Universidad Nacional de Trujillo

Curso de Bioquímica
Escuela Profesional de Farmacia y Bioquímica

FRACCIONAMIENTO SUBCELULAR: EXTRACCIÓN DE

BIOMOLÉCULAS

I. INTRODUCCION:

La fracción subcelular es un conjunto básico de métodos y técnicas de

laboratorio para separar partículas, generalmente células u orgánulos, de
acuerdo con sus propiedades biofísicas (por ejemplo, densidad de flotabilidad,
densidad de carga superficial, forma y tamaño) después de la
homogeneización (1,2).
El fraccionamiento subcelular tiene como objetivo obtener fracciones puras o
enriquecidas en un determinado compartimento celular. La separación se
realiza mediante diversos protocolos de centrifugación, donde variables como
la fuerza centrífuga y el tiempo determinarán la adquisición óptima de las
distintas fracciones de interés (1).
Esta técnica ha sido muy utilizada en biología celular y por ello tiene múltiples
aplicaciones, entre ellas tenemos: Identificación y caracterización de
orgánulos. Proporciona información sobre la estructura celular y la
organización funcional. reconocimiento de proteínas (3).

II. OBJETIVOS:

• Reconocer la importancia de la homogenización en las células eucariotas.

• Separar fracciones subcelulares del homogenizado de hígado de pollo
mediante la centrifugadora.
• Adquirir conocimiento de la utilización de los equipos de laboratorio, en este
caso de la centrífuga.
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III. MATERIALES:

- NaCl 0.154 M - Tubos de ensayo

- Tijera - Gradilla
- Jeringa - Centrifuga
- Algodón - Balanza
- Placa Petri - Embudo
- Vaso de precipitados

IV. PROCEDIMIENTO:

Primero se debe lavar el Luego inyectar NaCl

hígado de pollo y 0.154M hasta que
posteriormente expulse los residuos
colocarlo en una placa de sangre hasta quedar
Petri o en el Motero. de un color claro.

Posterior mente colocar los 2g Continuando con las

de muestra en la placa Petri y fracciones muy pequeñas se
cortarlo en fracciones muy procede a triturar con el
pequeñas. mortero.
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Apoyándose del embudo y Contrapesar para luego

algodón, se procede a filtrar el colocarlo en la centrifuga. A
homogeneizado para luego 2600 rpm durante 8’
colocarlos en tubos de ensayo.

Llevar por segunda vez a la Colocarlo en la

centrifugadora. A 3000 rpm centrifugadora a 3400 rpm
durante 12’. durante 15’.

Finalizando el procedimiento,
extraer los tubos de ensayos
para visualizar la fracción
celular.
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V. RESULTADOS:

1. Homogenización celular. 3. (3000rpm12min) Fracción mitocondrial

2. (2600rpm12min) Fracción nuclear. 4. (3400rpm) Fracción micro somática

VI. DISCUSIÓN:

• Fracción Nuclear: Vamos a medir la concentración de la muestra.

• Fracción mitocondrial: Vamos a medir las concentraciones de mitocondrias
y lisosomas.
• Fracción microsoma: Podremos visualizar los fragmentos de retículos
endoplasmático y membrana plasmática.
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VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFÍAS:

1. Baghirova S, Hughes BG, Hendzel MJ, Schulz R. Sequential fractionation and

isolation of subcellular proteins from tissue or cultured cells. MethodsX
[Internet]. 2015 [cited 2022 Jun 7];2:440–5. Disponible en:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4678309/
2. Fraccionamiento subcelular | Izasa Scientific [Internet]. Izasascientific.com.
2020 [cited 2022 Jun 7]. Disponible en:
https://www.izasascientific.com/es/fraccionamiento-
subcelular#:~:text=El%20fraccionamiento%20subcelular%20es%20un,carga%2
0superficial%2C%20forma%20y%20tama%C3%B1o.
3. GUIA by marco77pe - Issuu [Internet]. issuu.com. [cited 2022 Jun 7].
Disponible en:
https://issuu.com/marco77pe/docs/manual_de_pr_cticas__biologia__mtsc_19ee
5a0c8e4aa2
4. Lubert S., Bioquímica, Reverté, España, 1976.
5. González de Buitrago y col, Bioquímica Clínica, McGraw Hill, España, 1998,
1era. edición.
6. Murray R y col., Bioquímica de Harper. Manual Moderno, México, 1997, 14
edición.
7. Murray R. y col. Bioquímica de Harper Ilustrada, Manual Moderno, México,
2004, 16 edición.
8. Pesce I. Kaplan, Química Clínica, Panamericana, Argentina, 1990.

VIII. ANEXOS:

Solución Fisiológica Jeringa Mortero con pilón Hígado