Practica 2: extracción de ADN por choque térmico

ALUMNA: NARDA GRACIELA GONZALEZ AGUILAR

DOCENTE: QFB. RUBIO BAHENA JOSE DE JESUS

ASIGNATURA: TECNICAS MOLECULARES

LICENCIATURA: QUIMICO FARMACEUTICO BIOTECNOLOGO

TERCER SEMESTRE

CAMPUS: CIUDAD VISTORIA

CIENCIAS DE LA SALUD

FECHA: 29/08/2022
 DIAGRAMA DE FLUJO

De una placa con Mantener en incubarion Pasar a una cubeta de

crecimiento, suspender de en termoblock a una hielo en una temperatura
entre 2 a 3 colonias en temperatura de 96ºC por de 4ºC por 10 min
100ul de agua destilada 10 min.
en un tubo cónico

Tomar 20 uL del Centrifugar a 1400 rpm Repetir la secuencia de

sobrenadante final y por un total de 15 minutos pasos por triplicado
pasarlo a otro tubo con 80
uL
X3
HIPOTESIS

Al terminar el procedimiento, se espera encontrar ADN dentro del tubo, el ADN habrá sido
extraído gracias al choque térmico al que se sometió la muestra de las colonias de bacterias

OBSERVACIONES

No se vio nada diferente hasta después de la centrifugación de los tubos, en donde la

envoltura y en general la célula se precipito mientras que el ADN permaneció en la superficie
del tubo como sobrenadante. El ADN no fue visible totalmente, ya que se mantenía como
pequeñas hebras que se encontraban flotando

RESULTADOS

En el segundo tubo con 80uL, después de añadir los 20 uL del tubo centrifugado de 100uL,
encontramos algunas hebras de color blancuzco muy delgadas. Estas vendrían siendo el ADN
extraído de las células procariotas que se encontraban en la placa de cultivo utilizada. En
pocas palabras sacamos el sobrenadante del primero tubo para encontrarlo dentro del segundo
y así apreciar de mejor manera, el ADN no fue puro pues probablemente pudiese encontrarse
algún otro organismo dentro de los tubos.

CONCLISIONES

Se separo una buena cantidad de ADN con el método de choque térmico por la ruptura de la
célula y separación de este, de esta forma tuvimos una extracción exitosa y se podía
comprobar a simple vista, como hebras flotantes realmente delgadas casi imperceptibles
dentro del tubo en el agua destilada. El choque térmico ocasionó la ruptura de la célula
liberando en ADN que se encontraba, así mismo la centrifugación nos brindó la separación
de estos dos componentes.

La lisis de la célula se debe al cambio de la temperatura exterior e interior generando

diferentes presiones dentro y fuera de ella, de esta forma la célula entra en un estado critico
y termina “reventando”, es aquí cuando logramos obtener parte del ADN que se encuentra
dentro.
MATERIAL

o Tubo conico
o Pipeta automatizada
o Agua destilada
o Termoblock
o Centrifuga
o Vaso de precipitado
o Hielos
o Pinzas o guantes de carnaza
o Cultivo bacteriano con al menos 3 colonias

CUESTIONARIO

1.-en qué se basa la extracción de ADN por choque térmico?

En la ruptura (lisis) de la célula dando paso al ADN que posteriormente será separado
por centrifugación, en donde el precipitado será como tal la célula fragmentada y el
sobrenadante será el ADN extraido. Al exponer las células a un aumento repentino en la
temperatura o choque térmico, se crea una diferencia de presión entre el exterior y el interior
de la célula, que induce la formación de poros, a través del cual se puede introducir ADN
plasmídico superenrollado.

2.-En qué condiciones deben estar los reactivos?

A)en condiciones de Esterilidad
B) sin haber pasado su fecha de caducidad
C) Libres de ADNasa y ARN asa
D) Todos son correctos

3.- Que desventaja presenta?

A) el ADN de extraído no es puro
B) El ADN extraído se degrada facilmente.
C)el ADN tiene un alto grado de pureza
D) a y b Son correctas
4.- Se podría purificar el ADN extraído in solubilizándolo con etanol?
A) si
B)no
C) no se puede determinar
5.- el Cultivo bacteriano debe ser?

A) Puro
B) Mixto
C) Puede estar contaminado con hongos
D) ninguna de las anteriores

Bibliografías

1. Bacterial transformation using heat shock and competent cells. (2020, January 9).

Jove.com. https://www.jove.com/v/5059/bacterial-transformation-the-heat-shock-

method?language=Spanish

2. ¿Qué es la lisis celular? - Glosario de ciencias. (2014, February 26). Ambientech:

Ciencias, Salud y Medio ambiente. Educación Secundaria.

https://ambientech.org/lisis