Biología Celular

Laboratorio Extracción de ADN

Prof. Diana Cárdenas Caro

MARCO CONCEPTUAL

El DNA es una macromolécula: un ensamblaje de un gran número de átomos que

permanecen unidos en un ordenamiento definido y es un almacén de información (Karp,
2009). Bioquímicamente el ADN es un ácido nucléico tipo polímero, también llamado
polinucleótido, el cual está compuesto por monómeros llamados nucleótidos. Un
nucleótido está compuesto por una base nitrogenada, un azúcar pentosa y un grupo fosfato
(Campbell & Reece, 2007).

Esta molécula de gran importancia biológica desempeña un papel único como material
genético y en las células eucariotas se encuentra en el núcleo, aunque también en
mitocondrias y cloroplastos (Cooper & Hausman, 2011). El DNA proporciona direcciones
para su propia replicación, dirige la síntesis de ARN y a través del ARN controla la síntesis
de proteínas (Campbell & Reece, 2007).

El estudio del ADN permite la comprensión de diversos fenómenos en la biología, por lo

que extracción es una de las primeras etapas que se realiza en el laboratorio. Numerosas
técnicas se han desarrollado para su extracción y purificación, sin embargo, también son
conocidas prácticas con materiales y reactivos de uso corriente para visualizar la hebras de
ADN y confirmar su presencia en las células procariotas y eucariotas.

Estas metodologías incluyen la trituración de los tejidos con una posterior lisis o
rompimiento de la pared (bacterias, hongos y plantas) y membranana celular, así como de
la membrana nuclear, mitocondrial y de cloroplastos (células eucariotas). Una vez obtenido
la liberación del ADN del núcleo, de las mitocondrias y cloroplastos, se procede a su
extracción por precipitación en alcohol en una interfase formada entre la muestra y el
alcohol, tal como se observará en la siguiente práctica de laboratorio.

OBJETIVOS

 Reconocer las etapas necesarias para separar los componentes celulares y liberar el ADN
contenido en el núcleo, mitocondria y plastidios.
 Observar las hebras de ADN de diferentes frutos para confirmar su presencia en células
eucariotas vegetales.

MATERIALES

Materiales que debe llevar el estudiante Materiales que se encuentran en el

laboratorio
 Bata de laboratorio, guantes desechables, Batidora de cuchillas con vaso
 Cuaderno de laboratorio y guía de Recipientes para preparar el tampón
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laboratorio Tubos falcon de 10 mL

 8 cucharaditas rasas de bicarbonato de Gradilla
sodio (grupo 1) Erlenmeyer de 125 mL
 Tres cucharaditas rasas de sal de cocina Pipetas de 5 y 10 mL
(NaCl) (grupo 2) Papel parafilm
 Dos cucharadas de detergente líquido
para lavar platos (grupo 3)
 Una botella de agua (grupo 4)
 Un colador pequeño (por grupo de
mesón)
 Una de las siguientes muestras en una
taza o recipiente plástico o vidrio con tapa:
Tomate (grupo 1): pelado y cubos en
cuadros pequeños
Cebolla de bulbo (cabezona) (grupo 2):
pelada y cortada en cubos pequeños,
especialmente del centro o corazón de la
cebolla
Fresas (aprox. 8 – 10) (grupo 3): lavadas,
sin hoja y cortadas en cubos pequeños
Melón (grupo 4): una taza de melón pelado
y cortado en cubos pequeños

METODOLOGÍA

PREPARACIÓN DEL TAMPÓN DE LISIS (para todo el grupo)

En un frasco con tapa adicionar 250 mL del agua de la botella. Luego adicionar el
bicarbonato y la sal. Agitar bien hasta obtener una muestra homogénea.

Adicionar el detergente líquido y agitar hasta homogenizar, suavemente para que no se

forme espuma.

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

Adicionar la muestra al vaso de la batidora y agua hasta taparla. Triturar con la batidora de
cuchillas la muestra hasta que no se observen trozos. Colar este batido y recuperar solo la
porción líquida.
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SOLUBILIZACIÓN DE LAS MEMBRANAS

Tomar 10 mL del líquido obtenido y llevarlo a un erlenmeyer de 125 mL. Adicional 20 mL

del tampón de lisis. Tapar con una porción de parafilm y agitar por dos minutos. Filtrar la
mezcla obtenida

EXTRACCIÓN DEL ADN

Tomar 5 mL de la muestra y adicionarla en tubos falcon de 15 mL. Luego adicionar 10 mL

de alcohol muy frío por las paredes del tubo.

El ADN migrará a la interfase de los dos líquidos de donde podrá ser extraída con la ayuda
de una aguja o un asa recta para depositarla en una caja de petri para su observación.

DISCUSIONES

Indique la función de cada una de las etapas que se realizaron para extraer el ADN. Para
qué se utilizó cada uno de los reactivos?

CONCLUSIONES

Redacte mínimo tres conclusiones del trabajo que se hizo en el laboratorio. Deben ser
personales.