Aplicaciones de los

cultivos celulares
vegetales.
Aplicaciones
 Producción de metabolitos secundarios
 Conservación de germoplasma
 Obtención de plantas libres de virus
 Producción de haploides
 Multiplicación de especies leñosas
 Obtención de plantas transgénicas
Producción de metabolitos secundarios por
los cultivos celulares:
 Incluyen: alcaloides, terpenoides, esteroides,
antocianinas, antraquinonas, y simple o
polifenoles.
 Históricamente:
- Considerados no esenciales.
- Sintetizados por ramificaciones de las rutas
metabólicas primarias.
- Sin función clara.
- Limitados en su distribución tanto en la
planta como en las distintas especies.
- Confieren ventaja selectiva a la planta.
Triosas Fosfato
Cultivo de células vegetales en
Biorreactores
 Los cultivos de células vegetales en biorreactores ofrecen un gran
potencial para la producción de metabolitos secundarios, con
importantes aplicaciones en la industria química, farmacéutica o
alimenticia.
 Los biorreactores para el cultivo de células vegetales pueden
clasificarse en tres grandes grupos dependiendo del tipo de cultivo:

células en suspensión,
células inmovilizadas
reactores de biopelícula

Técnicas de Propagación vegetativas: In vivo e

In vitro
 Estrategias para incrementar la productividad en
sistemas de cultivo in vitro

Nutrientes
Condiciones de cultivo
pH
•Optimización del medio de cultivo y parámetros físico-químicos Tª,luz,HR,
aireación y
agitación

•Adición de precursores o intermediarios biosintéticos

•Adición de elicitores

•Extracción continua del producto (biorreactores)

Selección líneas celulares productivas y adaptadas a cultivo en biorreactores:

Elevado nivel de producción/biomasa/día
 Elicitación
“Inducción o aumento de la biosíntesis de metabolitos
debido a la adición de pequeñas cantidades de
elicitores”

Elicitor: factores o moléculas de diverso origen que

introducidas en pequeñas concentraciones en un
sistema celular vivo, son capaces de perturbar el
metabolismo, incrementando la producción de un
metabolito en particular
 USO COMBINADO DE CICLODEXTRINAS Y JASMONATO DE
METILO PARA INCREMENTAR LA PRODUCCIÓN DE ALCALOIDES
INDÓLICOS: P2008-02437

METHYLJASMO
NATE
β-
CD

INDOLALCALOIDES
 Secondary Extracellular
metabolites proteins
production analysis

Fucosterol Peroxidases
Taraxasterol PRs
Β-sitosterol Endochitinases
Xyloglucan-specific fungal
endoglucanase inhibitor protein
WO2010/049563
 Resveratrol

callo Biorreactores Piloto

20-50L y producción
>500L

Biorreactor 2L

Suspensión
celular
 Producción de metabolitos secundarios por
los cultivos celulares:
 Importancia biotécnológica:
- Químicos.
Aplicación como químicos: drogas,
sabores, perfumes, pigmentos y agroquímicos.
- Toxicidad.
- Agentes protectores.
 Problemas: acumulación en bajos niveles.
 Factores importantes:
- Heterogeneicidad e inestabilidad de
expresión génica.
- Producción de metabolitos inversamente
proporcional a la tasa de células en división.
 Aplicaciones de los metabolitos secundarios
PRODUCTO USO PLANTA REFERENCIA

Acido Ind. química Coleus blumei Rosevear, (1984)

rosmarínico
Ajmalicina Antihipertensivo Catharanthus roseus Asada and Shuler, (1989)

Sikonina Antibacterino Lithospermum erythrorhizon Tabata and Fujita, (1985)

Berberina Analgésico intestinal Coptis japonica Matsubara et al., (1989)

Piretrina Insecticida Chrysanthemum cinerariasfolium Uchio et al., (1981)

Codeína Sedante P. somniferum Furuya et al., (1972)

Escopolamina Antihipertensivo Datura stramonium Evans and Partridge, (1953)

Mentol Aromatizante Mentha spp. Leung and Foster, (1996)

Digitoxina Estimulante cardíaco Digitalis lanata and purpurea Alfermann et al., (1980)

Vainilla Aditivo alimenticio Vanilla planifolia Dornenburg and Knorr, (1996)

Diosgenina Precursor esteroidal Dioscorea deltoidea Sahai and Knuth, (1985)

Sanguinarina Antiplaquetario Sanguinaria canadensis

Papaver somniferum
Duke, (1985)

