CICLO SUPERIOR DE ANATOMÍA PATOLÓGICA Y CITODIAGNÓTICO.

MÓDULO BIOLOGÍA MOLECULAR Y CITOGENÉTICA

LABORATORIOS DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y

CITOGENÉTICA

1.1 BIOLOGÍA MOLECULAR Y CITOGENÉTICA

En un sentido amplio, se puede definir la biología molecular como la parte de la biología que
estudia la composición, estructura y función de las moléculas biológicamente importantes, así como
de los procesos en los que están implicadas.
Esta definición englobaría principalmente el estudio de ácidos nucleicos y proteínas. Sin
embargo, el vertiginoso desarrollo de nuevas técnicas y metodologías para el estudio de ambas
macromoléculas ha provocado la especialización de los laboratorios y la separación conceptual de
ambos tipos de estudios:
 La denominación «biología molecular» se reserva para el estudio de los ácidos
nucleicos.
 El estudio de proteínas se realiza en laboratorios de proteómica.
Con esta nueva concepción, la biología molecular se ha convertido en la herramienta más
potente de la genética.
Por otro lado, la citogenética se ha considerado, clásicamente, como la parte de la
genética que estudia la estructura, función y comportamiento de los cromosomas en
metafase.
En la actualidad, está tomando auge la citogenética molecular, basada en el uso de técnicas
características de la biología molecular.
En consecuencia tanto el laboratorio de biología molecular como el de citogenética se podrían
considerar laboratorios de genética.
De hecho, la legislación actual no contempla ninguno de estos laboratorios como unidades
independientes. El Real Decreto 1277/2003 del 10 de octubre, por el que se establecen las bases
generales sobre autorización de centros, servicios y establecimientos sanitarios, en su anexo II
dedicado a las definiciones de centros, unidades asistenciales y establecimientos sanitarios, define la
Unidad de Genética como la unidad asistencial que, bajo la responsabilidad de un facultativo
con formación adecuada, está dedicada a la realización de pruebas genéticas y la emisión de los
dictámenes correspondientes con fines diagnósticos.
Según esta definición, ambos laboratorios quedarían encuadrados dentro de la Unidad de
Genética.
Tanto los laboratorios de biología molecular como los de citogenética son laboratorios en
los que se van a realizar técnicas de alta complejidad, que requieren un equipamiento
especializado y costoso y con un problema común: la contaminación. Por ello, ambos laboratorios
se estructuran en dos áreas de trabajo perfectamente separadas: áreas «sucias» y áreas «limpias»,
entre las que no debe ser posible el cruce de materiales para intentar minimizar el riesgo de
contaminación.
A lo largo de esta unidad estudiaremos por separado estos laboratorios, centrándonos en qué
equipamientos los caracterizan, cómo se estructuran y con qué flujo y condiciones de trabajo se rigen.
Finalmente, de forma conjunta, se abordaran las condiciones de seguridad que se requieren en ellos.

1.2 EL LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR

La técnica básica que se lleva a cabo en un laboratorio de biología molecular es la reacción en cadena
de la polimerasa (PCR).
Al ser considerada como la herramienta molecular por excelencia, la estructuración del
laboratorio, los flujos y las formas de trabajo se van a organizar alrededor de esta técnica. En la
unidad didáctica correspondiente se tratará con detalle la PCR, pero cabe apuntar que se trata de una

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técnica de laboratorio que nos permite, a partir de una cantidad mínima de ADN, obtener millones de
copias iguales de esta. Este proceso se llama amplificación de ADN.

1.2.1. EL EQUIPAMIENTO
Tanto en el laboratorio de biología molecular como en el de citogenética y cultivo celular se
puede hablar de dos tipos de equipamientos: un equipamiento específico y un equipamiento
genérico.

Equipamiento específico
El equipamiento específico del laboratorio de biología molecular es el que permite realizar
las técnicas exclusivas de este tipo de laboratorio.
Este equipamiento cuenta con una infraestructura principal, necesaria para la realización de la
PCR y para el análisis de los productos de amplificación que se obtienen. Consta de:
 El termociclador.
 El equipo de electroforesis.
 El documentador de geles.
También forman parte de este equipamiento los aparatos automáticos necesarios para la
realización de procesos específicos, como son:
La extracción de ácidos nucleicos.
La secuenciación de los fragmentos que son objeto de estudio. Esta función la cumplen los
aparatos denominados secuenciadores.

*Termociclador:
El termociclador es el aparato en el que se lleva a cabo la PC R.
Es un aparato básico en cualquier laboratorio de biología molecular. Permite realizar
secuencialmente un número elevado de ciclos repetitivos programables con temperaturas diferentes
y distintos tiempos de incubación, controlados por un microprocesador.
Las partes más destacables del termociclador son el bloque incubador y la tapa
termostatizada:
1- El bloque incubador. Es la parte más importante. Se trata de un soporte metálico, con
múltiples pocillos para colocar los tubos de reacción de PCR.
Es capaz de mantener de manera homogénea, en todo su volumen, durante los tiempos
que se requiera, las distintas temperaturas que se programan para cada fase y en cada uno de los
ciclos de PCR. El rango de temperaturas que pueden alcanzar estos bloques normalmente va de
4 °C a 96 °C.
Los distintos modelos de termocicladores que existen se diferencian principalmente en la tec-
nología que utilizan para calentar y enfriar este bloque:
 Sistemas de aire caliente y frío o resistencias eléctricas (es el sistema utilizado en los
aparatos más antiguos).
 Materiales semiconductores en conjunción con el efecto Peltier* (son los
termocicladores más actuales).
*El efecto Peltier es un efecto termoeléctrico que produce una transferencia de calor entre
dos metales o semiconductores diferentes unidos por dos soldaduras cuando son atravesados por una
corriente eléctrica continua. El resultado final es que uno de los semiconductores se calienta y el otro se
enfría. Si se invierte la polaridad de la corriente continua, también se invierte el calentamiento o
enfriamiento de cada semiconductor.
Este efecto se utiliza en los termocicladores actuales para aumentar o bajar rápidamente la
temperatura del bloque de incubación de los tubos de reacción simplemente invirtiendo la polaridad
de la corriente continua que alimenta el circuito.

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2- La tapa del bloque incubador. Es una tapa termostatizada a 102-105 °C que, una vez cerrada,
entra en contacto directo con la tapa de los tubos de reacción. Esto evita que el agua de la mezcla de
reacción PCR se evapore por efecto de las temperaturas alcanzadas en el bloque incubador y se
condense en la tapa, más fría, con la consiguiente concentración de los reactivos en la mezcla que
alteraría el desarrollo de la reacción.
Un tipo especial de termociclador es el termociclador a tiempo real. Este modelo, además
de los componentes descritos para el termociclador convencional, incorpora un sistema de láser y
detección de fluorescencia capaz de excitar y medir la fluorescencia emitida por cada tubo de
reacción individualmente. Esta tecnología permite detectar la síntesis de productos de
amplificación en tiempo real.

