Práctica 1: Aplicación de los criterios de Cowan y Steel para la identificación de bacterias.

Número de cepa: 18.

BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA.

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS DE LA B. U. A. P.

LICENCIATURA EN QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO.

ASIGNATURA: LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA 1.

Práctica #1: “Aplicación de los criterios de Cowan y Steel

para la identificación de bacterias”.

FACILITADOR: MENESES SÁNCHEZ MARÍA DE LA CRUZ.

ALUMNO: LÓPEZ PEÑA DAVID.

FECHA: 30 DE AGOSTO DE 2022.

OTOÑO 2022.
Práctica 1: Aplicación de los criterios de Cowan y Steel para la identificación de bacterias.
Número de cepa: 18.
Introducción:
Una de la tarea fundamental del laboratorio de microbiología es la
aplicación de una metodología precisa que permita la identificación de los
microorganismos implicados en procesos clínicos asociados a infecciones o de
aquellos que tienen relación con el hombre.
Cowan y Steel establecieron un grupo de pruebas primarias con las cuales se puede
determinar género a los cuales pertenece; los criterios de Cowan y Steel son un
conjunto de pruebas que agrupan a las bacterias dentro de un género especifico, lo
cual va a ayudar al profesional en una orientación de las pruebas siguientes a
realizar para llegar a la especie bacteriana y así poder dar un correcto diagnóstico
y por consiguiente un tratamiento en los casos clínicos. La identificación de un
aislamiento bacteriano puede realizarse utilizando diferentes combinaciones de
características y diferentes criterios en la evaluación de similitudes. Las pruebas
que incluyen los criterios de Cowan y Steel son:
1. Tinción de Gram: Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular
bacteriana (cocos, bacilos, cocobacilos) como para poder realizar
unaprimera aproximación a la diferenciación bacteriana por la estructura de
su membrana (Gram + o Gram -).
2. Tinción de Shaeffer-Fulton: Es una tinción especifica que permite observar
la presencia o ausencia de esporas en la muestra de bacilos Gram positivos.
3. Tinción de Zielh-Nelssen: Es una técnica de tinción diferencial, usada para
la identificación de bacterias ácido-alcohol resistentes (BAAR) y solo se
realiza para bacilos Gram positivos
4. Metabolismo: Mediante esta prueba se va a determinar si la utilización de
los hidratos de carbono por parte de un microorganismo se realiza por vía
oxidativa (proceso aeróbico, presencia de oxígeno), por vía fermentativa
(proceso anaeróbico, ausencia de oxígeno) o es inerte.
5. Producción de catalasa: Permite observar la presencia de la enzima
catalasa, las bacterias que sintetizan catalasa hidrolizan el peróxido de
hidrógeno en agua y oxigeno gaseoso que se libera en forma de burbujas.
6. Producción de oxidasa: Esta prueba sirve para determinar la presencia de
enzimas oxidasas.
7. Movilidad: Permite observar la movilidad o la no movilidad de una bacteria
al inocularla por punción en un tubo.
8. Requerimientos de aerobiosis y anaerobiosis: Las bacterias se clasifican
en función de sus requerimientos atmosféricos:
a. Aerobias estrictas, que crecen solo en presencia de oxígeno.
b. Anaerobias estrictas, que solo crecen en ausencia de oxígeno.
c. Facultativas, que crecen tanto en aerobiosis como en anaerobiosis.
d. Microaerofilicas, que crecen mejor en una atmosfera con reducida
concentración de oxígeno.
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Número de cepa: 18.
9. Producción de ácido a partir de glucosa: Se realiza en un medio TSI, mide
la capacidad de producir ácido y gas a partir de glucosa u otro carbohidrato
en el medio.
Objetivo:
Realizar, tomando como base los criterios establecidos por Cowan y Steel, las
pruebas bioquímicas fundamentales, que permiten la identificación presuntiva de
las bacterias de interés médico.
Materiales:
 Aza en punta.  Placas con agar nutritivo o soya
 Aza en círculo. tripticasa.
 Mechero.  Reactivo para catalasa.
 Tubo MIO.  Portaobjetos.
 Tubo TSI.  Benzal.
 Tubos con O/F con glucosa.  Algodón.
 Equipos de tinción de Gram  Cepas de bacilos
(cristal violeta, Lugol, alcohol gramnegativos fermentadores y
cetona, safranina). no fermentadores.
Resultados:
La bacteria logro tener crecimiento en aerobiosis y anaerobiosis por lo que se
concluye que es una bacteria anaeróbica facultativa.

Ilustración 1: La bacteria logró crecer en condiciones de Ilustración 2: La bacteria logró crecer en condiciones
anaerobiosis. de aerobiosis.
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Para la prueba bioquímica TSI se obtuvieron

resultados donde es un A/A es decir ácido/ácido
lo cual indica que la bacteria fermenta glucosa,
lactosa o sacarosa.

Ilustración 3: Crecimiento en TSI, indica

presencia de ácido (A/A).

Para la prueba del metabolismo se utilizó un medio O/F,

donde los resultados son que la bacteria es de
metabolismo fermentativo debido a la coloración
amarillenta que genero al ser cultivada.

Ilustración 4: Crecimiento en medio O/F,

presencia de metabolismo fermentativo.
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Para la prueba de movilidad realizada en un medio

MIO, se obtuvieron los resultados de una movilidad
positiva ya que presento turbidez en la muestra.

Ilustración 5: Crecimiento en medio MIO, la

presencia de turbidez indica movilidad
positiva.

Para la prueba de catalasa se utilizó el

reactivo de catalasa (peróxido de
hidrógeno), la cual arrojo un resultado
positivo debido a que hubo presencia de
burbujeo en el lugar en donde se aplicó
el inoculo en el portaobjetos.

