Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
PRACTICA 4
CARACTERIZACION Y
CUANTIFICACION DE
CARBOHIDRATOS
Asignatura:
Bioquímica
Tema:
“Caracterización y cuantificación de carbohidratos”
Realizado por:
Sthefany del Rosario Martínez Gutiérrez.
Practicas:
2do B –Grupo 3
Horario:
Jueves 10:40 – 14:00 hrs.
Arequipa -Perú
2022
PRACTICA N° 4
CARACTERIZACION Y CUANTIFICACION DE CARBOHIDRATOS
INTRODUCCIÓN
Los oligosacáridos y los polisacáridos son carbohidratos complejos, los cuales al ser
calentados con ácidos diluidos o hidrolizados por enzimas, se desintegran en
monosacáridos. Los polisacáridos poseen una masa molecular muy elevada, son
insolubles en agua y la mayoría de ellos forman soluciones coloidales.
2
PARTE EXPERIMENTAL
1. REACCIONES DE RECONOCIMIENTO DE LOS CARBOHIDRATOS
OBJETIVO:
Determinar la presencia de carbohidratos mediante la formación de un anillo de color rojo.
Identificar la acción de los furfurales.
FUNDAMENTO
Esta reacción es general para los hidratos de carbono y se aplica para detectar su presencia en los
materiales biológicos. El ácido sulfúrico concentrado hidroliza enlaces glicosídicos para dar
monosacáridos que pueden ser luego deshidratados dando furfural a partir de pentosas y 5-
hidroximetilfurfural a partir de las hexosas. Estos productos se combinan luego con α-naftol sulfonato
originando un complejo púrpura o con timol dando una coloración roja.
Prácticas de Bioq
MATERIAL
o Tubos de ensayo
o Pipetas
o Gradillas
o Timol al 1% en alcohol etílico
o Ácido sulfúrico concentrado
o Soluciones al 1% de almidón, glucosa, maltosa,
sacarosa, etc.
METODO DE TRABAJO
En cada uno de los tubos de ensayo colocar 2.0 ml de solución de carbohidrato. Añadir 4 gotas
de -Naftol o Timol. Luego añadir, por las paredes del tubo, 2.0 ml de ácido sulfúrico concentrado
teniendo cuidado que no se mezcle con la capa acuosa. Lleve a baño en ebullición por 1 min, Retire y
observe en la interface la aparición de una coloración roja.
3
DATOS EXPERIMENTALES
Anote sus resultados en la siguiente tabla
CARBOHIDRATO OBSERVACIÓN
Glucosa
Se forma un anillo
que divide 2 fases, y
es aquí donde
reaccionan los
sulfúrales
Sacarosa
Se forma un anillo
que divide 2 fases, y
es aquí donde
reaccionan los
sulfúrales
RESULTADOS:
Los furfurales se forman por deshidratación del carbohidrato con el H2SO4
4
Los furfurales reaccionan con el Timol y el Naftol para dar un producto coloreado y asi determina la
presencia de carbohidratos.
INTERPRETACION:
Glucosa, Fructuosa, Galactosa (monosacárido), sacarosa (disacárido), almidón (polisacarido9 nos dieron
resultados positivos a pesar del tiempo que tarda en formarse.
CONCLUSION:
o El timol y el naftol son métodos cualitativos
EXPERIMENTO N° 2. REACCIONES
DE REDUCCION: PRUEBA DEL
HIDROXIDO CUPRICO.
OBJETIVO:
FUNDAMENTO
Los carbohidratos que en su molécula poseen un grupo carbonilo libre, se llaman reductores.
Estos azúcares, en un medio alcalino tienen la capacidad de oxidarse, reduciendo a su vez las sales
Prácticas de Bioq
de óxido cúprico (Cu+2) a sales de óxido cuproso (Cu+). Esta es la base para una serie de métodos de
determinación cualitativa y cuantitativa de carbohidratos. En solución alcalina los monosacáridos y
disacáridos reductores reducen el hidróxido cúprico (II) en óxido cuproso (I).
