tercera… con el fin de producir
títulos más altos de anticuerpos contra el antígeno en concreto.
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Después de la inmunización, los anticuerpos policlonales pueden
obtenerse directamente del suero o purificarse para obtener una solución
que esté libre de otras proteínas séricas.
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Los anticuerpos monoclonales son generados por
células B idénticas que son clones de una sola
célula madre.
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Esto significa que los anticuerpos monoclonales
tienen afinidad monovalente y solo reconocen el
mismo epítopo de un antígeno.
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Se producen en cultivo celular. Hibridomas.
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Ventajas de los policlonales.

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Su coste es bajo y son relativamente rápidos de
producir (+/- 3 meses).
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Mayor afinidad contra el antígeno debido al
reconocimiento de múltiples epítopos.
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Posee una alta sensibilidad para detectar proteínas
que se encuentran en cantidades bajas.
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Alta capacidad para capturar la proteína diana (se
recomienda su uso en el anticuerpo de captura en un
ELISA tipo sándwich).
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Desventajas

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Variabilidad entre lotes (debido a que se producen
en diferentes animales y a diferente momento).
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Elevada posibilidad de reactividad cruzada debido
al reconocimiento de múltiples epítopos (los
anticuerpos purificados por afinidad muestran una
reactividad cruzada mínima)
Interpretar el resultado de una PAGHD
Resultados positivos en una PAGHD

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Auto anticuerpos contra antígenos específicos de la
membrana eritrocitaria. AHAI
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Aloanticuerpos presentes en el receptor de una
transfusión que reaccionan con los eritrocitos
transfundidos. Reacción tranfusional.
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Aloanticuerpos maternos que atraviesan la barrera
placentaria sensibilizando los eritrocitos fetales y
del RN. EHFN
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Anticuerpos relacionados con drogas.
Causas de PAGHD falsos positivos

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Activación del complemento in vitro al almacenar
a 4°C sin anticoagulante. Actividad Crioaglutinina.
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Fijación de Complementos en muestras
contaminadas, donde se extrajo sangre de vía
donde se infundió algún tipo de dextrosa.
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Gelatina de Warthon.
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Tubos sucios. Fibrina.
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Sobre centrifugación.
Causas de PAGHD falsos negativos.

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Lavado inadecuado, reacción con globulinas libres.
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Prueba diferida o interrumpida.
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Alteración de la SAGH (Contaminación, bacteriana,
almacenamiento inadecuado, etc).
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Alta concentración de paraproteínas puede inhibir
la SAGH.
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Centrifugación inadecuada.
Sensibilidad de la PAGHD

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En eritrocitos de 5 a 90moleculas de IgG x GR.
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En eritrocitos dañados, mas de 120 moléculas de IgG x
GR.
– Umbral variable de 100-500 moléculas de IgG.
– De 400 a 1100 moléculas de C3d.
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Variable:
– Característica del eritrocito.
– Característica del Ac. Sensibilizante.
– Característica de la SAGH.