Morfina Sedante Spirulina platensis Ramachandra Rao and Ravinshakar, (1999)

Taxol Anticancerígeno Taxus baccata Cusidó et al., (1999)

Capsicina Insecticida y Capsicum frutescens

Capsicum annuum
Lindsey and Yeoman, (1984)
Johnson et al., (1990)
saborizante
Aplicaciones
 Producción de metabolitos secundarios
 Conservación de germoplasma
 Obtención de plantas libres de virus
 Producción de haploides
 Multiplicación de especies leñosas
 Obtención de plantas transgénicas
Técnicas de propagación vegetativa in vitro

 Conservación de germoplasma in vitro

 La conservación de germoplasma mediante el cultivo de
tejidos se basa en la limitación del crecimiento del material
vegetal.

OBJETIVO:
Conservar, con la mayor integridad posible, la variabilidad
genética de las poblaciones seleccionadas
 Técnicas de propagación vegetativa in vitro

 i) El almacenamiento a baja temperatura sin congelación (1-

9°C), en nevera, lo cual ralentiza su crecimiento al tiempo que
no compromete su viabilidad.
 ii) La criopreservación para mantener a largo plazo
suspensiones celulares, ápices caulinares, embriones
asexuales e incluso plántulas jóvenes. Para ello hay que tratar
primero el explante con un agente crioprotector, y después
congelarlas y almacenarlas a la temperatura del nitrógeno
líquido (-196°C).
 iii) El mantenimiento de explantes en cultivo in vitro a los que
se les puede añadir compuestos que retrasan el crecimiento,
como por ejemplo la hidracida maleica, el B995 o el ácido
abscísico
Aplicaciones
 Producción de metabolitos secundarios
 Conservación de germoplasma
 Obtención de plantas libres de virus
 Producción de haploides
 Multiplicación de especies leñosas
 Obtención de plantas transgénicas
Eliminación de virus y patógenos:
 Sencillo eliminar la mayoría de patógenos menos
los virus.
 Los virus son patógenos intracelulares por lo que su
erradicación se dificulta, existiendo diferentes
metodologías para combatirlos:
 Termoterapia, quimioterapia y electroterapia (seguido o no de cultivo
de meristemos)
 Microinjerto
 Cultivo celular
 Cultivo de meristemos

 Los virus pueden propagarse desde las plantas,

clones y semillas.
 La distribución es irregular pocos en los
meristemos.
Cultivo celular
 Callos y protoplastos.

 Tras una serie de subcultivos, los

callos pueden quedar libres de
patógenos (las células
meristemáticas son más resistentes
y tienen una tasa de división muy
alta).

 Limitaciones a gran escala

(individuos clónicos, grandes
alteraciones,etc.).
 Papel de los mCeurlisttiv
eo
modseem
n elrcisutletim
vooisn vitro

 Razones por las que los meristemos

suelen tener pocos o ningún virus:

- sistema vascular poco diferenciado

- elevada actividad metabólica

- elevadas concentraciones de auxinas

Aplicaciones
 Producción de metabolitos secundarios
 Conservación de germoplasma
 Obtención de plantas libres de virus
 Producción de haploides (ver vídeo)
 Multiplicación de especies leñosas
 Obtención de plantas transgénicas
Producción de haploides por cultivo de
anteras y ovarios:
 Usados para la producción de plantas.
- Producción rápida de líneas
homozigóticas que duplican los cromosomas.
- Detección y selección de mutantes
recesivos.
 Ocurre naturalmente en algunas especies.
 Regeneración de plantas desde anteras,
granos de polen inmaduro y óvulos.
 Mejor el uso de microesporas que de óvulos.
Aplicaciones
 Producción de metabolitos secundarios
 Conservación de germoplasma
 Obtención de plantas libres de virus
 Producción de haploides
 Multiplicación de especies leñosas
 Obtención de plantas transgénicas
 Recombinant DNA (or
GM) allows a single
gene to be introduced
into a genome. This
method can be faster
than conventional
breeding

Elite tomato Disease resistant

plant (need not be
same species)

Elite, disease resistant tomato

© 2013 American Society of Plant Biologists

Transgénicos en el mundo:
Agrobacterium tumefaciens
• Bacteria Gram - presentes en el suelo.
• Infecta a dicotiledóneas y gimnospermas (y alguna
monocotiledónea).
• Se une al tallo o a la raíz y da lugar a la formación de
tumores (agallas de la corona).