MATERIAL
Tubos de ensayo
Pipetas
Gradillas
Baño maría
Reactivo alcalino de cobre
Soluciones al 1% de almidón, glucosa, maltosa, sacarosa, etc.
METODO DE TRABAJO
En los tubos de ensayo vierta 2.0 ml de solución de carbohidratos; luego añada 2.0 ml del reactivo
de cobre y agite. Colocar en baño maría hirviente. La aparición de un precipitado de color rojo (óxido
cuproso) indica la presencia de carbohidratos reductores.
5
Además, comente la utilidad de la reacción en muestras biológicas
Determinar los azucares reductores tiene importancia clínica para detectar deficiencia de enzimas
intestinales como la lactosa debido a una deficiencia congénita o daños inespecíficos a la mucosa
(Moreano Pilatasig, 2015).
RESULTADOS:
Prácticas de Bioq
DISCUSIÓN
La reacción se basa en la reducción de Cu+2 a Cu+1 en un medio básico débil. Si bien es parecida a la
reacción de Fehling , el medio básico débil y el estabilizante que se usan hacen que el tets realizado,
Reactivo de Benedict, sea más sensible y estable.
CONCLUSION:
o El reactivo de benedict es un método cualitativo que permite reconocer azucares reductoras y no
reductoras.
6
2. HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN
EXPERIMENTO N° 3. HIDROLISIS
ACIDA DEL ALMIDON
OBJETIVO:
Demostrar la hidrolisis acida del almidón en dextrinas, por el método del lugol.
FUNDAMENTO
Durante el calentamiento del almidón con HCl diluido, este se descompone en fragmentos de
diferente tamaño llamados dextrinas. Estas se distinguen entre sí por la masa molecular y por el color
que dan en presencia de yodo. A continuación se da un esquema de la hidrólisis ácida del almidón:
Almidón + I2 Azul
Amilodextrinas + I2 Violeta azul
Eritrodextrinas + I2 Pardo rojiza
Acrodextrinas + I2 Incolora
Maltodextrinas + I2 Incolora
Maltosa + I2 Incolora
Glucosa + I2 Incolora
MATERIAL
Tubos de ensayo
Pipetas Prácticas de Bioq
Gradillas Baño
maría Almidón
al 1%
Solución de Lugol (20 gr de ioduro potásico y 10 gr de yodo en 100 ml de agua) Reactivo
alcalino de cobre
HCl concentrado
METODO DE TRABAJO
Vierta 10.0 ml de solución de almidón en un tubo de ensayo. Añada 0.5 ml de ácido clorhídrico
concentrado. Tomar 0.5 ml de la muestra y colocarla en 5.0 ml de agua destilada, agite y añada 1 gota de
lugol. Anote el color que aparece. Luego coloque la muestra en baño maría hirviente. Después de 10
minuto se toma una muestra para la reacción con yodo. Para esto se extrae 0.5 ml de solución y se vierte
en un tubo de ensayo que contiene 5.0 ml de agua destilada, se agita y se añade 1 gota de lugol. El color
azul violeta indica la presencia de amilodextrinas en la solución. Repita la misma operación cada 10
minutos, hasta que la prueba con lugol sea negativa.
Para comprobar que lo que ha quedado en el tubo es glucosa, tomar 2.0 ml de muestra y añadir
2.0 ml del reactivo de cobre. Colocar en baño maría hirviente hasta observar un precipitado rojo ladrillo.
7
DATOS EXPERIMENTALES
Anote sus resultados en la siguiente tabla:
DISCUSIÓN
La hidrolisis acida del almidón se basa en la ruptura del enlace glicosidico para dar D-glucosa. Para un
efecto mejor se usa el ácido clorhídrico que tiene una constante de velocidad de reacción mayor a la del Prácticas de Bioq
ácido sulfúrico en igual concentración (FERNANDEZ MATOS, 2008). Aunque dado a nuestros resultados
se logró determinar que dicha velocidad no es lo suficientemente rápida pues después de los 60 mins de
experimentación las soluciones tenían una coloración azul oscuro.
