7

UNIDAD

Limpieza, desinfección
y esterilización
del material de laboratorio
En esta unidad

APRENDERÁS A:
• Diferenciar los conceptos de asepsia,
antisepsia, desinfección y esterilización.
• Descontaminar y aplicar normas
de limpieza en el material de laboratorio.
• Elegir el método adecuado de desinfección
y aplicar los desinfectantes más comunes.
• Elegir el método adecuado de esterilización
y preparar el material.
• Acondicionar el material limpio
para su esterilización.
• Utilizar e interpretar los controles
del proceso de esterilización.

ESTUDIARÁS:
• La limpieza, la desinfección
y la esterilización.
• Los métodos de limpieza.
• Los métodos de desinfección.
• Los métodos de esterilización.
1. La limpieza, la desinfección y la esterilización
7
UNIDAD

En el laboratorio hay que trabajar en las mejores condiciones de limpieza y asepsia posibles
para evitar interferencias de restos de suciedad como materia orgánica, grasa, sustancias quí- DUDAS FRECUENTES
micas o microorganismos.
• La asepsia es la ausencia de
La limpieza es el procedimiento mediante el cual se retira la suciedad (materia gérmenes o microorganismos
orgánica y microorganismos) de los materiales y superficies. infecciosos tanto en la super-
ficie de los materiales expues-
tos o de los seres vivos como
La limpieza se realiza utilizando agua, con o sin detergentes, para reducir el número de mi- en la profundidad.
croorganismos. La correcta limpieza del material es muy importante para que la desinfección
o esterilización sea eficaz. • La antisepsia es el conjunto
de procedimientos que pre-
tenden destruir o eliminar los
La desinfección es el proceso encaminado a la eliminación de microorganismos por
agentes contaminantes de to-
alteración de su estructura o metabolismo, con el objeto de impedir su transmisión al
do aquello que no pueda ser
medio.
esterilizado. Cuando se habla
de antisepsia, se hace referen-
La desinfección se lleva a cabo mediante el uso de agentes físicos o químicos, y puede tra- cia a la desinfección sobre te-
tarse de una desinfección alta, intermedia o baja, según la actividad antimicrobiana y según la jidos vivos (piel, mucosas, he-
intensidad de su acción. ridas) mediante el empleo de
antisépticos y desinfectantes.
La esterilización es el procedimiento para la destrucción o eliminación completa de
toda forma de vida microbiana, incluyendo los virus (como los de la hepatitis y el sida)
y las esporas.

La esterilización puede llevarse a cabo mediante procesos físicos o químicos (vapor a pre-
sión, calor seco, óxido de etileno y líquidos químicos).

2. Los métodos de limpieza

Tipo Cómo se realiza Procedimiento

Limpieza A mano y con guan- 1. Enjabonado del material.

manual tes.
2. Limpieza por fricción.
3. Aclarado con agua del grifo.
4. Enjuagado final con agua destilada.
5. Secado a temperatura ambiente o en estufa de se-
cado.
Limpieza En máquinas auto- Se introduce todo el material, se añade el detergen- VOCABULARIO
automática máticas o lavadoras te y se programa para que realice lavado, aclarado y
de ultrasonidos. secado. Espora. Forma de resistencia
que adoptan las bacterias ante
Con este método de limpieza se consigue higienizar condiciones ambientales desfa-
más rápido que manualmente. vorables.
Tabla 7.1. Métodos de limpieza en laboratorio: manual y automática.

ACTIVIDADES

1. Diferencia entre asepsia, antisepsia y limpieza.

2. ¿Qué significa descontaminación? ¿Cuándo se realiza? ¿Cómo se puede llevar a cabo?
3. Diferencia los términos desinfección y esterilización.
4. Cita las cualidades que debe poseer un buen detergente.

