PRACTICA 2

FROTIS Y TINCIONES BÁSICAS

2.1. FROTIS Y TINCION SIMPLE

Materia: Lab. Microbiología

Profesora: Ivonne Chaidez Zúñiga
Integrantes: Grupo: 5-A
Oscar Daniel Duran Flores ID: 247909 Fecha: 05/09/22

Lugar: Aguascalientes
Diana Alejandra Velázquez Limón ID: 243934
INTRODUCIÓN
Para poder distinguir las bacterias con el microscopio es necesario teñirlas ya que estos
microorganismos son tan pequeños que por la luz que pasa son invisibles.
Hay diferentes tipos de tinción:

• Básica o simple: Se usa solamente un colorante este nos ayuda a distinguir tipos
de microorganismos por su forma y agrupación como cocos, bacilos, etc.
• Especiales: se usan 2 o mas colorantes este nos ayuda a ver estructuras
específicas.
En la tinción los colorantes sufren combinación química con el protoplasma de las
bacterias. Los colorantes utilizados. Los colorantes básicos consisten de cationes teñidos
con un anión incoloro; ocurre lo contrario con los colorantes ácidos. Las células
bacterianas son ricas en ácidos nucleicos y portan cargas negativas en los grupos fosfato.
Esta se combina con las cargas de los colorantes básicos. Los colorantes ácidos no tiñen
a las células bacterianas y por tanto pueden utilizarse para teñir el material de fondo a
fin de proporcionar un contraste de color.
Un frotis bacteriano: Es una extensión en forma de película que se hace sobre un
portaobjetos, se usa solución salina para extenderla. Para la realización de un buen frotis
es necesario fijarlo este se puede hacer por medio de calor o por fijación química. La que
es por calor es utilizada para ver morfología celular.
OBJETIVOS:
1. Conocer la importancia del proceso de tinción de microorganismos.
2. Comprender la secuencia metodológica que se deben seguir para la preparación de
una muestra bacteriológica teñida.
3. Realizar la tinción de una muestra bacteriana.
MATERIALES Y REACTIVOS:
1. Microscopio
2. Portaobjetos
3. Aceite de inmersión
4. Asa bacteriológica
5. Mechero
6. Colorante: Azul de metileno, Cristal violeta o safranina
7. Cultivos bacterianos (Staphylococcus sp y Escherichia coli).
METODOLOGÍA:
1. Coloque en el centro del portaobjetos una gota pequeña de solución salina.

2. Con un palito de madera pasarlo por los dientes para tomar placa dental, esta
mezclarla con la solución salina en el portaobjetos, después de esto quemar el
palito con el mechero.
3. Deje secar perfectamente la muestra.

4. Fijar la muestra mediante la aplicación de calor, haciendo pasar la preparación en

3 o 4 ocasiones a través de la flama del mechero.

5. Colocar el portaobjetos sobre la bandeja de coloración.

6. Agregar la solución colorante directamente sobre el frotis, dejándola reaccionar

de 30 segundos a 1 minuto.

7. Eliminar el exceso de colorante mediante un lavado con agua de la llave teniendo

precaución de no aplicar directamente sobre el frotis.

8. Permitir el secado de la preparación.

 9. Observar al microscopio con los objetivos de 40X y 100X.
RESULTADOS:

Visto con el ocular de 100X Visto con el ocular de 100X Visto con el ocular de 100X
(total: 1000X) (total: 1000X) (total: 1000X)

Se puede observar a parte de En este campo se puede En este campo se observa un

basura, estreptococos estos
están formados por cocos
gram positivos, estos forman
cadenas de tamaño variable,
no son móviles, no forman
esporas, forman capsulas.
observar estreptococos y
bacilos, son solitarios pero
pueden formar diplobacilos o
estreptobacilos
neutrófilo, Los neutrófilos
forman una defensa muy
importante contra la mayoría
de los tipos de infección.
Normalmente, la mayoría de
nuestros glóbulos blancos son

DISCUSIÓN
Durante la practica surgió la pregunta sobre porque funcionan este tipo de colorantes
para la tinción simple, cual es el componente que interfiere en el proceso a lo cual según
Harisha “Se utilizan colorantes básicos debido a que contiene un cromógeno compuesto
que da color al tinte con carga positiva, ya que alrededor celular de las bacterias posee
componentes con carga negativa que atraen el cromógeno” dándonos a entender la
importancia de las cargas en las bacterias y su división como Gram + y Gram -.
CONCLUSIÓN

• Con la práctica se pudo observar la forma correcta de realizar un frotis sanguíneo

y como esto influye al momento de observarlo en el microscopio en la claridad en
las cuales podemos ver las imágenes y distinguir los diferentes microorganismos
que estamos observando ya que si por ejemplo agregamos menos colorante del
que e necesita no podremos observar a las diferentes bacterias, también
observamos la importancia de realizar una correcta fijación.
 • También pudimos consolidar los conocimientos adquiridos en la clase de
microbiología sobre la clasificación de las bacterias de acuerdo a su forma y
agrupación.
CUESTIONARIO
1. ¿Qué tipo de información podemos obtener mediante una tinción simple?
Se utiliza principalmente para determinar la morfología y la organización de las células
presentes en una muestra.

2. ¿Qué ventajas tiene una preparación teñida sobre una preparación en fresco?
Naturalmente las células no tienen color, por lo que es necesario hacerlas visibles de
alguna manera cuando se observan en el microscopio permitiendo la visibilidad de las
células de una forma más clara.

3. Investiga el nombre de 3 colorantes usados en la tinción de muestras bacteriológicas

(diferentes a los que se mencionaron en esta práctica)

Verde malaquita: tiene una carga positiva débil, por tanto, se une débilmente a
la bacteria. Penetra en las células vegetativa. Cuando se calienta la preparación
también penetra las endosporas.

Fucsina básica: Utilizando fucsina ácida, el músculo se tiñe de rojo, y el colágeno

de verde o azul, dependiendo del colorante que se seleccione. Colágeno: Azul
oscuro. se emplea en tinciones trícromas de tejido conjuntivo según Mallory y
van Gieson. Mallory

Azul de metileno: es una tinción lista para su uso para diferenciar los
organismos no acidorresistentes de las micobacterias.

BIBLIOGRAFIA

1. (2001). Microbiological Applications: Laboratory Manual in General Microbiology (8 th ed.).

The McGraw-Hill Companies.
2. Harisha, S. (2006). An Introduction to Practical Biotechnology (1st). Firewall Media.
3. Moyes, R. B., Reynolds, J., & Breakwell, D. P. (2009). Preliminary staining of bacteria:
Simple stains. Current Protocols in Microbiology, (SUPPL. 15), 1–5.
4. Pommerville, J. (2013). Alcamo’s Laboratory Fundamentals of Microbiology (10th). Jones
& Bartlett Learning.