Actividad-asincrónica

Medios de cultivo y métodos de esterilización

a) Descripción de los diferentes medios de cultivo y métodos de esterilización.

ESTERILIZACIÓN POR CALOR

La alta temperatura combinada con un alto grado de humedad es uno de los

métodos más efectivos para destruir microorganismos. Es importante distinguir
entre calor húmedo y calor seco en cualquier procedimiento de control
microbiano; el calor húmedo mata a los microorganismos porque coagula sus
proteínas y es más rápido y efectivo que el seco, que los destruye al oxidar sus
constituyentes químicos. Los procedimientos prácticos se dividen
convenientemente en dos categorías:

1. El calor húmedo: que comprende los métodos de esterilización por vapor a

presión (autoclave) y la tindalización o esterilización fraccionada.

Este proceso se aplica al material que no resiste temperaturas arriba de135° C

(material de vidrio con torunda de algodón, jeringas desarmadas –no agujas-,
recipientes con tapón de rosca –no cerrados fuertemente-, tapones de hule
envueltos en papel). 2. Todo material a tratar en forma individual o conjunta
debe cubrirse perfectamente con material permeable, resistente al calor, no
debe usarse papel aluminio o celofán.

2. ESTERILIZACIÓN POR CALOR SECO (180 °C durante una hora) Comprende la

esterilización con aire seco o caliente (horno) y la incineración.

Este proceso se aplica a todo material cuya resistencia térmica sea superior a
los 150 °C (material de vidrio o metal con cierre hermético, cera, vaselina,
aceite, talco). 2. Todo material a tratar de forma individual o conjunta debe
cubrirse perfectamente con papel aluminio o colocarse en recipientes de
acero inoxidable. No usar fibras sintéticas o de algodón. 3. Al final del proceso
dejar enfriar el material dentro del horno.

ESTERILIZACIÓN POR FILTRACIÓN

El material filtrante es de diferente naturaleza y puede ser de asbesto, tierra de

diatomeas o porcelana; actualmente el más usado corresponde a las
membranas de éster de celulosa. La eliminación de los microorganismos está en
función de la carga eléctrica y del tamaño de los poros del material filtrante; para
su uso, en condiciones de asepsia, se coloca el material filtrante sobre el soporte
de la unidad de filtración (que debe ser previamente esterilizada), se fija y
posteriormente se hace pasar el líquido a través de la membrana o material
filtrante, recolectándose el filtrado en un matraz.

ESTERILIZACIÓN POR RADIACIONES

Las radiaciones más comunes que se usan para destruir a los microorganismos
son:

1. La luz ultravioleta. Se utiliza principalmente para la esterilización de áreas y

superficies, y cuya principal limitación es que debe ser absorbida para ser
efectiva, no pasa a través del vidrio transparente u objetos opacos e irrita los ojos
y la piel.

2. La luz infrarroja. Se emplea para reducir la contaminación de ciertos alimentos

y se aplica durante la preparación de los mismos; el efecto esterilizante de este
tipo de radiaciones se debe a la energía térmica que imparte de manera rápida, y
por ello oxidan los componentes celulares de los microorganismos.

3. Radiaciones ionizantes. Se utilizan para la esterilización de material quirúrgico

sensible al calor y otros materiales usados en medicina.

ESTERILIZACIÓN GASEOSA

Algunos gases ejercen una poderosa acción letal sobre los microorganismos, ya
que destruyen varias enzimas y estructuras que son vitales para la duplicación de
los mismos. El óxido de etileno es un gas que se difunde a través de los
materiales porosos y penetra fácilmente la mayoría de los plásticos, tiene gran
utilidad en la esterilización de artículos desechables, como las jeringas de
plástico, así como los instrumentos voluminosos, tales como las máquinas
cardiopulmonares. La esterilización se lleva a cabo a una temperatura de 50 +/- 2
°C, con una humedad relativa de 33% durante tres horas; los productos que han
sido sometidos a este tratamiento pueden usarse hasta después de 24 horas de
haber sido esterilizados, debido a que este gas es muy tóxico, especialmente
para los tejidos.
Medios de Cultivo

Los medios de cultivo, de acuerdo a su consistencia se clasifican en:

Líquidos

Los elementos nutrientes se encuentran en una solución acuosa y reciben el

nombre de Caldos.

Permiten el estudio del crecimiento bacteriano en términos de masa celular, los

cambios que sufren estos medios es su color turbidez a simple vista.

Solidos

Son medios líquidos a los que se les añade, sin alterar su valor nutritivo, una
sustancia solidificaste.
Los medios sólidos pueden usarse para separar unos microorganismos de otros,
con el fin de establecer cultivos puros.
Pueden ser solidificados con la adición de agar a una concentración entre 1% y
2%: lo más común es emplearlo al 1.5%
En ocasiones se emplean otros agentes solidificantes; por ejemplo, se usa gel de
sílice para cultivar bacterias autótrofas en medios sólidos en ausencia de
sustancias orgánicas, y para determinar las fuentes de carbono de bacterias
heterótrofas, suplementando el medio con varios compuestos orgánicos

Semisólidos

Son medios líquidos a los que añade una concentración de agar baja, según la
consistencia que se quiera obtener. Se utiliza principalmente para estudiar la
mortalidad de los microorganismos.

También podemos encontrar estos medios de cultivo:

Medio definido

Un medio del cual conocemos todos sus componentes químicos, puede existir
en forma líquida (caldo) o solidificada por la adición de un agente como el agar.
Los medios definidos suelen usarse para cultivar autótrofos fotolitótrofos, como
las cianobacterias y los protistas fotosintéticos

Muchos heterótrofos quimiorganótrofos también pueden ser cultivados en

medios definidos, con glucosa como fuente de carbono y una sal de amonio
como fuente de nitrógeno. Los medios definidos se usan frecuentemente en la
investigación, pues suele ser interesante saber qué compuestos están
metabolizando los microorganismos en un experimento dado.