91

DUDAS FRECUENTES
¿Por qué no se debe emplear
agua caliente con el material
volumétrico?
Porque está calibrado a 20 °C
y a temperaturas superiores no
haría mediciones exactas de vo-
lumen.
CLAVES Y CONSEJOS
Los frascos de vidrio topacio (vi-
drio de color oscuro) protegen
de la luz a toda sustancia foto-
sensible.
IMPORTANTE
El material de vidrio se coloca en
soportes o escurridores para un
buen secado. Si se necesita un se-
cado rápido, una vez limpio se
introducirá en la estufa a unos
60-70 °C, teniendo en cuenta que
nunca debe ponerse en ella el
material volumétrico (pipetas, bu-
retas ni matraces aforados). Para
acelerar el secado del material
volumétrico podemos enjuagar-
lo con etanol, acetona o usando
aire.
Fig. 7.1. Escurridor de material.
92
2.1. Limpieza del material de vidrio
La limpieza del material de vidrio se realiza de diferente modo según el material tenga poca
suciedad o esté muy sucio (Tabla 7.2):
Tipo de limpieza Procedimiento
Limpieza manual • Lavar con agua y jabón con ayuda de esponjas y escobi-
Material de vidrio poco sucio
/automática llas que no rayen.
• Aclarar con abundante agua del grifo varias veces.
• Enjuagar el material, por arrastre, con agua destilada
o desionizada, realizando un mínimo de tres enjuagues.
Para la limpieza se puede utilizar agua tibia o caliente, ex-
cepto con el material volumétrico o con restos de sangre
(esta se coagula con el calor y se adhiere al material).
Para comprobar que el material está limpio, en el enjuague
final con agua destilada no deben quedar gotas adheridas.
Jabones específicos Para limpiar el material, se sumerge durante varias horas
en una disolución con este tipo de jabón y seguidamente
Agentes tensoactivos en
se enjuaga con agua del grifo primero y con agua destilada
forma de polvo o de diso-
en los últimos aclarados.
lución. No dejan residuos
Material de vidrio muy sucio
ni producen espuma. Son especialmente adecuados para la limpieza de material
de vidrio en general.
Limpieza por Se basa en el principio de ondas de alta frecuencia produ-
ultrasonidos cidas en el líquido en el que se sumergen los materiales.
Debido a la frecuencia de trabajo y a la densidad del líqui-
do, se forman continuas depresiones y sobrepresiones que
aparecen y desaparecen en cuestión de microsegundos,
haciendo implosionar la molécula de agua y produciendo
un microcepillado que actúa alrededor de los materiales
que se introduzcan. Este efecto, que recibe el nombre de
cavitación ultrasónica, elimina la suciedad de la superficie
de los materiales sumergidos incluso en los puntos de más
difícil acceso.
Tabla 7.2. Limpieza del material de vidrio poco sucio o muy sucio.
Un buen detergente debe reunir una serie de cualidades:
• Ser humectante, es decir, que facilite que el agua moje mejor la superficie de los materiales.
• No ser tóxico ni corrosivo.
• No dejar residuos.
• Tiene que impedir que, una vez retirada la suciedad, esta se adhiera de nuevo al material.
Tras la limpieza, el material estará preparado para ser desinfectado o esterilizado.
ACTIVIDADES
5. Completa estas afirmaciones en tu cuaderno:
a) La eliminación de suciedad en un objeto o superficie es … .
b) La … es el proceso que garantiza la eliminación total de microorganismos y
sus formas de resistencia.
c) Cuando hablamos del proceso que elimina o detiene el crecimiento de microor-
ganismos por alteración de su estructura y metabolismo nos referimos a … .
A. Limpieza de pipetas 7
UNIDAD
Las pipetas se introducen en recipientes con agua jabonosa durante un tiempo. A continua-
ción, se aclaran con agua del grifo hasta retirar todo el jabón; por último, se realiza el curado IMPORTANTE
de la pipeta.
El curado consiste en llenar la
También se puede utilizar el lavador de pipetas, que consta de dos recipientes y un cestillo tercera parte de la pipeta o bu-
perforado donde se colocan las pipetas. En uno de los recipientes (el contenedor) se pone la reta con la solución o líquido
solución jabonosa y se introduce el cestillo con las pipetas. que se vaya a medir, inclinarla y
El recipiente de aclarado tiene un sistema sifón con dos tubuladuras. La tubuladura superior va co- girarla para hacer pasar dicha so-
nectada a un grifo para que entre el agua, y la inferior sirve para extraer el agua. Tras el aclarado, lución por todo su interior.
se colocan en el portapipetas y en posición invertida, con la boquilla hacia abajo, para su secado.
Esta operación debe efectuarse
B. Limpieza de buretas tres veces. Así se consigue susti-
tuir algún posible resto de agua
Las buretas se deben lavar con agua del grifo o agua jabonosa y con ayuda de una escobilla. destilada por la solución que se
Después, se aclaran con agua del grifo hasta retirar todo el jabón y se realiza el curado de la debe medir y se evitan interfe-
bureta (si la suciedad es resistente, hay que utilizar productos especiales). rencias.
Una vez limpia la bureta, se sujeta al soporte con las pinzas en posición invertida y con la llave
abierta, para que se seque a temperatura ambiente (Fig. 7.2).
Si no hemos realizado bien la limpieza, puede ocurrir lo siguiente:
• Si al llenar la bureta con la solución aparecieran burbujas de aire en las paredes interiores
o hubiera pequeñas gotas en el interior de la superficie, significa que no está limpia y no
transferirá la cantidad exacta de líquido.
• Si se comprueba que la disolución no fluye suavemente por el extremo, puede deberse a
que el paso esté obstruido por un pequeño trozo de material sólido o por un poco de grasa
en la llave. Este tipo de obstrucciones se eliminan con un alambre fino.
DUDAS FRECUENTES
La bureta hay que desmontarla de forma periódica y retirar la llave para limpiarla, aplicándole
un producto graso como vaselina o parafina para que gire suavemente. La bureta es material volumétri-
co, por lo que nunca debemos
secarla en la estufa.
ACTIVIDADES

6. Copia la tabla en tu cuaderno y marca en la columna correspondiente si los siguientes

materiales se limpian con agua a más o a menos de 20 ºC:

Material de laboratorio Agua caliente > 20 ºC Agua fría < 20 ºC

Matraz Kitasato
Pipeta graduada
Bureta
Matraz Erlenmeyer
Vaso de precipitados
Pipeta aforada
Matraz aforado
Fig. 7.2. Bureta en posición inver-
Cristalizador
tida y llave abierta para su secado.

CASO PRÁCTICO 1

Miguel debe limpiar pipetas graduadas de 1, 2, 5 y 10 ml en el Solución

lavapipetas siguiendo el proceso general de limpieza. Indica el
procedimiento que debe seguir.
Introducir las pipetas en el cestillo con agua jabonosa; des-
pués, aclararlas con agua hasta que no queden restos de ja-
bón; y, finalmente, secar las pipetas en el portapipetas.
Para evitar que se rompan, las pipetas se colocan con la boqui-
lla hacia abajo y el extremo de vertido hacia arriba.