1947: Cultivo de tumores in vitro carente de

hormonas.
La bacteria introducía el principio tumorígeno.
1965: 1ª Visión de la síntesis de intermediarios
metabólicos por las células tumorígenas. Se
denominaron opinas.
1974: Se observa la transferencia de plásmidos por
conjugación.
Cepas virulentas  No virulentas
Crown gall disease and the tumor-inducing
principle
The first written record of
crown gall disease, on
grape, dates from 1853

Fridiano Cavara
(1897) found that a
bacterium causes
crown gall in grape

Crown gall induces growths at

wound sites and severely limits
crop yields and growth vigor

Edward L. Barnard, Florida Department of Agriculture and Consumer Services, Bugwood.org; Mike Ellis, Ohio State University; University
of Georgia Plant Pathology Archive, University of Georgia, Bugwood.org; Wikimedia commons
 “A 1907:
plantCrown
tumorgallof
is bacterial
caused by a
origin” bacterium
1907 - Erwin Smith and C.O.
Townsend isolated a bacterium
from galls on daisy. When
inoculated onto other plants,
galls were produced

gall
gall

Smith, E.F. and Townsend, C.O. (1907). A plant-tumor of bacterial origin. Science. 25: 671-673.
Agrobacterium-induced galls do not
require bacterial persistence

Gall tissues without any bacteria

can persist indefinitely in culture,
in contrast with most other
pathogen-induced neoplastic
growths that require the presence
of the pathogen

Braun made fundamental

discoveries about how
Agrobacterium
transforms plant cells Armin C. Braun
1911 - 1986

White, P.R. and Braun, A.C. (1941). Crown gall production by bacteria-free tumor tissues. Science. 94: 239-241; Photo from Wood, H.N., and Kelman, A. (1987) Phytopathology 77: 991.
 Gall tissues can grow indefinitely
without exogenous phytohormones
Auxin
CK
1930s – 1950s,
numerous studies High levels of auxin
and cytokinin are found
in gall tissues

“It is possible for a cell to

acquire the capacity for
Normal plant Normal plant tissue autonomous growth as a result
Crown gall tissue of the permanent activation of
tissue cannot live grows and survives
grows well growth-substance-synthesizing
indefinitely in when auxin and
without added systems”
hormone-free cytokinin (CK) are
hormones
medium added to medium
-AC Braun, 1958

Braun, A.C. (1958) A physiological basis for autonomous growth of the crown-gall tumor cell. Proc Natl Acad Sci U S A. 44: 344–349.
 Unusual compounds called opines are
found in many crown galls
The type of opine is determined by the bacterium, not the plant!

Questions raised:
• What are these compounds?
• Do they cause the tumors?
• How and why do the
Octopine-
Octopine bacteria cause the plants to
utilizing
strain make opines?

Nopaline- Nopaline
utilizing
strain 1960s – 1970s,
numerous studies
A few days after inoculation, tumors
become independent of bacteria
When the tissue was
incubated at room
temperature for one
day before heat-
killing the bacteria, no
tumors were formed
Periwinkle (Catharanthus roseus)
stems were inoculated with
When the tissue was
Agrobacterium tumefaciens, and
incubated at room
then incubated at room
temperature for four
temperature for various times,
days before heat-killing
followed by 5 days at 47°C to
the bacteria, many
kill the bacteria
tumors were formed

Viable bacteria are no longer necessary beyond two days post-inoculation. After this period,
tumors become independent of the bacteria, because the bacteria have altered the host
cells, by transferring some factors into them.
Braun, A.C. (1943) Studies on tumor inception in the crown-gall disease. Am. J. Bot. 30: 674-677
Braun called this factor the
tumor inducing principle

time
“The active principle …is responsible for the
conversion of normal cells to neoplastic cells”

“It may be

(1) a metabolic product of the crown-gall bacterium;

(2) a normal host constituent that is converted by the bacteria into a tumor-inducing
substance;

(3) a chemical fraction of the bacterial cell that is capable of initiating, as in the case of the
transforming substance (DNA) of the pneumococci, a specific alteration in the host cell;
or
(4) a virus or other agent which is present in association with the crown-gall organism”
Braun, A.C. (1947). Thermal studies on the factors responsible for tumor initiation in crown gall. Am. J. Bot. 34: 234-240.
 Braun’s work shortly followed that of
Avery, MacLeod and McCarty
Avery, MacLeod and McCarty
showed in 1944 that non-
pathogenic bacteria were
transformed by the DNA from
heat-killed pathogenic bacteria.
The parallels to the
transformation of plant cells by
Agrobacterium were clear, but
it took many more years to
show conclusively that a similar
mechanism is involved.

