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FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

Bioquimica I
Práctica N°3
EXTRACCION DE OLIGOFRUCTANOS E IDENTIFICACIÓN DE
CARBOHIDRATOS

Sección y Grupo:
FB6M1-A
Docente:
Q.F. Rita Guevara Vicaña
Integrantes:
 Calderon Curi, Adira
 Chinchayan Ospina, Axel
 Del Castillo Purizaca, Cecilia
 Huamaliano Melendez, Stefany
 Medina Bellido, Diana
 Rivera Leon, Daniela

Ciclo: Turno:
VI Mañana

2019
1. INTRODUCCIÓN:
La Polymnia sonchifolia, especie de la familia Asteraceaea originada en los
valles andinos de nuestra América del Sur, almacena en sus órganos
subterráneos grandes cantidades de fructo-oligosacáridos del tipo inulina.
Estos glúcidos han despertado el interés en la industria alimentaria, por ser
considerados alimentos funcionales que actúan en el aumento de bífido
bacterias benéficas en el intestino. También, son compuestos que presentan un
bajo valor calórico (1-3 Kcal/g) y de gran poder edulcorante, siendo una
excelente alternativa para la sacarosa en dietas especiales, por ejemplo, para
pacientes diabéticos. Los fructo-oligosacáridos (OFS) tienen un efecto
favorable en la disminución de los niveles del colesterol y triglicéridos en la
sangre de personas de mediana edad. En Brasil tanto las raíces tuberosas
como las hojas de yacón son usadas en forma natural o deshidratada, contra la
diabetes.
Los compuestos de las raíces del yacón contienen un gran poder antioxidante,
también poli fenoles como el ácido cloro génico y varios fenoles derivados del
ácido cafeico. Otros compuestos reportados con actividad antioxidante son la
quercetina, el ácido ferúlico y el ácido gálico, aunque encontramos
concentraciones de poli fenoles en la raíz, la concentración es mucho mayor en
las hojas.
Finalmente, en nuestra práctica identificaremos la presencia de glúcidos
contenidas en la raíz tuberosa del yacon, utilizando los reactivos
correspondientes de Molisch, Benedict y Selivanoff para determinar
carbohidratos en general y también si es una aldosa o cetosa.
2. MARCO TEÓRICO:
2.1. COMPOSICIÓN QUÍMICA:
El yacón es una raíz tuberosa, con alto contenido de agua que varía entre
80 a 90% del peso fresco. Los carbohidratos son los componentes
principales del yacón; acumula hasta el 90% en base seca, de los cuales
los fructooligosacaridos (se incluye inulina) se encuentran entre 40 y 70%
en base seca. Los otros carbohidratos que la conforman son glucosa
(menos del 5%), fructuosa (5 a 15%) y sacarosa (hasta 15%). A diferencia
de la gran mayoría de raíces comestibles, el yacón no almacena almidón,
los valores mencionados tienden a variar ya que las composiciones de los
diferentes azúcares dependen de varios factores como la siembra y la
cosecha. El contenido de lípidos y proteínas es bajo representando de 2.4
% a 4.3% y 0.14 % a 0.43% del peso en materia seca respectivamente El
mineral más abundante es el potasio, en promedio se puede encontrar
230mg por 100 g de materia fresca comestible, en menores cantidades se
encuentran hierro y magnesio. Las raíces también contienen compuestos
con alto poder antioxidantes como poli fenoles entre ellos como el ácido
cloro génico y varios fenoles derivados del ácido cafecito.
2.2. FRUCTANOS:
Son un gran grupo de carbohidratos de reserva. Químicamente los
fructanos son cadenas de fructuosa que pueden estar unidas a la
molécula de glucosa. La estructura de los fructanos y oligosacáridos es
generalmente abreviado como GFn o Fn donde G indica las unidades de
glucosa y F las unidades de fructuosa. El número de unidades de
glucosa/fructuosa es el grado de polimerización (DP) y pueden variar
según de dónde provengan (plantas, hongos y bacterias). Existen varios
tipos de fructanos en la naturaleza; estos tipos de fructanos se pueden
diferenciar por los tipos de enlaces característicos con la fructuosa. Los
tipos de inulina, son los más conocidos y comunes, son de cadena lineal
donde las unidades de fructuosa están unidas por enlaces β-(2➟1)
fructosil fructuosa. Este tipo de fructanos son muy comunes en plantas
como agave, chicoria, raíces de dahlia, alcachofas y yacón y finalmente
los gramíneos o mixtos, este tipo de fructanos tienen ambos tipos de
enlaces β-(2➟1) y β-(2➟6) fructosil fructuosa y pueden presentar
ramificaciones. Este tipo de fructanos los podemos encontrar
comúnmente en hongos.