93
 PRÁCTICA DE LABORATORIO 1
OBSERVACIONES
• Hay que tener cuidado con el
manejo del ácido sulfúrico por-
que es un ácido fuerte y corro-
sivo.
• El ácido debe vertirse lenta-
mente sobre el agua, nunca al
revés.
• Hay que tener cuidado con las
salpicaduras porque la mez-
cla sulfocrómica es cáustica y
muy peligrosa.
• El envase final deberá ser de vi-
drio topacio porque a la mezcla
sulfocrómica le afecta la luz.
• El recipiente que contenga la
mezcla debe estar bien etique-
tado para evitar errores.
• La mezcla se puede usar va-
rias veces, hasta que adquiera
un tono verdoso; entonces se
desechará.
DUDAS FRECUENTES
Recuerda que en el etiquetado
deben aparecer estos datos:
• Denominación.
• Composición cualitativa y cuan-
titativa.
• Condiciones de conservación.
• N.o de registro.
• N.o de lote.
• Fecha de preparación.
• Fecha de caducidad (si proce-
de).
94
Preparación de una mezcla especialmente adecuada contra la suciedad persistente de
origen orgánico y para el desengrasado del material de vidrio.
Fundamento: preparar 100 ml de mezcla sulfocrómica.
Material
• Balanza de precisión. • Varilla.
• Material de pesada (vidrio de reloj, cucharilla). • Probeta de vidrio.
• Vaso de precipitados. • Embudo.
• Matraz aforado de 500 ml. • Etiqueta.
• Envase de 100 ml de vidrio topacio.
• Reactivos: dicromato potásico, ácido sulfúrico comercial y agua destilada.
Técnica
La mezcla sulfocrómica está compuesta por 100 g de dicromato potásico + 250 ml de
ácido sulfúrico y agua hasta 1 l.
1. Para preparar 100 ml (la décima parte de 1 000 ml = 1 l), poner la décima parte de
dicromato potásico, ácido sulfúrico y agua.
• 100 g de dicromato potásico/10 = 10 g de dicromato potásico
• 250 ml de ácido sulfúrico/10 = 25 ml de ácido sulfúrico
• Hasta 1 000 ml de agua/10 = hasta 100 ml de agua destilada
2. Pesar 10 g de dicromato potásico.
3. Disolver los 10 g de dicromato potásico en unos 50 ml de agua destilada, en vaso de
precipitados, y añadir lentamente los 25 ml del ácido sulfúrico (medidos con probeta
de vidrio) a la vez que se agita con mucho cuidado.
4. Verter a un matraz aforado de vidrio topacio de 100 ml y completar hasta el aforo
con agua destilada.
5. Transvasar con un embudo a un envase de vidrio topacio y etiquetarlo.
Mezcla sulfocrómica 100 ml
K2Cr2O7/H2SO4
Condiciones de conservación: protegido de
luz y envases herméticamente cerrados.
N.º de registro: xxx
N.º de lote: xxx
Fecha de preparación: 00/00/2017
3. Los métodos de desinfección
7
UNIDAD

La desinfección se lleva a cabo mediante métodos físicos y químicos.

CLAVES Y CONSEJOS
a) Métodos físicos:
• Ebullición: proceso por el que un líquido pasa a estado gaseoso a alta temperatura (el El espectro de acción de un des-
agua a 100 °C); no constituye un método esterilizante al no destruir los virus ni muchas infectante es la mayor o menor
de las esporas bacterianas. amplitud de acción sobre una
serie de microorganismos so-
• Pasteurización: proceso que expone el material a agua caliente, a unos 77 °C, durante bre los que actúa. Los desinfec-
30 minutos. Su objetivo es destruir todos los microorganismos patógenos. tantes se pueden clasificar por su
b) Métodos químicos: se emplean desinfectantes que se aplican sobre objetos inanimados espectro de acción en alto, me-
como el material de laboratorio, paredes, suelos y mobiliario y que destruyen los gérme- dio o bajo.
nes o microorganismos patógenos y no patógenos. También pueden clasificarse por
Los desinfectantes más utilizados y sus características se describen en la Tabla 7.3. su mecanismo de acción, que
es el modo en el que actúan
para inhibir el crecimiento de los
Las cualidades que debe reunir un buen desinfectante son: microorganismos o destruirlos.
• No ser tóxico para el personal que lo manipule.
• No ser corrosivo con los materiales que se vayan a desinfectar.
IMPORTANTE
• Tener un amplio espectro.
• Ser de acción rápida y duradera. La lejía debe almacenarse y utili-
• Ser estable y que no se descomponga o inactive al mezclarse con agua ni se solubilice zarse en zonas ventiladas, por-
fácilmente con ella. que el cloro libre es un gas tó-
xico, y hay que evitar mezclarlo
• Poseer estabilidad química: que no se inactive ante materia orgánica. con ácidos, ya que se emite clo-
• Ser de fácil manipulación y, además, económico. ro gaseoso rápidamente.