Drawing courtesy of Madeline Price Ball: Avery, O., MacLeod, C., and McCarty, M. (1944), Studies on the chemical nature of the substance inducing transformation of pneumococcal types. J. Exp. Med. 79: 137-158.
Virulence can be transferred from one
Agrobacterium to another
Virulence can be transferred by transfer of isolated DNA or bacterial conjugation

A
+ B
DNA
Virulent
B
Agrobacterium Virulence transferred
A by naked DNA (Klein tumor
tumor and Klein, 1953)

A Virulence transferred
Avirulent + time in planta, later
Agrobacterium shown to be due to
B
conjugation of Ti
B plasmid (Kerr, 1969)
No
tumor Co-inoculation
of virulent and A B
avirulent strains

Klein, D.T. and Klein, R.M. (1953). Transmittance of tumor-inducing ability to avirulent crown-gall and related bacteria. J. Bacteriol. 66: 220-228.;
Kerr, A. (1969). transfer of virulence between isolates of Agrobacterium. Nature. 223: 1175-1176.
 A large plasmid in gall-inducing
Agrobacterium transfers virulence
Virulent A very large
plasmid was Heat treatment tumor
identified that is removes plasmid heat
present in virulent and makes bacteria
Avirulent
but absent from non-pathogenic
avirulent strains No
tumor

A plasmid Virulent
carrying a genetic + time
tumor
marker (antibiotic
resistance) was Avirulent
shown to be
transferred along tumor
with virulence

Zaenen, I., van Larebeke, N., Teuchy, H., van Montagu, M. and Schell, J. (1974). Supercoiled circular DNA in crown-gall inducing Agrobacterium strains. Journal of Molecular Biology. 86: 109-127. Larebeke, N.V., Engler, G.,
Holsters, M., Den Elsacker, S.V., Zaenen, I., Schilperoort, R.A. and Schell, J. (1974). Large plasmid in Agrobacterium tumefaciens essential for crown gall-inducing ability. Nature. 252: 169-170. Van Larebeke, N., Genetello, C.H.,
Schell, J., Schilperoort, R.A., Hermans, A.K., Hernalsteens, J.P. and Van Montagu, M. (1975). Acquisition of tumour-inducing ability by non-oncogenic agrobacteria as a result of plasmid transfer. Nature. 255: 742-743.
 Some DNA from the Ti plasmid is
transferred into the plant cells (1977)
Renaturation kinetics of
Restriction labeled plasmid DNA
enzyme fragments with various
Ti plasmid digestion
unlabeled DNA samples
The key finding
was that Ti Neg. control
(untransformed
plasmid DNA plant DNA)
anneals with DNA from
DNA isolated crown gall
from the crown
gall, meaning Pos. controls
(Ti plasmid)
that the gall
contains Ti DNA
“Our results suggest that the tumor- Increasing amounts of
inducing principle first proposed by Braun labeled Ti plasmid DNA
(1947) is indeed DNA, as many
investigators have long suspected.”

Reprinted from Chilton, M.-D., Drummond, M.H., Merlo, D.J., Sciaky, D., Montoya, A.L., Gordon, M.P. and Nester, E.W. (1977). Stable incorporation of plasmid DNA into higher plant cells: the molecular basis of crown gall tumorigenesis.
Cell. 11: 263-271. with permission from Elsevier. See also Yadav, N.S., Postle, K., Saiki, R.K., Thomashow, M.F. and Chilton, M.D. (1980). T-DNA of a crown gall teratoma is covalently joined to host plant DNA. Nature. 287: 458-461.
Structure and function analysis of the Ti
plasmid
Transfer DNA (T-DNA) moves
T-DNA into the plant cell nucleus. It is
flanked by two direct 25-bp
repeat border sequences,
shown as yellow triangles
pTi
The virulence (vir)
genes are required
for T-DNA
movement into the
plant cell (more on The organization of Ti plasmids
them later) varies between isolates, but all
carry one or more T-DNA region
and one vir region
The T-DNA region: tumor-inducing
genes and opine synthesis genes
Plant cell
Opine synthesis
T4SS to “feed”
T-DNA Agrobacterium