Medios complejos.

Los medios que contienen algunos ingredientes de composición química

desconocida son los medios complejos. Estos medios son muy útiles, pues un
único medio complejo puede ser suficientemente rico para satisfacer
completamente las necesidades nutricionales de un microorganismo, y por
tanto no se puede diseñar un medio definido. Esto ocurre, por ejemplo, con
muchas bacterias exigentes que presentan requerimientos inusuales de cultivo
o nutricionales: pueden incluso necesitar un medio conteniendo sangre o suero.

Medio de cultivo por enriquecimiento.

Este método requiere que el medio de cultivo y las condiciones de incubación

sean selectivos para el organismo que se debe aislar y contra selectivos para los
organismos no deseados

Para que un cultivo de enriquecimiento tenga éxito es necesario contar con un

inóculo apropiado, es decir una muestra que contenga el microorganismo. suele
establecerse sembrando el inóculo directamente en un medio altamente
selectivo.

Método de siembra en Profundidad

Consiste en la dilución de un cultivo mixto en tu voz de agar fundido; cuando el

agar solidifica, las colonias se desarrollan embebidas en el tubo de agar en vez de
en la superficie. Es un método de gran utilidad para purificar determinados tipos
de microorganismos anaerobios, por ejemplo, las bacterias fototróficas del azufre
y sulfato reductoras de las columnas de Winogradsky.

b). Definir los siguientes términos:

Agar

El agar es un polímero sulfatado compuesto principalmente por D-galactosa, 3,6-

anhidro-L-galactosa y ácido D-glucurónico; generalmente es extraído de algas
rojas

El agar es un buen agente solidificante por varias razones: una razón es que se
funde a unos 90° C pero, una vez 10 fundido, no se endurece hasta que alcanza
los 45° C aproximadamente. Por eso, después de ser fundido, en agua hirviendo,
puede ser enfriado hasta una temperatura tolerable para las manos humanas y
para los microorganismos, además, los microorganismos pueden ser cultivados
en un medio con agar en un amplio rango de temperaturas. Finalmente, el agar
es un excelente agente endurecedor porque la mayoría de los microorganismos
no pueden degradarlo.

Agar en pico de flauta

Se realiza en tubos de ensayo y se solidifica el agar inclinado en un ángulo de

aproximadamente 45°.

Estriar la superficie del agar en forma de zig-zag. Puede usar asa recta o en arillo.

Caldo nutritivo

Se agrega un agente quelante que los inmoviliza y por lo tanto no hay

interferencia por la turbidez del medio para la observación del desarrollo de los
microorganismos en el medio líquido

Cultivo puro

Los cultivos puros, o axénicos se pueden obtener de muchas maneras a partir de

un enriquecimiento, los métodos empleados más frecuentemente son la
siembra por estría en superficie (en placa de Petri), la siembra en profundidad
(agar-shake) Y la disolución en líquido.

El cultivo puro representa las condiciones artificiales para el desarrollo de las

bacterias y otros microorganismos y las condiciones impuestas a los
microorganismos mediante el manejo del laboratorio. En este tipo de cultivo
existe sólo un tipo de microorganismo.

Cultivo mixto

Existen en el cultivo dos o más tipos de microorganismos.

Inoculación en laboratorio

Pequeño volumen que contiene microorganismos en suspensión.

Inoculación por estrías

Se practica obtener cultivos puros de muestras que contienen flora

polimicrobiana, es también útil para estudiar la morfología y propiedades
hemolíticas de las colonias aisladas.

Inoculación por extensión en superficie o siembra masiva.

Consiste en distribuir la muestra de manera uniforme por la superficie del medio

de cultivo contenido en la placa.

Incubación

Las células sedimentan, se adhieren a la superficie y comienzan a dividirse hasta

que se obtiene un crecimiento confluente que cubre toda la superficie del fondo
de la placa (monocapa). Luego de obtenida la monocapa, las células no
continúan dividiéndose por un fenómeno que se conoce como "inhibición por
contacto".

Asa microbiológica

El asa bacteriológica es un instrumento de laboratorio tipo pinza que consta de

una base que puede estar hecha de platino, acero, aluminio y un filamento que
puede ser de nicromo, tungsteno platino que termina o en aro o en punta.

Fuentes consultadas:

• Castillo Carranza, Karla Eugenia. Tesis, Manual electrónico de control de calidad en medios de
cultivo y cepas de referencia. UNAM, Septiembre 2013. Consultado en:
https://www.zaragoza.unam.mx/wp-
content/Portal2015/Licenciaturas/qfb/tesis/tesis_castillo_carranza.pdf
• Carrea Medico cirujano. Coordinación de Área Biomédica. Microbiologia e inmunología.
Consultado en: https://www.zaragoza.unam.mx/wp-
content/Portal2015/Licenciaturas/medico/manuales/Manual_MicroI.pdf
• UNAM, Facultad de Estudios Superiores Zaragoza. Manual de Microbiología General I. 2020.
Consultado en: https://www.zaragoza.unam.mx/wp-
content/Portal2015/Licenciaturas/qfb/manuales/10_MANUAL_MICROBIOLOGIA_GENERAL_I_2
020.pdf
• García Martos, P. Microbiología clínica práctica. Servicio de publicaciones de la Universidad de
Cadiz.
• http://contratacion.sena.edu.co/_file/solicitudes/32760_5.pdf
• http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08_Tema_5_Cultiv
o.pdf