Desinfectante Características Inconvenientes

Cloro y Desinfectante de amplio espectro que posee acción bactericida y fungicida Corrosivo con los metales, inestable
derivados gracias al cloro que libera, pero se inactiva ante la materia orgánica. a la luz y, cuando se diluye, se de-
sestabiliza y pierde poder germicida
La solución acuosa de hipoclorito sódico que contiene 50 g/l de cloro libre
al cabo de unas horas. Además, en
es la lejía de uso doméstico. Cuando esta solución se diluye al 2 %, contiene
presencia de materia orgánica tam-
1 g/l de cloro libre y se utiliza como desinfectante del material de laboratorio;
bién se inactiva. Irritante con piel y
si se diluye al 10 %, contendrá 5 g/l de cloro libre y se considerará un
mucosas, por lo que se debe mani-
desinfectante de nivel alto.
pular con cuidado.
Los preparados industriales de lejía vienen muy concentrados (hasta 120 g/l
de cloro libre), por lo que hay que diluirlos cuidadosamente hasta obtener
las concentraciones deseadas (1 o 5 g/l de cloro libre).
Compuestos Los compuestos fenólicos tienen acción bactericida y baja acción fungicida. La materia orgánica interfiere en
fenólicos Destruyen los microorganismos por desnaturalización de las proteínas. su acción. Deben protegerse la piel
Se considera, junto a otros compuestos fenólicos, desinfectante de nivel y los ojos cuando se use, pues es
intermedio o bajo, por lo que solo puede usarse en materiales no críticos irritante.
(que solo han estado en contacto con piel sana e intacta).
Alcoholes Agente bactericida que destruye las bacterias y es eficaz contra la mayoría Irrita la piel, es inflamable y se
de las que son patógenas, pero su acción es imprevisible frente a los hongos evapora.
y los virus.
El etanol (alcohol etílico al 70 %) es el más utilizado debido a que posee
mayor poder desinfectante que el de 96°; aun así, consigue una escasa
desinfección, por lo que su uso se limita a los materiales no críticos. Está
indicado para la desinfección de termómetros de baño y para desengrasar
portaobjetos y cubreobjetos.
Tabla 7.3. Desinfectantes más utilizados para descontaminación y/o desinfección de material de laboratorio.

95
 IMPORTANTE Elimina todas las formas vegetativas de la muestra e incluso alguna
Desinfección
espora no demasiado resistente. Ejemplo: solución concentrada de
alta
El material crítico es el que ha NaClO.
estado en contacto con fluidos, Elimina formas vegetativas bacterianas y la mayoría de formas vivas
como saliva, sangre, pus, etc. Desinfección
de virus y hongos. Ejemplo: hexaclorofenol o solución de hipoclorito
Este material requiere una des- media
sódico (1 g/l de cloro libre).
infección alta o una esteriliza-
ción. El material no crítico solo Desinfección Elimina o inhibe el crecimiento de la mayoría de las formas vegetativas
ha estado en contacto con piel baja y de algunos virus y hongos muy sensibles. Ejemplo: alcohol etílico.
intacta, por lo que requiere una
Tabla 7.4. Categorías de desinfección dependiendo del espectro de acción del desinfectante y de la
desinfección media o baja.
intensidad de su acción.

ACTIVIDADES

7. ¿Qué diferencias observas entre los dos métodos físicos de 10. Indica qué categoría de desinfección se requiere para limpiar
desinfección que existen? en los siguientes casos:
8. ¿Qué cualidades debe reunir un buen desinfectante? a) Una pipeta que ha estado en contacto con sangre.
9. Completa en tu cuaderno la siguiente tabla con los desinfec- b) Un tubo de centrífuga con grasa.
tantes descritos: c) Un portaobjetos con una muestra de orina.
11. Relaciona en tu cuaderno mediante flechas los siguientes
Nombre Espectro Aplica- Inconve-
asépticos con el nivel de desinfección que consiguen:
desinfec- de acción ciones nientes
tante y precaucio- 1. Hipoclorito sódico a) Nivel bajo de desin-
nes fección
2. Metil-fenol b) Nivel medio de de-
sinfección
3. Alcohol etílico o etanol c) Nivel alto de desin-
fección

12. Escribe en tu cuaderno la definición de estos conceptos:

bactericida, bacteriostático, virucida, virostático, fungici-
da, fungistático y germicida.

CASO PRÁCTICO 2

Cristina va a preparar, a partir de lejía doméstica, las siguientes c) Para preparar 200 ml, se toma el 2 % de 200 (4 ml) y se
disoluciones: completa con 196 ml de agua destilada para llegar a un
a) 100 ml de una disolución al 10 %. volumen total de 200 ml de disolución.
b) 500 ml de una disolución al 5 %.
c) 200 ml de una disolución al 2 %.
Indica cómo tiene que proceder para preparar cada una de estas
disoluciones.
Solución
a) Para preparar 100 ml, el volumen de lejía que debe tomar
es el 10  % de 100 ml (volumen total): 100 · 10 / 100 = 10.
Por tanto, debe coger 10 ml de lejía doméstica + 90 ml de
agua = 100 ml.
b) Para preparar 500 ml totales, debe tomar el 5 % de 500 ml
de lejía (25 ml) y completar hasta 500 ml con agua desti-
lada (475 ml).

96
4. Los métodos de esterilización
7
UNIDAD

La esterilización consigue la completa destrucción de toda forma de vida microbiana, inclu-

yendo los virus y las esporas bacterianas.
El proceso de esterilización se puede llevar a cabo mediante métodos físicos o químicos.