2.3. IDENTIFICACION DE GLUCIDOS


2.3.1. Ensayo de Molisch: Este ensayo es para identificar en
forma general los carbohidratos en el que los polisacáridos y
disacáridos se hidrolizan.

Es decir, la reacción de la fructuosa con el H2SO4 concentrado,


forma un furfural o un derivado del furfural, que se reconoce con el
α-naftol por formación de un color purpura violeta, el H 2SO4
concentrado descompone el carbohidrato presentándose una
hidrolisis en los enlaces glucosidicos. Este tipo de reacción es de
adicción nucleofilica y de tipo SN1.

2.3.2. Ensayo de Benedict:

Este ensayo permite el reconocimiento de carbohidratos


reductores, al igual que el reactivo de Felhing. Este reactivo forma
el complejo cúprico, desapareciendo el color azul intenso, por un
color rojo ladrillo, resultando positivo para este ensayo, el ion
cúprico en medio alcalino se reduce hasta óxido cuproso en
presencia de azúcares con el hidroxilo hemiacetálico libre. La
sacarosa es la union por los dos extremos reductores de glucosa
y la fructosa, por lo tanto no se podra efecturar esta reduccion del
ion .

2.3.3. Ensayo de Selivanoff:

Este ensayo es específico para cetosas y se basa en la


conversión de la cetosa, en 5-hidro-metil-furfural y su posterior
condensación con resorcinol formando así complejos coloreados.
Tanto las aldosas como las cetosas en presencia de ácidos,
minerales y en un medio caliente sufren procesos de
deshidratación, lo cual da como producto uh anillo pentagonal de
furfural o hidroximetilfurfural, según sea el monosacárido pentosa
o hexosa, los furfurales se condensan resultando una coloración
roja. Las cetosas se deshidratan más rápido que las aldosas lo
cual permite en esta prueba la fructosa al ser una cetohexosa da
como resultado positivo,en cuanto a la sacarosa tambien da
positivo si se deja correre el tiempo adecuado para que se efectue

la hidrolidis acida en donde la sacarosa libera fructosa.

3. OBJETIVOS:

 Extrae oligofructanos del jugo del yacon


 Identifica los carbohidratos con los diferentes reactivos.
 Explica el fundamento de reconocimiento de los reactivos.

4. PROCEDIMIENTO:

 Obtuvimos el extracto de yacon triturándolo en un mortero y se


diluyó con agua, se agitó por 15 min a 80 ºC. Se enfrió y se
aforó a 100 mL con agua destilada. Se filtró y se guardó
rotulándolo como muestra E
Reacción con el reactivo de Lugol: esta prueba es utilizada para
identificar polisacáridos.
Tuvimos de guía una tabla para comparar con otras sustancias.
A B C D E
mL Muestra A 0,5 -- -- -- --
mL Muestra B -- 0,5 -- -- --
mL Muestra C -- -- 0,5 -- --
mL Muestra D -- -- -- 0,5 --
mL Muestra E -- -- -- -- 0,5
mL HCl 0,5 N 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
mL Rvo. de Lugol 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2

Una vez obtenidos todos los contenidos en los respectivos tubos


procedimos a llevarlos a baño maría por 5 minutos, evaluamos el
color y precipitación en los tubos de ensayo

 Si las muestras Son: galactosa, maltosa, sacarosa proteína, almidón.


Indique según resultado que carbohidratos corresponde a cada muestra.
Reacción de Molish.
Colocar 2 mL de muestra problema. Luego adicionar 2 gotas de reactivo de
Molish, mezclar. Lentamente deslizar por las paredes del tubo, 1 mL. de ácido
sulfúrico concentrado, (reacción exotérmica). La formación de un anillo de color
violeta o púrpura indica presencia de glúcidos.
Reacción de Benedict.
Depositar 2.5 mL de Reactivo de Benedict, calentar hasta ebullición por 2
minutos. Si no hay cambio de color se adicionan 5 gotas de Muestra
problema, luego se coloca en B.M. hirviente durante 3 minutos, luego se deja
enfriar. La aparición de una coloración o, precipitado, amarillo anaranjado o
rojo, indica presencia de glúcidos reductores.
Reacción de Selivanoff. En un tubo de prueba se coloca 3 mL de
solución clorhídrica de resorcinol y 6 mL de Muestra problema. Luego se
coloca en Baño de María hirviente por unos minutos. El desarrollo inmediato
de una coloración anaranjado rojizo indica presencia de pentosas.