pTi Auxin
synthesis Cytokinin
synthesis

Autonomous
growth

T4SS = Type IV Secretion System

 Oncogenes: síntesis de
hormonas que afectan al
Bordes flanqueantes: necesarias crecimiento tumoral de
para la transferencia del material células de la planta, y su
genético y su inserción en el regulación.
genoma vegetal.
Región T-
DNA
Uso: el DNA entre ambos bordes
se transfiere por completo Auxinas
Citoquininas
generalmente.
Borde
izquierdo
Genes vir: implicados en el
reconocimiento y unión a la célula Plásmido Ti
vegetal. Son activados gracias a
unas sustancias que producen las
células vegetales dañadas.
Genes vir
Uso: formación del pili sexual ori
que favorece la transformacióonr.i: punto inicial para la replicación del
DNA del plásmido, habilitándolo para
ser duplicado independientemente del
DNA cromosomal.
Genes op: síntesis opinas.
Actúan como fuente de carbono
y nitrógeno para el crecimiento
de la propia bacteria.
Opinas
Uso: cuando se lleva a cabo
Borde
derecho la modificación genética la
propia bacteria crea su
propio medio para poder
crecer.
Catabolismo Catabolismo de
opinas
opinas: genes que
codifican enzimas para
el catabolismo de las
opinas que se
sintetizan y que le
sirven de alimento a la
bacteria.
 Opine from the plant is a nutrient
source for the bacteria
Plant cell
Opine Opine synthesis
catabolism to “feed”
T-DNA
Agrobacterium

ATP

Opine
permease
Opine
synthases
bacterium

Opines induce expression of genes

required for opine uptake and
catabolism
 The 1980’s model

T4SS

A bit of Ti plasmid DNA moves from

Agrobacterium to the plant, which transforms
it and induces proliferative growth.
Outstanding questions:
• How does it work?
• Can it be harnessed to
introduce genes into plants?
 The development of Agrobacterium as
a vector for plant transformation

• Modifications to the Ti
plasmid

• Regeneration of
transgenic plants from
transformed cells
Untransformed, primary transformant, and progeny

Reprinted from Barton, K.A., Binns, A.N., Matzke, A.J.M. and Chilton, M.-D. (1983). Regeneration of intact tobacco plants containing full
length copies of genetically engineered T-DNA, and transmission of T-DNA to R1 progeny. Cell. 32: 1033-1043, with permission from Elsevier.
The Ti plasmid can be used to introduce
any gene into plants
The discovery that T-DNA was inserted into
the plant genome raised the possibility that
T-DNA “any gene” could be transferred into plants

Gene of Selectable
pTi interest marker

Tumor-inducing and opine

synthesis genes on T-DNA can
be replaced by a “gene of
interest” and selectable marker

Hoekema, A., Hirsch, P.R., Hooykaas, P.J.J. and Schilperoort, R.A. (1983). A binary plant vector strategy based
on separation of vir- and T-region of the Agrobacterium tumefaciens Ti-plasmid. Nature. 303: 179-180.
 Development of binary vectors that
separate T-DNA and vir genes
T-DNA and the vir genes can be located on separate
plasmids or replicons, making cloning easier Agrobacterium
tumefaciens

T-DNA
Because the Ti The smaller Helper
plasmid is so plasmid is
plasmid
large, a binary introduced into
Binary system was Agrobacterium
vector developed to allow carrying a helper
gene cloning into a plasmid with the
smaller plasmid vir genes

Manipulated in E. coli

Hoekema, A., Hirsch, P.R., Hooykaas, P.J.J. and Schilperoort, R.A. (1983). A binary plant vector strategy based on separation of vir- and T-region of the Agrobacterium tumefaciens Ti-plasmid. Nature. 303: 179-180.
 Transformación genética
Las enzimas de restricción
cortan el gen deseado

El DNA vector se toma de la

El DNA con el gen de interés se bacteria y se corta con la misma
retira de la célula enzima de restricción

Se inserta el gen dentro del

DNA vector mediante ligasas
(plásmido recombinante)

1
* La bacteria se reproduce, generando
muchas bacterias con la nueva
característica
Vector intermediario
Plásmido con muchos
hospedadores

1
* Secuencia Gen
Promotor
Gen de
Terminador
Gen
reguladora marcador interés informador
 Célula con vector
intermediario
Inserción e integración Plásmido de expulsión