4.1. Métodos físicos de esterilización

A. Por calor húmedo
• Autoclave. Se utiliza para esterilizar material resistente a altas temperaturas y antes de de-
sechar el material contaminado. El aparato genera calor húmedo, en forma de vapor de agua
a presión, y la esterilización se consigue a través de la coagulación y desnaturalización de
las proteínas, destruyendo todo tipo de microorganismos, incluyendo los virus y las esporas.
• Tindalización. También conocida como esterilización discontinua o fraccionada, es un
método de esterilización por calentamiento discontinuo. Consiste en someter el material o
sustancia a un proceso seriado de elevación y disminución de la temperatura para eliminar
paulatinamente formas vegetativas y esporas. Se requiere un mínimo de tres sesiones en
tres días (una sesión por día) de elevación y disminución de la temperatura para que el pro- Fig. 7.3. Autoclave: esterilización por ca-
ceso sea óptimo. Es un método de esterilización que utiliza el autoclave. lor húmedo.

• Fuente de calor (eléctrica o gas).

• Interruptor general y volante que permite la apertura y el cierre de la tapa.
• Depósito con resistencia eléctrica en el fondo.
• Rejilla perforada en la mitad del depósito.
Descripción
• Cestillo para poner el material situado encima de la rejilla.
• Manómetro indicador de la presión interna y termómetro indicador de temperatura.
• Llave de desvaporización o purga.
• Válvula de vapor o presión y válvula de seguridad.
• Abrir la tapa girando el volante de cierre y desplazarla con el brazo.
• Llenar el depósito con agua destilada hasta la señal por debajo de la rejilla perforada.
• Poner el material encima de la rejilla o en un cestillo, para que queden espacios entre los materiales y circule
el vapor de agua. No taponar el orificio superior del depósito por donde sale el vapor de agua.
• Desplazar la tapa para que cierre el depósito y girar el volante para apretarla bien.
• Conectar el autoclave a la corriente eléctrica y accionar el interruptor general.
Funcionamiento • El autoclave aumentará la temperatura y empezará a producir vapor de agua, que desplaza el aire. Una vez
purgado el aire, se cierra la llave de purga y la temperatura llega a 100 °C, momento en el que la presión
sube hasta 1 atm (indicada en el manómetro).
• Cuando se alcanzan la temperatura y presión deseadas, comienza el tiempo de esterilización, durante el
que se eliminan todos los microorganismos, incluidos virus y esporas.
• Cuando termina la esterilización, se desconecta con el interruptor, pero no se abrirá hasta que el manóme-
tro indique cero de presión y se haya enfriado. Abrir la llave de desvaporización o de purga permite que el
vapor salga más rápido.
•  Ventajas: es la forma más rápida de esterilizar, no es tóxica, esteriliza gran variedad de materiales (vidrio, metal
Ventajas e no oxidable, porcelana, goma y tela) y es económica.
inconvenientes •  Inconvenientes: hay materiales que no se pueden esterilizar con autoclave, como el plástico, sustancias
insolubles en agua y material metálico oxidable; además, solo esteriliza en superficie, no en profundidad.
Tabla 7.5. Partes del autoclave, funcionamiento, ventajas e inconvenientes.

97

Fig. 7.4. Horno Poupinel.
TOMA NOTA
Las condiciones idóneas de este-
rilización pueden ser:
• 120 °C y 1 atm, 20 minutos.
• 121 °C y 1 atm, 15 minutos.
• 134 °C y 2 atm, 10 minutos.
• 144 °C y 3 atm, 4 minutos.
A más presión, la temperatura
que se alcanza es mayor y el
tiempo de esterilización, menor.
CLAVES Y CONSEJOS
La luz UV tiene poca capacidad
para penetrar en la materia, por
lo que solo los microorganismos
que se encuentran en la superfi-
cie de los objetos y que se expo-
nen directamente a la acción de
la luz UV son susceptibles de ser
destruidos.
IMPORTANTE
Al manejar óxido de etileno de-
ben tenerse en cuenta ciertas
precauciones: evitar su inhala-
ción y usar el equipo adecuado;
mantener una buena ventilación
durante su manipulación; y airear
el material esterilizado durante
un día o más antes de su uso.
98
B. Por calor seco
Este método utiliza aire caliente seco, y la operación de esterilización se lleva a cabo en apa-
ratos eléctricos.
Ejemplos de estos aparatos eléctricos son:
• Horno de aire caliente: recibe el nombre de horno Poupinel (Fig. 7.4).
Las ventajas de este método son su facilidad de instalación y manejo, así como la posibili-
dad de esterilizar material metálico (con el calor húmedo se oxidaría). Al ser más penetrante
que el calor húmedo, permite esterilizar en recipientes cerrados.
Los inconvenientes son que necesita altas temperaturas (entre 160-180 °C) y más tiempo
de esterilización, por lo que los instrumentos que deben esterilizarse pueden deteriorarse
debido al calor excesivo. Además, no consigue una distribución homogénea de la tempera-
tura y el calor seco destruye más despacio que el calor húmedo.
• Flameado: para esterilizar con este sistema se debe hacer pasar el material por la llama
de un mechero. Es muy utilizado en la esterilización de asas de siembra, pinzas, bocas de
matraces y tubos de ensayo.
• Incineración: hornos a muy altas temperaturas que destruyen materiales de desecho como
fármacos, radiografías o residuos.
C. Por radiaciones
Las radiaciones ionizantes gamma se utilizan para esterilizar materiales termolábiles de un
solo uso, como jeringas o sondas, puntas de pipeta, placas Petri, fármacos, vacunas... Es lo que
se conoce como esterilización en frío o radioesterilización.
D. Por filtración
La filtración esterilizante se lleva a cabo haciendo pasar la sustancia que hay que esterilizar
a través de unos filtros que retienen los microorganismos. Esto se consigue gracias al diminuto
tamaño de los poros del filtro y a la adsorción a las paredes del poro.
Este tipo de filtración se realiza cuando los materiales son termolábiles y no pueden esterilizar-
se con calor ni mediante agentes físicos como las radiaciones.
Con este método se esterilizan líquidos biológicos, soluciones de enzimas, algunas vitaminas
y antibióticos.
Los filtros utilizados en este procedimiento pueden ser de dos tipos:
• Filtros de membrana coloidal: discos de ésteres de celulosa con poros tan pequeños que
impiden el paso de los microorganismos. Pueden ser desechables o recuperables por este-
rilización en autoclave y se usan para la asepsia de líquidos y el análisis microbiológico de
aguas.
• Filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air): compuestos por acetato de celulosa, se
emplean para filtrar y esterilizar el aire, ya que retienen partículas del aire que sale de una
campana de flujo laminar.
4.2. Métodos químicos de esterilización
A. Por óxido de etileno
El óxido de etileno es un agente químico esterilizante tóxico para los microorganismos y volá-
til, lo que permite que se elimine fácilmente del objeto. Se utiliza para el material termolábil
como plásticos, goma o equipos electrónicos.
Los aparatos de esterilización por este sistema se denominan cámaras de óxido de etileno.
Sus ventajas son que destruye todo tipo de microorganismos y que, debido a su alto poder
de penetración, los objetos que se tienen que esterilizar pueden empaquetarse previamente.
Sus inconvenientes son que es tóxico (si se inhala causa irritación de ojos, náuseas, vómitos
y trastornos neurológicos), irritante y cancerígeno, y además de inflamable y de riesgo. Esto
limita su uso a determinadas áreas (en los laboratorios no hay autoclaves de óxido de etileno).
B. Por glutaraldehído al 2 % 7
UNIDAD
Es bactericida de amplio espectro y eficaz contra virus y esporas.