Los modelos de termocicladores más actuales permiten una mayor rapidez en los cambios de
temperatura y una mayor uniformidad de las temperaturas en los bloques de incubación; además,
disponen de un software más potente que permite, por ejemplo, variar las temperaturas o tiempos de
incubación en cada ciclo.

*El equipo de electroforesis:

Otro proceso que se lleva a cabo en el laboratorio de biología molecular y que precisa de
un equipo específico es la electroforesis en gel.
Básicamente este proceso sirve para separar móleculas de ácidos nucleicos de distintos
tamaños, y permite por ejemplo analizar los productos amplificados en una PCR o purificar y obtener
fragmentos de tamaños concretos de ADN.
Se lleva a cabo aplicando un campo eléctrico en una disolución tampón (pH 7,5-7,8) en la
que se sumerge una matriz que contiene las muestras de ácidos nucleicos. Estos migran con mayor
o menor velocidad a través de la matriz en función de la carga neta que poseen (negativa a ese pH),
su tamaño y su conformación tridimensional. La matriz que se utiliza es un gel de agarosa o bien
de poliacrilamida. El uso de uno u otro y la concentración de los componentes dependerá del
tamaño de las moléculas que queremos separar y de la resolución que queramos obtener.
Matrices utilizadas en la electroforesis de ácidos nucleicos

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 Los geles de agarosa (entre 0,5% y 2%) se utilizan para separar fragmentos de mayor
tamaño, permitiendo electroforesis rápidas pero con resolución limitada.
 Los geles de poliacrilamida se utilizan para separar moléculas de menor tamaño
con mayor poder de resolución.
La localización final de los ácidos nucleicos en el gel se realiza con un agente intercalante
fluorescente como el bromuro de etidio.
El equipamiento que permite efectuar la electroforesis consta de:
 Soporte plástico o «cama» donde solidificar el gel.
 Cubeta de electroforesis. Se compone de:
o Un soporte central para la «cama» con el gel.
o Dos zonas de depósito de tampón de electroforesis en cada uno de los
extremos.
o Electrodos positivo y negativo en cada extremo.
 Fuente de alimentación, que suministre corriente eléctrica continua a la cubeta de
electroforesis. Debe permitir seleccionar voltaje o amperaje y graduar su intensidad.
Documentador de geles
Después de terminar la electroforesis se podrán visualizar los resultados mediante la utilización
del documentador de geles.
El documentador de geles es un equipo que permite visualizar las bandas de ácidos
nucleicos en el gel después de la electroforesis y obtener una fotografía de él.
Este equipo consta, básicamente, de:
 Un transiluminador. Consiste en una fuente de luz ultravioleta (con una
longitud de onda de entre 245-365 nm) situada por debajo de una superficie
transparente al UV donde se coloca el gel. Cuando la luz UV ilumina el gel, el
agente intercalante emite fluorescencia, visualizándose las bandas correspondientes a
las moléculas de ácidos nucleicos.
Una cámara fotográfica o sistema de captación de imágenes. La visualización del gel se
realiza con una cámara fotográfica (integrada en la parte superior de la cámara oscura), adecuada
para trabajar con luz UV y controlada por un software específico. Con esta cámara es posible
visualizar el gel en la pantalla de un monitor, mejorar las condiciones de la imagen, obtener
fotografías y realizar mediciones.

Para evitar el peligro que supone la exposición sin protección del manipulador o manipuladora a
la luz UV, en los documentadores actuales se suele incluir el transiluminador dentro de una
cámara oscura, de manera que la fuente de luz solo puede encenderse cuando la puerta de la
cámara oscura está cerrada.

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CUBETAS DE ELECTROFORESIS

TRASLUMINADOR UV.

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Equipamiento genérico
El equipamiento genérico es común con otro tipo de laboratorios, aunque algunos aparatos
puedan tener características o adaptaciones especiales para aplicaciones concretas de biología
molecular. En este sentido, cabe destacar los siguientes equipamientos:
- La cabina de bioseguridad. En los laboratorios de biología molecular se deben utilizar cabinas
de flujo laminar vertical de clase II, que protegen de contaminación a la muestra, a la persona
manipuladora y al medio ambiente.
Su utilización es particularmente importante
cuando se trabaja con ARN (extracción y pu-
rificación de ARN, preparación de reactivos,
manipulación de las muestras con ARN, etc.),
puesto que las ARNasas son omnipresentes y
pueden degradar el ARN de una muestra rápi-
damente.
Son también imprescindibles si se trabaja con
cultivos celulares.
- El sistema de purificación de agua. El labo-
ratorio de biología molecular requiere un sumi-
nistro estable de agua purificada tipo II y agua
ultrapura tipo I.
En el mercado hay muchos equipos de purifica-
ción de agua basados en distintas tecnologías,
como electrodesionización, resinas de inter-
cambio iónico, ósmosis inversa, filtración, etc.
La elección de uno u otro dependerá del
consumo diario de ambos tipos de agua.
Cuando el consumo de ambos tipos de agua es
muy bajo, se pueden adquirir como si se tratara de un reactivo más.
-El espectrofotómetro. La medida de la concentración de ácido nucleico de una muestra y de su
pureza requiere lecturas de absorbancia en un rango
de longitudes de onda comprendidas entre 230 y 320
nm, por lo que se requiere un espectrofotómetro que
cubra ese rango.
Dado que en ocasiones la cantidad de muestra es
muy pequeña, se han diseñado espectrofotómetros
específicos para cuantificar ácidos nucleicos que
utilizan cantidades mínimas de muestra (1 pl)
basados en cubetas capilares.
- Microscopio de luz transmitida y fluores-
cencia. En biología molecular, un microscopio de
fluorescencia es imprescindible para interpretar las
técnicas de hibridación in situ fluorescente.
Debe estar dotado con los filtros de fluorescencia
adecuados para los fluorocromos utilizados y es aconsejable que tenga un sistema de captación
de imágenes.
- Autoclave. Es imprescindible si se trabaja con microorganismos y aconsejable en cualquier
caso. Aunque la casi totalidad del material fungible que se utiliza en el laboratorio se puede
adquirir estéril, la utilización del autoclave puede disminuir en gran medida los costes de las
tareas del laboratorio.
- Incubador o estufa. Las características de los incubadores que se usan en el laboratorio de
biología molecular dependen de las muestras que se estudien y de las técnicas que se apliquen.

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Si se trabaja con bacterias se necesitarán estufas de cultivo de microbiología. Si se trabaja con

cultivos celulares se requerirán incubadores con CO, y humedad controlada.
- Baño termostático, termobloque y placa calefactora. Esta clase de equipamiento con temperatura
regulable es básico para realizar todo tipo de incubaciones, digestiones y tratamientos
enzimáticos.
La placa calefactora, en concreto, es importante que pueda alcanzar de manera
homogénea y estable temperaturas de 95-100 °C para desnaturalizar el ADN de células y tejidos
en las técnicas de hibridación in situ.
Centrífuga y microcentrífuga. Las centrífugas y microcentrífugas tienen que tener rotores que
permitan centrifugar desde tubos de 50 ml a Eppendorf de 0,2 ml. Lo ideal es que alguna sea
refrigerada.
Neveras y congeladores de - 20 °C y - 80 °C. Una infraestructura de frío con neveras y congeladores
es fundamental para conservar los reactivos y las muestras:
 La mayor parte de los reactivos (sobre todo las enzimas) se conserva a - 20 °C.
 La conservación de todas las muestras de ARN y el almacenamiento a largo plazo
de muestras de ADN debe realizarse a - 80 °C.
Otros equipamientos. En este apartado se puede incluir equipamiento básico de cualquier
laboratorio, como balanza para pesar reactivos, agitadores magnéticos para preparación de
reactivos, vórtex para homogeneizar muestras y reactivos, pHmetro, etc.