Plásmido Ti silvestre Plásmido Ti MG

2
*
A. tumefaciens Doble entrecruzamiento

Planta de tabaco
*
transgénica

Plántula
Solución A. tumefaciens MG

Cultivo de células
Callo Explanto
2 Célula transformada Célula planta tabaco Planta de tabaco

3
*Borde izquierdo Oncogenes Gen de opinas Borde derecho
* Borde Secuencia Gen Gen de Gen Borde
Promotor Terminador
izquierdo reguladora marcador interés informador derecho
 Regeneration of transgenic plants from
transformed cells
Methods Regenerating plants
had been expressing resistance to the
developed antibiotic kanamycin plated on Negative
earlier to selective medium control
regenerate
whole
plants from
single cells

Reprinted from Vasil, V. and Hildebrandt, A.C. (1965). Differentiation of tobacco plants from single, isolated cells in microcultures. Science. 150: 889-892 and Horsch, R.B., Fry, J.E., Hoffmann, N.L., Eichholtz, D., Rogers, S.G., and Fraley, R.T.
(1985). A simple and general method for transferring genes into plants. Science. 227: 1229-1231. Reprinted with permission from AAAS. See also Sussex, I.M. (2008). The scientific roots of modern plant biotechnology. Plant Cell. 20: 1189-1198.
 Applications of Agrobacterium-
mediated transformation
Basic research – plant transformation
allows in vivo study of plant genes

Expression pattern of an
Lobed-leaf phenotype of
auxin-inducible promoter
plants overexpressing
fused to GUS reporter gene
KNAT1 gene

Wild type Overexpression

Population
segregating for short-
hypocotyl phenotype
conferred by PHYB
overexpression

Wagner, D., Tepperman, J.M. and Quail, P.H. (1991). Overexpression of phytochrome B induces a short hypocotyl phenotype in transgenic Arabidopsis. Plant Cell. 3: 1275-1288; Chuck, G., Lincoln, C.
and Hake, S. (1996). KNAT1 induces lobed leaves with ectopic meristems when overexpressed in Arabidopsis. Plant Cell. 8: 1277-1289. Casimiro, I., Marchant, A., Bhalerao, R.P., Beeckman, T., Dhooge,
S., Swarup, R., Graham, N., Inzé, D., Sandberg, G., Casero, P.J. and Bennett, M. (2001). Auxin transport promotes Arabidopsis lateral Root Initiation. Plant Cell. 13: 843-852.
 Agrobacterium enables novel or
modified genes to be introduced
Transgenic plant Golden rice is a
expressing nutritionally
Bacillus
thuringiensis insecticidal Bt gene enhanced plant
expressing Bt
toxin

Plant cell
expressing Bt
toxin

Wild-type Peanut plant

peanut plant expressing the
Bt gene
Photo credits: Herb Pilcher, Goldenrice.org
Transgenic crops continue to be
developed and adopted
Cotton - Bt cotton (2011: 62
million acres worldwide; 69%
of total cotton area)
Rice - Resistant to pest,
drought and salinity
Maize - Resistant to
herbicide and pests
Pulses - Pest tolerant
chickpea, pigeon pea
Peanut - Resistant to peanut
clump virus
Potato - High protein content
Tomato - Fungal resistance;
prolonged shelf-life fruit
Sugarcane - Resistant to the
fungal disease red rot

Source: Clive James, ISAAA

Principales especies y modificaciones llevadas a cabo:

OMG Finalidad de la modificación OMG Finalidad de la modificación

Resistencia a virus e insectos Melón Resistencia a factores adversos de

Patata
Mayor valor nutritivo suelo y clima
Resistencia a infecciones
Resistencia a pesticidas microbianas
Maíz Mayor valor nutritivo
Resistencia a herbicidas Papaya Resistencia a factores adversos de
suelo y clima
Pepino Mejora de la calidad de los frutos
Resistencia a virus y herbicidas
Calabaza Resistencia a virus
Cítricos Resistencia a infecciones
Colza Mejora de la calidad del aceite microbianas y a herbicidas
Resistencia pesticidas y herbicidas
Soja Resistencia a pesticidas
Cacao Resistencia a hongos
Caña azúcar Resistencia a pesticidas
Mejora de la calidad de los frutos
Fresa Retraso maduración
Resistencia a factores adversos de Piña
suelo y clima Clavel
Tomate Resistencia a infecciones microbianas Pimiento
plátano
Resistencia a insectos y herbicidas
Arroz, algodón, Resistencia a herbicidas
Retardo de maduración lino, tabaco
Vehículo para suministrar vacunas