• Se pueden descontaminar y esterilizar los materiales de plástico y termosensibles porque actúa a temperatu-
Aplicación
ra ambiente y por inmersión del material durante 24 horas.
• La contaminación de la solución con materia orgánica influirá en la pérdida de actividad.
Inconvenientes
• El poder germicida de la solución va disminuye a medida que se utiliza el producto, y si se diluye en agua.
• El glutaraldehído debe utilizarse en un ambiente con buena ventilación porque es un irritante de la piel, los
ojos y las mucosas, y resulta tóxico por inhalación.
• Los EPI del personal incluirán mascarilla, gafas (para evitar riesgo de salpicaduras en los ojos) y guantes resistentes.
• Si el laboratorio cuenta con un extractor de solventes tóxicos, el riesgo de toxicidad para los operadores dis-
minuirá sensiblemente.
Precauciones
• Se recomienda mantener los contenedores de glutaraldehído tapados correctamente, salvo cuando se reali-
zan los procedimientos.
• Tras la descontaminación o esterilización, es necesaria la inmersión posterior del material en agua estéril
en tres baños diferentes, agitándolo durante dos minutos. En el caso de instrumental con luz interior, debe
enjuagarse a presión.
Tabla 7.6. Aplicación, inconvenientes y precauciones de uso del glutaraldehído al 2 %.

C. Por plasma de peróxido de hidrógeno

Puede esterilizar material termosensible. Para que se dé la esterilización, el material debe estar
limpio y seco, dado que la presencia de materia orgánica y humedad detiene el ciclo.
Se introduce la solución acuosa de peróxido de hidrógeno y se difunde por la cámara y por el
interior de los paquetes. El vapor de peróxido de hidrógeno se ioniza y pasa a plasma. Cuando
se descompone, produce vapor de agua y oxígeno. A continuación, debe ventilarse para igualar
la presión de la cámara con la exterior. Por último, se abre la puerta del sistema.
Las ventajas de este método son que no es tóxico, es rápido y de uso sencillo. Los inconvenien-
tes son que requiere envoltorios especiales de poliprolileno y no puede utilizarse con celulosa
o con ropa.

PONTE A PRUEBA 1

Vas a elaborar el autoclave para un ciclo de esterilización. ¿Cómo hay que preparar el
material antes de meterlo en el autoclave? ¿Cómo debes de ponerlo en marcha y qué
precauciones debes tener en cuenta?
Claves de resolución
• Revisa, en la Tabla 7.5, el funcionamiento del autoclave.
• En el epígrafe 4.3 puedes ver cómo debe acondicionarse el material para su esteri-
lización.
• Existen condiciones estándar de esterilización; la más habitual es utilizando 121 ºC
de temperatura a 1 atmósfera de presión durante 15-20 minutos.
Fig. 7.5. Equipo de filtración esterilizante.

ACTIVIDADES

13. Dibuja un autoclave y señala las distintas partes que lo componen.

14. Describe la función de los componentes del autoclave.
15. Cita ventajas del sistema de esterilización por calor húmedo del autoclave.