En el proceso de comprobación se logró observar una coloración naranja ladrillo que representa la
presencia de glucosa.
CONCLUSION:
o La hidrolisis acida rompe enlaces glicosidicos y da como resultado glucosa.
o La velocidad de reacción del hidrolisis acida es lenta.
8
EXPERIMENTO N° 4. HIDROLISIS
ENZIMATICA DEL ALMIDON
OBJETIVO:
Demostrar la hidrolisis acida del almidón en dextrinas, por el método del lugol.
FUNDAMENTO
Por acción de la amilasa el almidón se hidroliza para dar lugar al disacárido maltosa, que luego
se hidroliza por acción de la maltasa hasta glucosa.
MATERIAL
Tubos de ensayo
Pipetas
Gradillas Baño
maría Almidón
al 1%
Solución de Lugol (20 gr de ioduro potásico y 10 gr de yodo en 100 ml de agua) Reactivo
alcalino de cobre
Solución de saliva diluida (1:5)
METODO DE TRABAJO
Verter en un tubo de ensayo 5.0 ml de la solución de almidón; añadir 1.0 ml de solución de saliva
diluida. Tomar 0.5 ml de la muestra y colocarla en 5.0 ml de agua destilada, agite y añada 1 gota de
lugol. Anote el color que aparece. Luego coloque la muestra en baño maría a 37 °C. Después de 20
segundos se toma una muestra para la reacción con yodo. Para esto se extrae 0.5 ml de solución y se
vierte en un tubo de ensayo que contiene 5.0 ml de agua destilada, se agita y se añade 1 gota de lugol.
Se repita la misma operación cada minuto, hasta que la prueba de lugol nos dé negativa. Prácticas de Bioq
Para comprobar que lo que ha quedado en el tubo es glucosa, tomar 2.0 ml de muestra y añadir
2.0 ml del reactivo de cobre. Colocar en baño maría hirviente hasta observar un precipitado rojo ladrillo.
DATOS EXPERIMENTALES
Anote sus resultados en la siguiente tabla:
9
Además comente la utilidad de la reacción en
DISCUSIÓN
La hidrolisis enzimática del almidón se basa en la ruptura del enlace glicosidico para dar D-glucosa. Este
proceso a diferencia del hidrolisis acida es más controlable además de dar lugar a mayor pureza de producto,
sin olvidar la rapidez con la que actúa.
La enzima responsable de la ruptura del almidón es la amilasa, esta enzima actúa sobre as cadenas de
amilasa rompiendo los enlaces alfa 1,4 de las glucosas a partir de su extremo reductor.
CONCLUSION:
o La hidrolisis enzimatica rompe enlaces glicosidicos y da como resultado glucosa.
o La velocidad de reacción del hidrolisis acida es muy rápida.
OBJETIVO:
Determinar el ácido ascórbico presente en la orina
FUNDAMENTO
El ácido ascórbico es oxidado por el colorante 2,6-diclorofenolindofenol. Al mismo tiempo,
el colorante se reduce a un compuesto incoloro permitiendo determinar fácilmente el punto final de
la reacción. Además del ácido ascórbico otros compuestos pueden decolorar el pigmento, pero la
especificidad puede aumentar hasta cierto punto efectuando la reacción en solución ácida en la cual
las sustancias que interfieren reaccionan muy lentamente.
La determinación de ácido ascórbico nos puede determinar escorbuto haciendo una prueba de
saturación.
MATERIAL
Matraz
Pipetas
Bureta
Solución de 2,6-diclorofenolindofenol 1mM (pesar 32.6 mg de 2,6-diclorofenolindofenol y
disolverlo en agua destilada hasta 100 ml)
Solución patrón de ácido ascórbico (20 mg/ 1000 ml). (Prepárese en el momento de
usarse)
Acido acético glacial
Muestra de orina
METODO DE TRABAJO
10
Para colectar la muestra de orina, se indica al paciente que bebe realizarse una higiene de los
genitales, previa a la recolección de la muestra, para la cual se debe utilizar un frasco de boca ancha
(esterilizado).