Placa calefactora para hibridación in situ

Microcentrífuga.

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1.2.2. LA ESTRUCTURA DEL LABORATORIO

La estructura del laboratorio de biología molecular está condicionada por la técnica principal que
se realiza. La realización de una PCR implica:
 Preparación de reactivos.
 Extracción y purificación de ADN de una muestra biológica.
 Reacción de amplificación propiamente dicha.
 Análisis de los productos de la reacción mediante electroforesis y documentación del
gel.
Cada una de estas actividades debe realizarse en un área de trabajo independiente,
físicamente separadas en salas distintas y, cada una, con su propio equipamiento y material de
trabajo, de manera que estos no puedan ser intercambiables entre ellas. En consecuencia, un
laboratorio de biología molecular debe constar, como mínimo, de cuatro salas independientes:
1- Sala de preparación de reactivos. Se considera que esta es el área «limpia» del laboratorio (sin
ADN). En ella se preparan todos los reactivos que se van a utilizar en el laboratorio, incluyendo la
mezcla de reacción de PCR.
Es fundamental que los reactivos no se conta-
minen con ADN, por ello esta sala debería tener una
ligera presión positiva, para evitar la entrada de
cualquier fuente de contaminación y es
imprescindible que disponga de una cabina de
bioseguridad.
2- Sala de preparación de muestras y extracción de
ADN. Esta es una sala «sucia» (con ADN), por lo
que sería conveniente que tuviese una ligera presión
negativa, para evitar que pueda escaparse material
contaminante. Debe contar con una cabina de
bioseguridad y un espectrofotómetro.
3- Sala de PCR. Dispone de los termocicladores
necesarios para llevar a cabo la PCR y un espacio de
trabajo para añadir las muestras de ADN a la mezcla
de reacción.
4- Sala de post-PCR. Dispone de los equipos de
electroforesis y de documentación de geles. Esta es
también una sala «sucia», fuente importante de contaminación por productos amplificados, por lo
que también debería tener una ligera presión negativa. En situaciones ideales la documentación de
geles puede situarse en una sala oscura junto con el microscopio de fluorescencia.
Por supuesto, esta estructura mínima se puede complicar dependiendo de las tecnologías
que se usen en el laboratorio, Así, por ejemplo, puede requerirse una sala «limpia» adicional para
cultivos celulares y salas «sucias» para los secuenciadores, técnicas de hibridación, etc.

1.2.3. EL FLUJO DE TRABAJO

La estructura parcelada del laboratorio de biología molecular en salas no es condición
suficiente para garantizar el objetivo de que los resultados de las PCR sean fiables. Es necesario que
el personal técnico sea consciente de la extremada facilidad con la que se puede producir la
contaminación de las muestras problema y por ello hay que tener muy presente el flujo de trabajo.
El flujo de trabajo marca el sentido único de los procesos en el circuito de trabajo.
En el laboratorio de biología molecular, el flujo de trabajo y de las muestras debe ser siempre
unidireccional, desde las áreas limpias hacia las sucias, en el sentido único hacia delante:
pre-PCR  PCR  post-PCR.

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Flujo de trabajo unidireccional en los laboratorios de biología molecular. El

recuadro verde indica que el procedimiento se realiza en una sala limpia. Los
recuadros morados indican que los procedimientos se realizan en salas sucias.
Las flechas verdes indican flujo unidireccional correcto de muestras y trabajo. Las
flechas rojas indican flujo incorrecto de muestras.

Este flujo implica y pone de manifiesto la necesidad de que cada área de trabajo sea
autónoma en el sentido de que debe disponer de su propia infraestructura básica (cabinas,
centrífugas, baños, neveras, etc.) y del material de trabajo, pues no es posible el intercambio entre
las distintas salas.
El material de trabajo son las micropipetas automáticas, los equipos de protección
individual (guantes, batas desechables, gafas de protección, etc.) o el material fungible (tubos,
Eppendorf, gradillas, pipetas desechables, puntas de pipeta, rotuladores, etc.) y, por supuesto, se
debe evitar el retorno de cualquiera de ellos de las áreas «sucias» a las áreas «limpias».

1.2.4. LAS CONDICIONES DE TRABAJO

Es evidente que en el laboratorio de biología molecular se aplican las normas y restricciones
de buenas prácticas genéricas que imperan en cualquier laboratorio, como la prohibición de comer,
beber, fumar, maquillarse, etc.
Pero también hay que establecer unas condicio nes de trabajo específicas, que se establecen
con miras a impedir, o cuando menos minimizar, la contaminación de las muestras y que consisten
en unas normas para la manipulación de materiales y reactivas en condiciones de esterilidad, como
la técnica aséptica.

- La contaminación de las muestras

En este contexto, el término contaminación hay que entenderlo en su significado más
amplio, como la introducción accidental en la muestra de material exógeno que altera su pureza.
Esta contaminación causa resultados erróneos o no interpretables. En este sentido, los dos
tipos de contaminantes más peligrosos son:
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 Los ácidos nucleicos extraños a la muestra.

 Las enzimas no deseadas que degradan ácidos nucleicos (nucleasas).
Las fuentes de contaminación pueden ser muy variadas:
 Contaminación cruzada por:
o Material no amplificado del medio ambiente o microorganismos
ambientales. Es el caso de los aerosoles generados durante la manipulación de
las muestras, como pipeteos, apertura de tubos Eppendorf, centrifugación,
etc.
o Contaminantes procedentes del propio personal técnico de laboratorio.
Como pueden ser células de descamación de la piel, pelo, guantes
contaminados, etc.
o Contaminantes de las superficies de trabajo. Son los que se acumulan sobre
las superficies de trabajo.
 Contaminación por productos amplificados generados mediante PCR en el propio
laboratorio (carryover en la terminología inglesa).
 Contaminación de los reactivos comerciales y del material fungible. Esto es
debido a que la mayoría de los fabricantes garantizan la esterilidad de sus
productos, pero esto no es sinónimo de ausencia de ADN o nucleasas. El término
estéril significa ausencia de microorganismos viables, pero algunos métodos de este-
rilización no garantizan la eliminación del ADN de los microorganismos ni la
inactivación de las enzimas, sobre todo las ARNasas.