99

CLAVES Y CONSEJOS
El material, antes de ser empa-
quetado, debe estar limpio, re-
quisito sin el que fracasaría el
proceso de esterilización.
Fig. 7.6. Material acondicionado en bol-
sas de polipropileno.
ACTIVIDADES
16. Limpia correctamente, pe-
ga la cinta testigo en el in-
terior, envuelve con papel
adecuado para autoclave o
en bolsa de polipropileno, y
pega la cinta testigo en el
exterior del envoltorio de
estos materiales:
• Pesasustancias.
• Vidrio de reloj.
• Placas Petri.
• Pinzas metálicas.
• Varilla agitadora.
100
4.3. Acondicionamiento del material para su esterilización
La preparación del material antes de esterilizarlo debe garantizar:
• Una penetración efectiva del agente esterilizante.
• La protección del material contra la oxidación, la corrosión y la pérdida de filo de los instru-
mentos cortantes.
• Su permanencia estéril hasta su utilización.
Una vez limpios los materiales, hay que envolverlos hasta que el actúe agente esterilizador y
así se mantengan protegidos de microorganismos durante y después de la esterilización.
Existen dos tipos de materiales de protección: internos y externos. Ambos tienen las mis-
mas características:
• Barrera microbiana efectiva.
• Facilitan la penetración y la eliminación del agente esterilizante.
• Garantizan la integridad y la resistencia física.
• Permiten el precinto.
• Son compatibles con el esterilizador.
• Están libres de elementos tóxicos.
Los envoltorios pueden ser de diferentes materiales: material textil (musolina, hilo, algodón);
papel de celulosa (tejido sin tejer, papel crepé); papel mixto (bolsas, rollos); material de poli-
propileno; o contenedores rígidos (acero, aluminio, plástico).
4.4. Controles de la esterilización
Son unos discos que van registrando la temperatura y la presión que hay
Controles
en el interior del aparato, obteniéndose unos gráficos de temperatura y pre-
físicos
sión que luego se comparan con los registros de los indicadores externos.
Son sustancias químicas que, a ciertas temperaturas, reaccionan con un in-
dicador y modifican su color en función de las condiciones del proceso de
esterilización (temperatura, presión...). Se pueden utilizar:
• 
Cintas de papel adhesivo, que son unas tiras con bandas que cambian de
color cuando alcanzan cierta temperatura dentro de los aparatos de este-
rilización, pero no son indicadores de que los procesos de esterilización se
Controles
hayan cumplido correctamente. Son adhesivas y se pegan tanto en el inte-
químicos
rior del material como en su exterior. Su uso de forma rutinaria en todos
los materiales que se esterilicen no debe reemplazar los controles físicos y
biológicos periódicos.
• Tiras o láminas de papel no adhesivas que, cuando alcanzan una tempe-
ratura determinada, cambian de color, lo cual indica que se ha llegado a la
temperatura de esterilización.
Se emplean tubos que contienen esporas que se encuentran en un medio
de cultivo y, tras la esterilización, se incuban a temperatura óptima de creci-
miento (40-52 ºC) durante 24-48 horas. Si se observa crecimiento o cambio
de color es que no se ha logrado la esterilización correcta. En caso contrario,
el proceso de esterilización habrá sido efectivo.
Controles • Para el autoclave se utilizan esporas de Bacillus stearothermophillus, que
biológicos son las más resistentes al calor húmedo.
• Para el Poupinel se emplean tiras de esporas que, tras el ciclo de esteriliza-
ción, se siembran en un medio adecuado, se incuban y se observa si hay
o no crecimiento.
• Para el óxido de etileno se utilizan esporas de Bacillus subtilis e incluso,
en ocasiones, dos tipos distintos de esporas.
Tabla 7.7. Controles físicos, químicos y biológicos para la esterilización.
 7
UNIDAD

SÍNTESIS Limpieza, desinfección y esterilización del material de laboratorio

Retirada de la suciedad (materia orgánica y

microorganismos) de los materiales Limpieza de material de vidrio:
• Poco sucio.
• Muy sucio: jabones, mezcla
Limpieza sulfo-crómica y ácidos.

Procedimientos de limpieza: manual

y automática

Métodos físicos: ebullición y pasteurización

Eliminación de la mayoría de
microorganismos patógenos y no
Desinfección patógenos mediante el uso de Métodos químicos:
agentes físicos o químicos • Cloro y derivados
• Compuestos fenólicos
• Alcoholes

Métodos físicos:
• Calor húmedo (autoclave
y tindalización)
• Calor seco
• Radiaciones
Destrucción completa • Filtración
de toda forma de vida
microbiana, incluyendo
virus y esporas Métodos químicos:
• Óxido de etileno
• Glutaraldehído al 2 %
• Cloro peracético
• Plasma de peróxido
de hidrógeno
Esterilización

Acondicionamiento del material previo

a la esterilización • Físicos: termómetros, manómetros
de presión, sensores de carga, válvulas
y sistemas de registro
• Químicos: cintas de papel adhesivo
Controles de esterilización y tiras o láminas de papel no adhesivas.
• Biológicos: tubos con esporas