En un matraz pipetear 0.5 ml de orina y agregar 4.5 ml de agua destilada (dilución 1:10), luego
agregar 0.5 ml de ácido acético glacial y titular con 2,6-diclorofenolindofenol hasta obtener un color rosa
estable. Anotar el volumen usado en la titulación (T). Repetir por lo menos dos veces.
Asimismo, titule dos tubos, usando para el blanco 5.0 ml de agua destilada (Bl) y 5.0 ml de
solución patrón de ácido ascórbico (Pt). Además, agregue a ambos 0.5 ml de ácido acético glacial y titule
como en el caso anterior.
DATOS EXPERIMENTALES
Anote sus resultados en la siguiente tabla:
Prácticas de Bioq
DISCUSIÓN
El ácido ascórbico es una vitamina hidrosoluble que se caracteriza por su facil degradación por cambios de
temperatura, radiación y concentración de oxigeno; por ello su experimentación debe ser realizada en un
medio acido con una cantidad mínima de radiación.
Dado nuestros resultados se logró identificar la presencia del ácido ascórbico en la orina por la coloración
rosada que daba al contacto con ácido acético, representando la forma oxidada en medio acido del reactivo
(Rojas, 1995).
11
CONCLUSION:
o Hay ácido ascórbico en la orina
o Se puede determinar la presencia de ácido ascórbico en la orina por el reactivo 2,6-diclorofenol
indofenol.
EXPERIMENTO N° 6.
DETERMINACION DE GLUCOSA
POR EL METODO DE TRINDER
OBJETIVO:
Determinar la glucosa por método Trinder
Comparar los niveles de glucosa
FUNDAMENTO
La reacción de Trinder (Trinder, 1969) ha sido ampliamente usada para determinar glucosa
enzimáticamente. Esta reacción involucra la oxidación de la glucosa en presencia de glucosa oxidasa a
ácido glucónico y peróxido de hidrógeno, y la formación de una quinonimina roja (4(p-benzoquinona-
imino) aminofenazona) por reacción del peróxido con 4-aminofeazona y fenol en presencia de
peroxidasa. La quinonimina formada se determina espectrofotométricamente a 505 nm.
Prácticas de Bioq
MATERIAL
Tubos de ensayo
Espectrofotómetro
Baño maría
Amortiguador de fosfatos 100 mmol/l pH 7.0. A 800 mL de agua destilada se agregaron
12.95 g de fosfato disódico dihidratado, 4.95 g de fosfato de potasio anhidro y 0.5 g de azida de
sodio. Los reactivos se disolvieron, se ajustó a un pH de 7.0 y la solución se llevó a un volumen
final de 1 L.
Reactivo de color. A 100 ml del amortiguador de fosfatos se añadieron 16 mg de 4- aminofenazona,
1,800 U de glucosa oxidasa (EC 1.1.3.4), 100 U de peroxidasa (EC 1.11.1.7), 105 mg de fenol y 50
µL de tween 20.
Solución estándar de glucosa 100 mg/dl
Muestra problema (Suero)
METODO DE TRABAJO
A 1.0 ml de reactivo de color se adicionaron 10 µl de suero, estándar o agua para preparar los
12
problemas, estándares o blanco respectivamente. Las mezclas de reacción se incubaron durante 10 min a
37°C y se realizaron las lecturas espectrofotométricas de los problemas y estándares a 510 nm,
calibrando el espectrofotómetro contra el blanco de reactivos.
DATOS EXPERIMENTALES
Anote sus resultados en la siguiente tabla:
TUBO Absorbancia
Muestra 1 1,789
Muestra 2 0.820
Estándar 0.868
MUESTRA 1: MUESTRA 2:
1.789 0.820
x 100=206,106 x 100=94,470
0.868 0.868
Prácticas de Bioq
De acuerdo a Medical Corporation los valores normales de glucosa deben ir entre 70 -105 mg/dl , siendo
la muestra dos la que se encuentra entre estos rangos.