- Normas para la manipulación de materiales y reactivos

Una vez identificadas las fuentes de contaminación, hay que intentar anularlas o
prevenirlas. Algunas de las medidas más importantes, como la separación física de las áreas de
trabajo y el flujo unidireccional entre ellas, ya han sido señaladas.
La contaminación de reactivos y material fungible por nucleasas se puede evitar
utilizando solo aquellos que estén certificados como libres de nucleasas. La posible
contaminación por ADN no se puede controlar, por lo que es importante llevar un control
exhaustivo de los reactivos (lotes, fechas de apertura, fechas de caducidad, alicuotación) y realizar
controles negativos en todas las técnicas.
Pero una de las condiciones de trabajo más importantes para prevenir la contaminación
consiste en el uso de buenos hábitos de trabajo en condiciones de esterilidad basados en la técnica
aséptica.

- Técnica aséptica
En los laboratorios de biología molecular el concepto de técnica aséptica se entiende como el
conjunto de actividades encaminadas a prevenir la contaminación por microorganismos,
ácidos nucleicos y nucleasas.
De igual forma, hay que adaptar ese conjunto de actividades al entorno de trabajo de este tipo de
laboratorios. Al respecto, en el esquema a pie de página se reseñan las más importantes, teniendo
en cuenta que muchas de ellas cumplen un doble objetivo: prevenir la contaminación de la muestra y
evitar la contaminación del trabajador por productos biológicos y químicos peligrosos.
 Lavado de manos. El lavado frecuente de manos es la norma de higiene básica
cuando se manipulan muestras biológicas y reactivos químicos, independientemente de
que se usen guantes.
 Uso de equipos de protección individual (EPI). Los principales equipos de protección in-
dividual son guantes sin talco y batas. El uso de guantes debe compaginarse con prácticas
de trabajo que impidan su contaminación con las muestras manipuladas.

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Así, por ejemplo, los tubos Eppendorf con muestras y reactivos deben centrifugarse
brevemente antes de ser abiertos. En caso contrario, no solo se pueden producir aerosoles,
sino también micro-salpicaduras de pequeñas cantidades del contenido retenidas en la cara
interna de la tapa, contaminando guantes y superficies.
 Descontaminación de superficies. La limpieza y descontaminación de las superficies de
trabajo se pueden realizar por métodos físicos, como la irradiación con luz UV o por
métodos químicos, como el lavado con soluciones de hipoclorito sódico al 10% o
descontaminan-tes comerciales (DNA Zap, DNA Remover, DNA Away, etc.).
 Prevención de contaminación ambiental. Para prevenir la contaminación cruzada am-
biental es imprescindible el uso de:
o Cabinas de bioseguridad de clase II.
o Puntas de micropipeta especiales. Evitan la contaminación de las pipetas
automáticas por aerosoles producidos al aspirar los fluidos. Estas puntas de
pipeta pueden ser de dos tipos:
 De desplazamiento positivo: tienen en su interior un émbolo o pistón que
las convierte en auténticas microjeringas. Las pipetas que las utilizan tienen
un vástago que encaja en el émbolo, el cual sube y baja en el interior de la
punta succionando y expulsando el fluido, sin que este toque en ningún
momento el cuerpo de la pipeta ni se produzcan aerosoles.
 Puntas con filtro: son las más utilizadas. Tienen un filtro en su interior que
impide que los posibles aerosoles alcancen el cuerpo de la pipeta.
 Prevención de carryover. La contaminación por productos amplificados es un serio
problema en laboratorios de diagnóstico que amplifican continuamente las mismas
secuencias diana en un número muy elevado de muestras, puesto que la contaminación
con cantidades muy pequeñas de estos productos es suficiente para producir falsos
positivos.
La norma principal para evitar el carryover es no revertir nunca el flujo de trabajo
transportando muestras amplificadas desde las áreas de PCR o post-PCR a las zonas de
preparación de muestras y purificación de ácidos nucleicos (pre-PCR).

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Esquema de una punta de pipeta automática de desplazamiento positivo y su funcionamiento

1.2.5. EL USO EFICIENTE DE LOS RECURSOS

El de biología molecular es un laboratorio muy especializado con unos elevados costes,
tanto en equipamiento e infraestructuras, como en reactivos. Por ello, para una eficiente gestión
de los recursos es imprescindible implantar estándares de calidad adecuados y desarrollar
indicadores de calidad que permitan comprobar que funcionan correctamente.
Lo ideal es que el laboratorio esté certificado por una empresa acreditadora para el
cumplimiento de la norma de calidad ISO vigente en cada momento. En cualquier caso, el uso
eficiente de los recursos debería contemplar los siguientes puntos mínimos:
 Equipamiento e infraestructuras. Se debe contar con un plan de mantenimiento (diario,
semanal, mensual, etc.) y de revisiones técnicas periódicas.
El mantenimiento debe incluir las calibraciones, si se requieren y la limpieza de los equipos.
 Reactivos. Hay que asegurar la trazabilidad de los reactivos, desde su recepción hasta su
consumo o eliminación por caducidad.
Esto implica registros de entrada, control de lotes y caducidades y almacenamiento correcto.
 Recursos humanos. Todo el personal de nueva incorporación debe recibir el adiestramiento
adecuado a las funciones que vaya a desempeñar, así como en materia de seguridad y
gestión de residuos.
Se debe diseñar también un plan de formación continuada para adecuar los
conocimientos del personal de laboratorio a la rápida evolución que están
experimentando las tecnologías y procedimientos utilizados en biolo gía molecular.
 Técnicas. Todos los procedimientos técnicos deben estandarizarse mediante
procedimientos normalizados de trabajo que incluyan todos los aspectos de la técnica, desde
la recepción de muestras hasta la emisión de informes, si procede, con especificación de los
controles necesarios.
En los laboratorios de diagnóstico, además, es imprescindible una buena comunicació n
con los clínicos solicitantes de las pruebas, para evitar repeticiones y solicitudes
inadecuadas.
 Gestión medioambiental. El laboratorio debería contar con un código de buenas prácticas
medioambientales para:
o Intentar reducir, en la medida de lo posible, los consumos de agua, electricidad
y papel.

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o Garantizar el correcto reciclado de los residuos de tipo urbano.

La infraestructura básica del laboratorio debería también estar acorde con este principio
(grifos de bajo caudal, iluminación de bajo consumo, aislamiento, etc.).

1.3. EL LABORATORIO DE CITOGENÉTICA Y CULTIVOS

CELULARES
Para clarificar los conceptos a que nos referiremos, tenemos que establecer, desde el
principio, la diferenciación entre dos tipos de laboratorios:
 El laboratorio de cultivos celulares tiene como objetivo la propagación o
crecimiento de células eucarióticas de organismos pluricelulares en medios de
cultivo artificiales en condiciones controladas.
 El laboratorio de citogenética tiene como objetivo el estudio de los cromosomas
de especies eucarióticas. Centrándonos en el campo de la medicina, el laboratorio de
citogenética humana se dedica al estudio de los cromosomas humanos, tanto desde
una perspectiva morfológica (cariotipo), como molecular (citogenética molecular).
Aunque, en virtud de sus respectivos objetivos, se puede suponer que ambos tipos de
laboratorios son muy diferentes, la realidad es que tienen muchos puntos en común, tanto en
estructura, como en equipamiento y condiciones de trabajo.
Ambos tipos de laboratorio comparten también su principal problema: la contaminación
de los cultivos por microorganismos (bacterias, hongos, micoplasmas, virus). Estos microorganismos
tienen una velocidad de crecimiento en cultivo muy superior a la de las células eucarióticas, por lo
que provocan la muerte del cultivo en poco tiempo.
El laboratorio de citogenética se puede considerar como una ampliación especializada del
laboratorio genérico de cultivos celulares que engloba:
 Un área de cultivo celular enfocada a la obtención de células en mitosis.
 Un área de genética enfocada al estudio de los cromosomas metafásicos.
Por supuesto, en ambos tipos de laboratorios se debe implantar una política de calidad para
el uso eficiente de los recursos similar a la descrita para los laboratorios de biología molecular.
Dado que el laboratorio de citogenética engloba más tecnologías y presenta mayor
complejidad que el de cultivos celulares, vamos a referirnos a él principalmente para describir el
equipamiento, la estructura y el flujo y las condiciones de trabajo.