5. RESULTADOS:

REACTIVO
IM
MUESTRAS HCL 0,5 N
DE LUGOL RESULTADO
La galactosa es un monosacárido
formado por seis átomos de carbono o
hexosa, que se convierte en glucosa en
el hígado y como el lugol solo identifica
polisacáridos la reacción es negativa,
MUESTRA A ya que además dio una coloración
0,2 0,2 mL anaranjada
(GALACTOSA)
Como sabemos la sacarosa está
formada por la unión de un anillo de
glucosa y un anillo de fructuosa, y
como sabemos el lugol solo identifica
MUESTRA B polisacáridos por tanto la reacción es
0,2 mL 0,2 mL negativa, ya que además dio una
(SACAROSA) coloración anaranjada intensa.

Como sabemos la maltosa es un


disacárido formado por dos glucosas, y
el lugol solo identifica polisacáridos por
tanto la reacción es negativa, porque la
coloración es anaranjada.
MUESTRA C
0,2 mL 0,2 mL
(MALTOSA)

La reacción es positiva y la coloración


producida por el Lugol se debe a que el
yodo se introduce entre las espiras de
la molécula de almidón. No es por
MUESTRA D tanto, una verdadera reacción química,
0,2 mL 0,2 mL sino que se forma un compuesto de
(ALMIDON) inclusión que modifica las propiedades
físicas de esta molécula, apareciendo
la coloración azul-violeta al dejar de
absorber la luz violeta.
MUESTRA E El extracto de yacon dio un precipitado
color naranja, pero como sabemos el
0,2 mL 0,2 mL
(EXTRACTO DE lugol solo identifica polisacáridos por
YACON) tanto es negativa.

REACCIONES PROCEDIMIENTO RESULTADO IMAGENES

La reacción es
Se coloca 2 ml del positiva ya que
extracto de yacon se obtuvo La
obtenida, luego se formación de un
adiciona 2 gotas del anillo de color
MOLISH reactivo de molish, violeta o lo cual
mezclar. Por las indica presencia
paredes del tubo, se de glúcidos.
agrega 1 ml de ácido Además la
sulfúrico reacción es
exotérmica
Se deposita 2.5 mL La reacción es
de Reactivo de positiva ya que
Benedict, calentar se observó la
hasta ebullición por 2 aparición de
BENEDICT minutos. Como no una coloración
hubo cambio de o, precipitado,
coloración se amarillo
adicionan 5 gotas del anaranjado, lo
extracto de Yacon cual indica
obtenido, luego se presencia de
coloca en B.M. durante glúcidos
3 minutos. reductores.

La reacción es
positiva ya que
En el tubo de prueba se observó la
se colocó 3 mL de aparición de
solución clorhídrica de una coloración
resorcinol y 6 mL del inmediata de
extracto de yacon. color
SELIVANOFF Luego se coloca en anaranjado
Baño de María rojizo con
hirviente por unos ligeras
minutos. partículas, lo
cual Indica
presencia de
pentosas.

6. CUESTIONARIO:
a. Explique el fundamento del método de Benedict.

b. Indique dos métodos químicos para reconocer azucares reductores


7. CONCLUSIONES:

 C

8. BIBLIOGRAFÍA:

 MARSHALL J. Bioquímica Clínica. Séptima Edición.Editorial ELSEVIER;


2013.

 MATHEWS C, VAN HOLDE A. Bioquímica. CUARTA Edición. Editorial


Addison Wesley ; 2013.

 LAGUNA J, PIÑA E. Bioquímica. Septima Edicion. Editorial Manual


Moderno; 2013.

 LEHNINGER. Principios de Bioquímica. Sexta Edición. Editorial Omega;


2014.

 LIEBERMAN M. Bioquímica, biología molecular y genética. Sexta


edición. Editorial Wolters Kluwer. Barcelona; 2014.

 MCKEE T. Bioquímica. Quinta Edición. Editorial Mc Graw - Hill


Interamericana. Madrid-España. 2014.

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