Las enfermedades por almacenamiento de glucógeno (glucogenosis) son trastornos del metabolismo de los
carbohidratos que se producen cuando existe un defecto en las enzimas involucradas en el metabolismo del
glucógeno y suele dar lugar a anomalías del crecimiento, debilidad, agrandamiento del hígado,
concentraciones bajas de glucosa en sangre y confusión.
DISCUSIÓN
Reaccion enzimatica en el método de Trinder
13
CONCLUSION:
o Se puede determinar cuantitativamente la glucosa mediante el método de trinder.
CUESTIONARIO
14
Bibliografía
Campos, R. M. (2020). VITAMINA C: Funciones en el organismo y fuentes alimentarias. Repositorios
ibero puebla. Obtenido de
http://repositorio.iberopuebla.mx/bitstream/handle/20.500.11777/4761/VITAMINA%20C
%20Funciones%20en%20el%20organismo%20y%20fuentes%20alimentarias.pdf?
sequence=1&isAllowed=y
David A. Bender, P., & Peter A. Mayes, P. D. (2022). CAPÍTULO 18: Metabolismo del glucógeno.
ACCESS-Medicina. doi:190.236.76.127
FERNANDEZ MATOS, C. N. (2008). "DEGRADACION DEL ALMIDON DE MAIZ AMILACEO (ZEA
MAYS AMILÁCEO VARIEDAD BLANCO CUZCO) POR HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA
UTILIZANDO LA AMILOGLUCOSIDASA PARA LA OBTENCIÓN DE GLUCOSA. Obtenido
de https://repositorio.uncp.edu.pe/bitstream/handle/20.500.12894/218/T-08_14.pdf?
sequence=1&isAllowed=y
HURTADO, D. S. (2015). DETERMINACIÓN DE LA COMPOSICIÓN QUÍMICA PROXIMAL,
CARBOHIDRATOS TOTALES, AZÚCARES LIBRES Y FRUCTANOS DEL TIPO INULINA –
FRUCTOOLIGOSACÁRIDOS DEL YACÓN (Smallanthus sonchifolius(Poepp. et Endl.) H.
Robinson). UNIVERSIDAD PERUANA CAYETANO HEREDIA. Obtenido de
https://190.116.48.43/bitstream/handle/20.500.12866/668/Determinaci%c3%b3n%20de%20la
%20composici%c3%b3n%20qu%c3%admica%20proximal%2c%20carbohidratos%20totales%2c
%20az%c3%bacares%20libres%20y%20fructanos%20del%20tipo%20inulina%20-
%20fructooligosac%c3%a1rid
Lita, J. Y. (2017). Estudio comparativo de los Métodos Fenol- Ácido Sulfúrico y Antrona para determinar la
pureza de dos almidones; usando muestras de almidon de maíz (Zea mays) y papa (Solanum
tuberosum). UNIVERSIDAD SAN FRANCISCO DE QUITO, 79. Obtenido de
https://repositorio.usfq.edu.ec/bitstream/23000/6767/1/132533.pdf
Medica Corporation. (s.f.). Glucosa-trinder. Obtenido de
http://www.labindustrias.com/web/wp-content/uploads/2018/01/GLU-T-Glucosa-Trinder.pdf
QUIMICA.ES . (s.f.). Glucogeno. Obtenido de https://www.quimica.es/enciclopedia/Gluc Prácticas de Bioq
%C3%B3geno.html#:~:text=La%20enzima%20gluc%C3%B3geno%20fosforilasa%20va,glucosa
%20sobrante%20en%20la%20reacci%C3%B3n.
Rojas, A. M. (1995). Destrucción de vitamina C en sistemas modelo de actividad acuosa reducida. FCEN-
UBA. Obtenido de https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n2771_Rojas.pdf
15