1.3.1 EL EQUIPAMIENTO:
El laboratorio de citogenética requiere, por un lado, equipamiento específico para realizar
cultivos celulares, por otro lado, equipamiento específico para técnicas de citogenética y, finalmente,
equipamiento común a otros laboratorios.

1- Equipamiento específico para cultivos celulares

El equipo específico para cultivos celulares consta de una cabina de flujo laminar, un
incubador de CO2, un microscopio invertido y un equipo de criogenia.

Cabina de flujo laminar

La cabina de flujo laminar es la infraestructura en el interior de la cual se realizan todos los
procesos y manipulaciones de cultivos celulares: preparación de medios, siembra de los cultivos,
cambios de medio, subcultivos, etc.
La cabina adecuada para cultivos celulares es la cabina de seguridad biológica de clase II, que
previene la contaminación del cultivo y protege al trabajador y al medio ambiente.
Consta de los siguientes elementos:

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 Un panel frontal transparente, que contribuye a mantener la estabilidad del flujo

laminar en el interior.
 Una rejilla frontal, que genera una corriente entrante de aire que impide el escape de
posibles contaminantes por la ventana de trabajo.
 Un sistema mecánico que impulsa el aire entrante y el aire recircularizado hacia la
parte superior de la cabina.
 Un filtro HEPA de gran superficie,
que forma el techo de la cabina. Parte
del aire impulsado por el sistema
mecánico (70% en las cabinas IIA y
30% en las cabinas IIB) se fuerza a pasar
a través de este filtro, generando un
flujo laminar estable libre de
partículas y microorganismos.
 Un segundo filtro HEPA, más
pequeño que el anterior y situado por
encima de este, por el que se elimina
al exterior el resto del aire impulsado
por el sistema mecánico.

Filtros HEPA
Los filtros HEPA (del inglés, High Efficiency Particle
Arresting) son filtros de aire de alta eficiencia que
retienen partículas de tamaño superior a 0,2 μm con
una eficacia del 99,995%. Colocados en las cabinas de
flujo laminar, retienen bacterias, hongos, esporas y
levaduras, evitando la contaminación de los cultivos por estos microorganismos presentes en el medio
ambiente.

Incubador de CO2
El incubador de CO2 es el aparato que proporciona las condiciones ambientales óptimas para
el crecimiento de las células en el medio de cultivo.
Consta de los siguientes dispositivos:
 Control de temperatura, responsable de fijar y mantener estable la temperatura
óptima para cada tipo de cultivo.
 Recircularización del aire interior, para homogeneizar la temperatura.
 Control de CO2. El CO2 puro se suministra comprimido en botellas presurizadas y este
dispositivo lo mezcla con aire en la proporción adecuada (4-7%) y lo inyecta en el
interior del incubador.
 Control de humedad. En el interior del incubador se requiere una humedad ambiente
elevada para evitar la evaporación del medio de cultivo. Los incubadores más sencillos
lo consiguen, simplemente, colocando una bandeja con agua en el suelo del incubador.
Sin embargo, esta solución no es la ideal por la facilidad con la que se contamina esa
agua. Por ello, los incubadores actuales incorporan un dispositivo de control de
humedad que inyecta agua estéril.

Incubador roller
Un tipo especial de incubador, que no se utiliza en citogenética pero sí en algunos laboratorios
de cultivos celulares, es el llamado incubador roller. Se emplea para incubar cultivos de células que
solo crecen en monocapa en botellas especiales cilíndricas con una gran superficie de adhesión.

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Este incubador incluye en su interior un sistema de rotación a baja velocidad sobre el que se colocan
las botellas de cultivo, de manera que van rotando lentamente y las células pueden crecer en toda la
superficie de la botella.

Incubador de CO2 para cultivos celulares

Microscopio invertido
El control del crecimiento de un cultivo se realiza por observación microscópica directa. Ahora
bien, el tamaño de los frascos de cultivo impide la utilización de un microscopio óptico convencional
y por ello se recurre a un microscopio invertido.
El microscopio invertido se caracteriza por tener invertidas la posición de la fuente de luz
(por encima de la platina) y el revólver de objetivos (por debajo
de la platina) respecto de un microscopio convencional.
Lo ideal, además, es que el microscopio esté equipado
con un sistema de contraste de fases para facilitar la
visualización de las células en crecimiento, ya que se trata de
estructuras vivas, transparentes y sin coloración.

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Equipo de criogenia
El equipo de criogenia permite conservar a largo plazo y en forma viable muestras de células y
líneas celulares.
El equipo de criogenia mínimo está constituido por un tanque o depósito de nitrógeno
líquido. Se puede ampliar con una nodriza para rellenar el tanque o con una instalación que conecte
con un suministro centralizado de nitrógeno.
Es un equipamiento imprescindible en los laboratorios de cultivos celulares, optativo en los de
cito-genética.

2- Equipamiento específico para citogenética

En el equipo específico para citogenética son fundamentales:
 Un equipo de análisis de imagen. Es básico para documentar y analizar metafases,
con el fin de obtener un cariotipo. Consta de los siguientes elementos:
o Microscopio óptico convencional de luz transmitida, para visualizar las
metafases teñidas con técnicas de bandeo.
o Cámara digital, para obtener imágenes de las metafases para su posterior
análisis.
o Software específico para análisis de meta-fases. Existen varios programas
informáticos comerciales que analizan las metafases, cromosoma a
cromosoma, permitiendo su reconocimiento con base en el patrón de bandas y
su emparejamiento para obtener el cariotipo.
 Un microscopio óptico convencional y de fluorescencia. Debería ser un
microscopio distinto al del análisis de imagen. Se utiliza para recuentos de células,
estudios de viabilidad y morfología celular, visualización de preparaciones de
hibridación in situ fluorescente, etc.