101
 TEST DE REPASO
1. La limpieza de material consiste en:
a Eliminar todos los microorganismos que pueda con-
tener.
b Retirar la suciedad.
c Eliminar todos los gérmenes excepto virus.
d Eliminar todas las bacterias excepto esporas.
2. La desinfección es:
a La destrucción de bacterias patógenas.
b La ausencia total de microorganismos.
c La inhibición del crecimiento de bacterias.
d La destrucción de la mayoría de microorganismos,
excepto virus y esporas.
3. Con la esterilización se destruyen:
a Bacterias.
b Virus y esporas.
c Hongos.
d Todas las alternativas son correctas.
4. Las cualidades de un buen detergente son:
a No ser tóxico.
b Ser irritante.
c No ser humectante.
d Todas las opciones son correctas.
5. La mezcla sulfo-crómica se emplea para:
a Favorecer la disolución de la grasa.
b Desinfectar.
c Limpiar el material de plástico.
d Conseguir una asepsia del material.
6. La potasa alcohólica es:
a Una solución de hidróxido potásico al 20 % en alcohol
etílico.
b Se utiliza principalmente para eliminar residuos de
grasas.
c Un desinfectante de acción intermedia.
d Son correctas las alternativas a y b.
102
7. Se puede emplear agua caliente para el:
a Material volumétrico o con sangre.
b Material con grasa.
c Material volumétrico y con grasa.
d Todas las opciones son correctas.
8. El proceso de limpieza del material es:
a Lavar con agua y detergente y aclarar con agua.
b Lavar con agua y detergente, aclarar con agua del gri-
fo y enjuagar tres veces con agua destilada.
c Lavar con agua y detergente y enjuagar con agua
destilada una vez.
d Lavar con agua y detergente y aclarar con agua de-
sionizada tres veces.
9. El curado de una pipeta consiste en:
a Aclararla tres veces con agua destilada.
b Secarla muy bien a temperatura ambiente.
c Aclararla tres veces con el propio líquido que se va a
recoger.
d Acelerar el secado con un disolvente como la acetona.
10. Un método físico de desinfección en el que el agua
hierve a 100 ºC se llama:
a Pasteurización.
b Esterilización.
c Ebullición.
d Son correctas las opciones a y c.
11. El hipoclorito sódico es:
a Bactericida y fungicida.
b Un desinfectante químico que corroe los metales.
c Inactivo en presencia de materia orgánica.
d Todas las alternativas son ciertas.
12. La desventaja de la esterilización con autoclave es que:
a Es un proceso tóxico.
b Esteriliza poca variedad de material.
c Esteriliza en superficie.
d Es un proceso lento.
 7
UNIDAD

COMPRUEBA TU APRENDIZAJE

Diferenciar los conceptos de asepsia, antisepsia, desin-
fección y esterilización
1. Define asepsia y antisepsia.
2. Señala las diferencias existentes entre la desinfección y la
esterilización.
Descontaminar y aplicar normas de limpieza en el mate-
rial de laboratorio
3. ¿En qué momento y por qué se realiza la descontaminación?
4. ¿Cómo es el proceso de limpieza del material que no está
muy sucio y no debe descontaminarse?
5. ¿Cómo se comprueba que el material está perfectamente
limpio?
6. ¿En qué dos casos no se debe utilizar agua caliente?
7. Nombra algunos limpiadores enérgicos para material con
suciedad muy incrustada o resistente.
14. ¿A qué concentración, en tanto por ciento, sirve el hipoclo-
rito sódico como desinfectante de alto nivel? ¿Cuántos g/l
de cloro libre contiene esta solución como desinfectante de
alto nivel?
15. Explica la diferencia entre bactericida y bacteriostático y
pon un ejemplo de desinfectante bactericida y otro de desin-
fectante bacteriostático.
16. ¿En qué categorías se clasifica la desinfección? Cita un desin-
fectante para cada categoría.
17. ¿Qué es un material crítico y no crítico? ¿Qué tipo de desin-
fección requieren los materiales críticos?
Elegir el método adecuado de esterilización y preparar el
material
18. Clasifica los siguientes métodos de esterilización en físicos
o químicos.

8. Explica la limpieza, secado y curado de una bureta. • Filtración

9. Comenta las cualidades que debe tener un buen detergente. • Calor seco
Elegir el método adecuado de desinfección y aplicar los • Glutaraldehído
desinfectantes más comunes
• Rayos beta
10. ¿En qué consiste la ebullición? ¿Y la pasteurización?
• Óxido de etileno
11. Completa la siguiente tabla en tu cuaderno:
• Tindalización
Ebulli- Pasteuri- Desinfec- • Vapor de agua a presión
ción zación tante
19. ¿Qué materiales se pueden esterilizar en autoclave y cuáles
Método no? Pon ejemplos.
Temperatura 20. Cita dos ventajas que ofrece el Poupinel (calor seco) frente
Tiempo al calor húmedo del autoclave.
de actuación
21. Para esterilizar un bisturí (material quirúrgico), señala qué
Espectro método de esterilización físico elegirías entre calor seco,
de acción calor húmedo, radiaciones ionizantes o radiaciones ultra-
violeta, indicando las ventajas e inconvenientes de cada
12. Completa en tu cuaderno esta tabla de desinfectantes: método.
22. Para esterilizar material plástico que no resiste temperatu-
Espectro Ventajas Inconve- ras superiores a 100 ºC, ¿qué métodos químicos de esteri-
de acción nientes lización utilizarías? Indica las ventajas e inconvenientes de
Hipoclorito estos métodos.
sódico Acondicionar el material limpio para su esterilización
Solución 23. Explica cómo se limpian y acondicionan los siguientes ma-
concentrada teriales: matraz Erlenmeyer, tubo de centrífuga, placa Petri
de NaHClO y guantes de látex.
Alcohol Utilizar e interpretar los controles del proceso de esteri-
etílico lización
13. Partiendo de una solución acuosa de hipoclorito sódico 24. Cita los tres tipos de controles para la esterilización.
que contiene 50 g/l de cloro libre, si diluimos esta solución
25. ¿Qué registran los controles físicos?
al 2 %, ¿para qué se puede utilizar y cuántos g/l de cloro
libre contendrá? 26. ¿Qué son los controles químicos? ¿Cómo se utilizan?

103