Ilustración 6: Prueba de catalasa positiva, la presencia de burbujeo

confirma el resultado.

En la tinción de Gram, se obtuvieron bacilos Gram negativos en la muestra como

se logra observar en las imágenes.

Ilustración 7: Frotis teñido con los colorantes de

Gram.

Ilustración 8: Tinción de Gram, en la imagen

se observan bacilos Gram negativos.
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Cuestionario:
1. ¿Cuál es la importancia de los criterios de Cowan y Steel?
Ayudar al profesional de la salud en una orientación para llegar a la especie
bacteriana y así poder dar un correcto diagnóstico y por consiguiente un tratamiento
en los casos clínicos.
2. ¿Para qué sirve la tinción de Ziehl-Neelsen y cuál es su fundamento?
La tinción de Ziehl-Neelsen sirve para identificar ciertos tipos de microorganismos
(bacterias ácido-alcohol resistentes, BAAR). Se basa en las propiedades de la pared
celular de los microorganismos, la pared está formada por un tipo de ácidos grasos
llamados ácidos micólicos, estos se caracterizan por presentar cadenas muy largas,
cuando los ácidos grasos presentan estructuras muy largas, estos pueden retener
los colorantes con mayor facilidad. En esta tinción se utiliza el compuesto fenólico
carbol fucsina, un colorante básico, la cual es mejorada en presencia de calor,
debido a que la cera se derrite y las moléculas de colorante se mueve con mayor
rapidez hacia el interior de la pared celular, el ácido que se usa posteriormente sirve
para decolorar las células que no fueron teñidas porque su pared no era lo
suficientemente afín al colorante. Las bacterias que resisten esta decoloración se
llaman ácido alcohol resistentes (BAAR).
3. ¿Cuál es el fundamento de la prueba de oxidasa y de catalasa y cómo se
realiza en el laboratorio?
La prueba de oxidasa determina la presencia del citocromo C, el citocromo C oxida
al NNN´N´, tetrametil,1-4, fenilendiamina (solución acuosa al 1% (p/v). La oxidación
se detecta como color azul. Esta se realiza con ayuda de una tira de oxidasa la cual
ya tiene este reactivo, se coloca con ayuda de un aza de circulo en la parte donde
se encuentra el reactivo y se esparce por toda la parte que indica la tira, posterior a
esto se observa si existe un cambio de color o no.
La prueba de catalasa se fundamenta en que la catalasa es una enzima que poseen
la mayoría de las bacterias aerobias. Descomponen el peróxido de hidrógeno en
agua y oxígeno. El desprendimiento de burbujas procedentes del oxígeno indica
que la prueba es positiva. Esta prueba se realiza con ayuda de un portaobjetos, un
aza circular y peróxido de hidrógeno, primero se coloca una pequeña cantidad del
inoculo en la parte central del portaobjetos, posterior a esto, se le agrega una gota
de peróxido y se observa la reacción. Si existe la formación de burbujas es positivo.
4. ¿En qué medios se puede realizar la prueba de movilidad y cómo se
interpreta?
El Medio para la prueba de Movilidad (MIO) es un medio semisólido utilizado para
la detección de la motilidad bacteriana. La motilidad se manifiesta
macroscópicamente por una zona difusa de crecimiento que se extiende desde la
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línea de inoculación. Las bacterias no móviles generalmente dan un crecimiento que
se limita a la línea de siembra, tienen márgenes claramente definidos. Por otro lado,
un resultado positivo se indica por la presencia de turbidez o crecimiento más allá
de la línea de siembra.
El medio semisólido destinado a verificar la movilidad, producción de indol y
de sulfuro de hidrógeno por los microorganismos (SIM) es un medio de cultivo
en el cual la tripteína y la peptona aportan nutrientes para el desarrollo microbiano.
El agar es el agente solidificante y a esta concentración le otorga al medio la
propiedad de ser semisólido, condición necesaria para detectar movilidad, que se
evidencia por el enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde más allá
de la línea de siembra del microorganismo en estudio. Las bacterias no móviles
generalmente dan un crecimiento que se limita a la línea de siembra, tienen
márgenes claramente definidos. Por otro lado, un resultado positivo se indica por la
presencia de turbidez o crecimiento más allá de la línea de siembra.
5. De cada uno de los criterios de Cowan y Steel efectuados a la cepa de
estudio durante la práctica, realiza dibujos y menciona tus resultados.

a. Condiciones de aerobiosis y anaerobiosis:

b. Prueba TSI:
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c. Prueba MIO:
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d. Prueba O/F:

e. Prueba de catalasa:

f. Tinción de Gram:
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Conclusión:
Con base a la morfología y las pruebas realizadas en el laboratorio se pudo llegar a
la identificación del género de la cepa problema la cual presuntivamente se
sospecha sobre Aeromonas o Chromobacterium; se logró en la identificación
gracias a los criterios de Cowan Steel.
Bibliografía:
López. G. (2019). Aplicación de los criterios de Cowan y Steel para la identificación
de bacterias. SCRIBD. Consultado el 27 de agosto de 2022 de:
https://es.scribd.com/document/424219070/Aplicacion-de-Los-Criterios-de-Cowan-
y-Steel-Para-La-Identificacion-de-Bacterias
Briceño. K. (2020). Tinción de Ziehl-Neelsen. Lifeder. Consultado el 28 de agosto
de 2022 de: https://www.lifeder.com/tincion-ziehl-neelsen/
MIO Medio. Britanla. Consultado el 29 de agosto de 2022 de:
https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_6070743f4ed75.pdf