3- Equipamiento común
Entre el equipamiento común de los laboratorios de citogenética y cultivo celular es habitual
encontrar:
 Un equipo de esterilización. La esterilidad de todo el material y de los reactivos que
estén en contacto con los cultivos es imprescindible. Por esta razón, estos
laboratorios deberían contar con un equipo de esterilización compuesto por:
o Un autoclave para esterilizar todo tipo de material.
o Un sistema de filtración con filtros de 0,22 μm para esterilizar soluciones.
 Un sistema de purificación de agua. El agua utilizada para preparar reactivos y
medios de cultivo tiene que ser ultrapura, estéril y libre de apirógenos.
 Nevera y congeladores de - 20°C y - 80°C. Un sistema de frío es necesario para
conservar a las temperaturas adecuadas los distintos reactivos empleados en el
laboratorio.
 Otros equipamientos. También pueden resultar necesarios otros equipamientos
comunes como centrífugas con rotores apropiados para los tubos con los que se
trabaje, placa calefactora si se hace hibridación in situ, pHmetro, balanza, agitador
magnético, pipeteadores automáticos, etc.

1.3.2. LA ESTRUCTURA DEL LABORATORIO

Al igual que en el laboratorio de biología molecular, la prevención de la contaminación
condiciona la estructura de los laboratorios de citogenética. Por eso, en estos laboratorios también
se aplica el criterio de la separación física de áreas «limpias» y «sucias».
Así, un laboratorio de citogenética completo debe estructurarse como mínimo en tres salas:
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1. Sala de cultivos. Es la sala «limpia» del laboratorio, en la que se van a realizar todos los
procedimientos directamente relacionados con el cultivo celular.
Debe estar situada en una zona tranquila, alejada de vías de paso habituales para evitar
turbulencias. Lo ideal es que esté dotada de un sistema que le suministre aire filtrado y una
ligera presión positiva, para que el aire ambiente esté, en lo posible, libre de
microorganismos.
En esta sala se dispondrán las cabinas de flujo laminar, los incubadores y el microscopio
invertido.
2. Sala de laboratorio convencional. Es la sala «sucia», con el resto del equipamiento,
excepto el equipo de criogenia.
En esta sala se van a realizar todos los procedimientos que no están directamente
relacionados con el cultivo celular, como la preparación de extensiones, tinciones,
cariotipos, citogenética molecular, etc.
Esta área puede tener una zona oscura para el microscopio de fluorescencia.
3. Sala de frío, con los congeladores y el equipo de criogenia. Esta sala debe estar
separada de la sala de cultivos, porque los congeladores generan bastantes turbulencias.
Lo ideal es que esta sala sea una cámara frigorífica, para minimizar el consumo de
nitrógeno líquido y alargar la vida de los congeladores.

1.3.3. LAS CONDICIONES DE TRABAJO: TÉCNICA ASÉPTICA

Los hábitos de trabajo en los laboratorios de cito-genética y cultivos celulares están totalmente
condicionados por la prevención de la contaminación.
En este sentido, las condiciones de trabajo en la sala de cultivos se ajustan a una estricta
técnica aséptica que impida la contaminación de los cultivos por microorganismos; por eso, todas las
manipulaciones se realizan dentro de la cabina de flujo laminar.
Entre las normas más importantes, que afectan también al protocolo de trabajo en la cabina
de flujo laminar, se pueden citar las siguientes:
 Lavado frecuente de manos.
 Uso de guantes y batas desechables estériles. La puerta de la sala siempre debe estar
cerrada.
 Uso exclusivo de material y reactivos estériles. El material desechable estéril no es
intercambiable con el de otras salas.
 No introducir mecheros bunsen en las cabinas porque generan turbulencias que
alteran el flujo laminar.
 Colocar en el interior de la cabina exclusivamente el material que se vaya a utilizar
en la sesión de trabajo.
 No sacar el material estéril de su embalaje hasta el momento de uso, evitando tocar
con él cualquier superficie.
 El material usado reutilizable de vidrio se puede colocar en un recipiente con
hipoclorito al 10% hasta finalizar la sesión de trabajo. Después se lleva al laboratorio
general para su limpieza y esterilización.
 El material fungible utilizado en la cabina se deposita en contenedores adecuados
para material contaminado, que se retiran al finalizar la sesión de trabajo.
 Restringir el acceso a la sala de cultivos exclusivamente al personal que esté realizando
algún procedimiento. No se deben recibir visitas en esta sala.
 Limpieza de las cabinas de flujo laminar con etanol al 70% o desinfectante
comercial apropiado para cabinas al finalizar cada sesión de trabajo.
 En las cabinas dotadas de lámpara germicida UV, esta se puede conectar después
de la limpieza un máximo de 30 minutos.

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 Realizar un mantenimiento programado de las cabinas (mínimo anual) que incluya

comprobación del filtro HEPA.
 Limpieza y desinfección de superficies con etanol al 70% o desinfectantes
apropiados.
 Por supuesto, son también de aplicación todas las normas básicas de trabajo aplicables
a cualquier laboratorio.
Por supuesto que el diseño de los laboratorios también debe responder a criterios para prevenir
riesgos genéricos comunes a cualquier puesto de trabajo ya se trate de un laboratorio, una oficina,
un almacén, etc. como pueden ser riesgos físicos (caídas), eléctricos (electrocuciones) o de incendios.

1.4. LA SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Aunque, como se ha visto en los apartados anteriores, el diseño de los laboratorios responde
al criterio de prevenir la contaminación de las muestras, también debe responder a criterios de
seguridad.
La seguridad en los laboratorios de biología molecular, citogenética y cultivos celulares
hace referencia a la prevención de la exposición del personal a agentes nocivos y también a
impedir la liberación de estos al exterior.
En función de la naturaleza de estos agentes, la seguridad puede ser:
 Biológica o bioseguridad. Trata de la prevención ante agentes patógenos y toxinas.

 Química. Para la prevención en lo referente a la exposición a agentes químicos.

1.4.1. Bioseguridad
La bioseguridad de un laboratorio engloba todas las normas, técnicas, prácticas y hábitos de
trabajo que intentan evitar la exposición accidental (no intencionada) del personal a agentes
biológicos potencialmente peligrosos (patógenos y toxinas) o su liberación al medio ambiente.
En este sentido, cualquier muestra biológica debe considerarse como potencialmente
peligrosa y deben adoptarse las medidas mínimas de protección en lo que hace referencia al uso de
EPI.
En los laboratorios de biología molecular, el principal problema de bioseguridad lo plantea
el trabajo con microorganismos en general y con organismos modificados genéticamente (GMO),
en particular.
El Real Decreto 178/2004, de 30 de enero, por el que se aprueba el Reglamento General
para el Desarrollo y Ejecución de la Ley 9/2003, de 25 de abril, por la que se establece el régimen
jurídico de la utilización confinada, liberación voluntaria y comercialización de organismos
modificados genéticamente, en su artículo 12, clasifica las actividades de utilización confinada de
los GMO en cuatro tipos en virtud del riesgo para la salud humana y el medio ambiente:
 Tipo 1: Riesgo nulo o insignificante.
 Tipo 2: Riesgo bajo.
 Tipo 3: Riesgo moderado.
 Tipo 4: Riesgo alto.
Esta valoración del riesgo hay que hacerla siguiendo los criterios que establece el propio RD
(Anexo I) donde se describen los elementos que se deben tener en cuenta y el procedimiento que se
aplica para realizar la evaluación del riesgo.
También establece (Anexo II) las medidas de protección y confinamiento mínimas según el
tipo de actividades desarrolladas en el laboratorio.
En los laboratorios de citogenética y cultivos celulares se deberían aplicar como mínimo las
medidas de protección y contención de nivel 2, excepto que se trabaje con microorganismos con un
riesgo superior.

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1.4.2. Seguridad química

El RD 363/1995, de 10 de marzo, por el que se aprueba el reglamento sobre notificación de
sustancias nuevas y clasificación, envasado y etiquetado de sustancias peligrosas, establece hasta 15
tipos de sustancias peligrosas con base en sus características fisicoquímicas, características toxico-
lógicas y peligrosidad para la salud humana.
Muchos de los reactivos utilizados en los laboratorios de biología molecular y citogenética y
cultivos celulares se encuadran dentro de alguna de estas categorías.
En consecuencia, las buenas prácticas de laboratorio referidas a seguridad química deben
incluir medidas para:
 Prevenir la exposición del personal a estas sustancias, entendiendo por exposición el
contacto con ellas por penetración cutánea, inhalación o ingestión.
 Su almacenamiento seguro.
 Gestión eficiente de los residuos que generen.
Estas medidas se establecerán con base en el catálogo de productos utilizados en el
laboratorio y de acuerdo con la Ficha de Datos de Seguridad (FDS) específica de cada producto,
que aporta información de hasta 16 apartados relativos a la composición, manipulación, peligros,
vías de exposición, efectos tóxicos, almacenamiento, eliminación y primeros auxilios.
 La FDS debe ser suministrada obligatoriamente por el distribuidor del producto y
debe guardarse en el laboratorio para su posible consulta por todo el personal ante
cualquier eventualidad.
 Como medidas genéricas se pueden mencionar las siguientes:
 Utilización de los EPI adecuados a las posibles vías de exposición de cada producto.
 Prohibición de pipetear con la boca.
 Manipulación de productos volátiles en el interior de campanas de aspiración de
gases.
 Manipulación de productos inflamables alejados de fuentes de calor y llamas.
 Correcto etiquetado de todos los envases que contengan agentes químicos,
incluyendo las soluciones stock y de trabajo preparadas en el laboratorio a partir de
productos puros. El etiquetado debe incluir, como mínimo, el nombre del producto,
la fecha de preparación y el pictograma de peligro, en su caso.
 Almacenamiento de los productos químicos en armarios adaptados a sus
características de peligrosidad (inflamables, tóxicos, corrosivos, etc.) y respetando
siempre las incompatibilidades.
 Como ejemplos de sustancias peligrosas habituales en los laboratorios de biología
molecular y citogenética se pueden mencionar los siguientes:
o Inflamables: alcoholes (etanol, isopropanol, metanol).
o Tóxicos y muy tóxicos: acrilamida, azida sódica, bromuro de etidio,
diaminobencidina (DAB), formamida, tetrametil urea.
o Carcinógenos: acrilamida (grado 2), DAB (grado 2), formaldehído (grado 1).
o Mutágenos: acrilamida (grado 2), bromuro de etidio (grado 3).
o Teratógenos y/o perjudiciales para la fertilidad: acrilamida (grado 3),
formamida (grado 2), tetrametil urea (grado 1).

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1.4.3. Equipamiento y normas de seguridad

La distribución del laboratorio, las instalaciones, la señalización y el equipamiento deben ser
los adecuados para minimizar y prevenir los riesgos comunes a cualquier laboratorio. En concreto:
 Deben disponer de instalaciones de emergencia convenientemente señalizadas,
como duchas de emergencia, lavaojos, extintores, etc.
 Estar dotados con los equipos de protección individual (EPI) adecuados, según las
muestras que se manipulen y los procedimientos que se desarrollen, como guantes,
batas desechables, gafas de seguridad, mascarillas, pantallas, etc.
 Deben tener instalaciones adecuadas para el almacenamiento de sustancias tóxicas y
peligrosas, como armarios para inflamables y armarios específicos para sustancias
químicas tóxicas y corrosivas.
 Deben tener contenedores adecuados para la recogida selectiva y la clasificación de
residuos.
 Deben disponer de kits para recogida de derrames de productos químicos y
citotóxicos.
 Debe contar con un manual de seguridad y un plan de gestión de residuos.
Por otra parte, el personal debe cumplir también una serie de normas básicas de
comportamiento en los laboratorios:
 Lavado frecuente de manos.
 Utilización de los EPI adecuados.
 Uso de ropa de trabajo adecuada y abrochada, evitando, en lo posible, las mangas
anchas, los colgantes, los zapatos abiertos y, en general, la ropa que deje al
descubierto una parte importante del cuerpo.
 Prohibición de comer, beber, fumar y maquillarse.
 Uso de gafas de seguridad cuando se llevan lentes de contacto.
 Prohibición de pipetear con la boca.
 Recibir la formación adecuada para el manejo de los aparatos.
 Conocer el plan de gestión de residuos y el manual de seguridad del laboratorio y
cumplir las normas de actuación que recogen ambos documentos.

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1.4.4. El manual de seguridad

El manual de seguridad es un documento de obligado conocimiento de todo el personal
del laboratorio.
Debe contener la siguiente información:
 Evaluación de los riesgos inherentes a cada puesto de trabajo en el laboratorio.
 Descripción y normas de utilización del equipamiento de seguridad del laboratorio
(cabinas de bioseguridad, cabinas de aspiración de gases, EPI, etc.).
 Hábitos de trabajo apropiados para minimizar los riesgos de exposición.
 Normas de almacenamiento de productos químicos.
 Normas para la eliminación de desechos y gestión de residuos, incluyendo los
derrames.
 Normas de actuación en casos de emergencias, accidentes biológicos y accidentes
químicos.

1.4.5.Gestión de residuos
Los laboratorios de biología molecular y citogenética deben disponer de un plan de
gestión de residuos tóxicos y peligrosos, en virtud de su actividad.
El plan de gestión de residuos tóxicos y peligrosos debe incluir medidas para la recogida
selectiva, la clasificación y el almacenamiento temporal de residuos hasta su recogida por una
empresa gestora.
En concreto se deben especificar medidas para gestionar:

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 Residuos biosanitarios especiales. Entre este grupo o clase de residuos se

incluyen los objetos punzantes y cortantes que han estado en contacto con
productos biológicos, cultivos microbiológicos y material contaminado con los
mismos, cultivos celulares, grandes cantidades de sangre y otros líquidos biológicos,
etc.
 Residuos químicos. Se incluyen los envases que han contenido productos
químicos, reactivos caducados o innecesarios, los EPI contaminados, los filtros de
cabinas de aspiración de gases, los derrames, etc.
 Residuos citotóxicos. Incluye los restos de productos carcinógenos, mutágenos y
teratógenos, así como los envases que los hayan contenido.
 Residuos radiactivos.
Como norma general, los residuos se recogen en:
 Contenedores para los residuos sólidos.
 Garrafas en el caso de residuos líquidos.
Y deben cumplir con:
 Estar homologados y ser específicos para cada tipo de residuo.
 Ser diferenciados normalmente por código de color.
 Estar perfectamente etiquetados.
En cuanto a su manejo, no se deben llenar más de 2/3 de su capacidad y deben cerrar
herméticamente.
Finalmente, el plan de gestión de residuos debe especificar las normas de actuación en
caso de derrames.

Contenedores homologados para recogida de residuos

peligrosos, diferenciados por código de colores según el
tipo de residuo y perfectamente etiquetados. En este
caso, el contenedor amarillo es para residuos químicos y
el contenedor azul para residuos citotóxicos.

Derrames
Los derrames se cuentan entre los accidentes de laboratorio más comunes y entrañan cierta
peligrosidad. Su gestión implica tres acciones que deben ejecutarse de forma inmediata:
1. Neutralización. Va a depender de las características químicas del producto derramado.
2. Absorción. El material absorbente que se use dependerá de la naturaleza del derrame.
Algunos ejemplos son:
a. Serrín para líquidos no inflamables ni tóxicos ni corrosivos.
b. Carbón activo, para líquidos inflamables, tóxicos o corrosivos.
c. Absorbentes-neutralizadores comerciales, para cualquier derrame líquido
según indicaciones de la casa comercial.
d. Celulosa para absorber directamente derrames de pequeñas cantidades.

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3. Eliminación. El residuo se introduce en un envase adecuado y se elimina en el

contenedor específico.
a. Los derrames de productos en polvo se recogen directamente, evitando la
formación de aerosoles y de polvo en suspensión.
b. Los derrames de productos volátiles tóxicos por inhalación recogidos con
celulosa deben ser eliminados rápidamente en envases adecuados con cierre
hermético; o bien poner la celulosa en una cabina de aspiración de gases con
filtro de carbón activo hasta su evaporación y posterior tratamiento como
residuo químico.
Durante la realización de estas actividades:
 Debe restringirse el acceso al laboratorio.
 Las personas responsables de la recogida deben estar equipadas con los EPI
adecuados al producto derramado.
 Se debe tener especial cuidado con derrame s de líquidos inflamables y
volátiles.

ORGANIGRAMA
Hay diferentes legislaciones y estructuras en la organización de laboratorios citogenéticos en
Europapa. En España existen laboratorios de citogenética públicos y también privados. La mayoría de
los laboratorios públicos están incluidos en hospitales de referencia, otros dependen de unidades y
fundaciones públicas. En el sector privado, numerosos laboratorios realizan análisis citogenéticos de
forma específica o bien dentro de una cartera de servicios más generales.
A pesar de la variedad de centros, todos ellos poseen un organigrama del personal con niveles
crecientes de responsabilidad. La composición del organigrama dependerá del carácter público o
privado y si está incluido o no en un laboratorio general. En todos los casos, la máxima
responsabilidad corresponde al director o supervisor del laboratorio.
El personal del laboratorio incluye:
 El director o supervisor del laboratorio. Es el responsable del día a día y del control del la-
boratorio. Coordina las distintas secciones del laboratorio. Proporciona atención directa
a los médicos solicitantes de las pruebas (en los centros públicos) o de los clientes (en
los centros privados). Se encarga de supervisar las técnicas utilizadas y la posibilidad de
implementación y validación de nuevas técnicas.
 Por debajo del director o supervisor del laboratorio se encuentran los coordinadores de
cada sección (citogenética, biología molecular).
 El responsable de la sección de citogenética. Debe ser un científico/médico de alto nivel, con
la adecuada cualificación y experiencia en las operaciones de laboratorio y en citoge-
nética clínica. Su función es la de supervisar directamente todo el trabajo de diagnós-
tico. Controla las técnicas y el personal asociado. Soluciona los posibles problemas que
puedan surgir. Controla todas las etapas del proceso de análisis, desde la recepción de las
muestras hasta la emisión del informe e interpretación de los resultados. Dependiendo
de la carga de trabajo podrá disponer de 1 o más facultativos y personal técnico.
 El personal facultativo controlará la calidad de las muestras. Realizará el estudio,
análisis e interpretación de los resultados obtenidos y emitirá el correspondiente informe.
El personal facultativo debe disponer de la suficiente formación y experiencia.
 El personal técnico. Se encarga de la recepción, el procesamiento de las muestras
recibidas en el laboratorio. Está encargado también de gestionar el stock de los reactivos,
esterilización de la zona estéril. Los miembros del personal deben tener la formación y
experiencia adecuada para el tipo de técnicas que se están realizando.

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 El personal de prácticas. Todo el personal en prácticas debe seguir un programa de forma-

ción con un supervisor designado.
 Personal auxiliar. Incluye el personal de limpieza del laboratorio.
 El personal administrativo, además de las tareas administrativas, también puede
encargarse de: preparar informes citogenéticos, el almacenamiento y la recuperación de los
registros citogenéticos y responder a consultas generales al departamento.

PERSONAL
El personal que trabaje en los laboratorios de citogenética debe tener la formación y
experiena adecuada para la realización de las técnicas previstas en las diferentes áreas de trabajo.
Tanto el director o supervisor del laboratorio como los responsables de sección y facultativos deben poseer
una amplia formación en citogenética clínica, tanto en sus aspectos técnicos como diagnosticos.
Deben realizar una formación continuada con el fin de actualizar sus conocimientos e incorporar
nuevas técnicas que permitan un diagnóstico más preciso.
El personal técnico debe tener la formación de técnico superior en análisis clínico, y un
entrenamiento en las técnicas de citogenética. Es importante que tengan cualidades como el orden,
responsabilidad, capacidad de trabajo en equipo e iniciativa personal. Deben realizar una formación
continuada.
Todo el personal del laboratorio debe conocer los PNT (procedimientos normalizados de
trabajo) y las normas de esterilidad y bioseguridad.
El número de personas que conforman el laboratorio de citogenética depende de la carga de trabajo
diagnóstico del laboratorio, del grado de automatización y complejidad de los análisis realizados.
El número de personas debe ser suficiente para garantizar que no ocurran demoras innecesarias
en el procesamiento de las muestras y que se proporciona la cobertura apropiada durante ausencias por
bajas o vacaciones. Las cargas de trabajo que el laboratorio adopte deben garantizar la aplicación de
la norma ISO. Debe asignarse el tiempo suficiente para el desarrollo del traabajo y para la formación
profesional continua del personal.

PERSONAL TÉCNICO
En este apartado se describen las funciones y la formación del personal técnico de un labora-
torio de citogenética.

Funciones del personal técnico:

Las funciones de cada uno de los integrantes del laboratorio de citogenética deben estar
perfectamente establecidas y definidas, de esta forma el trabajo se realizará con eficacia y calidad.
El personal técnico tiene asignadas las tareas que abarcan desde la recepción de la muestra hasta

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el momento en el que está lista para su análisis. El estudio cromosómico, la interpretación y

elaboración del informe corresponde al personal facultativo.
Las funciones del personal técnico corresponden a las tareas que se van realizar en cada zona
trabajo y son las siguientes:
 Recepción, registro e identificación de las muestras, comprobando que cada muestra
corresponde a la petición adjunta.
 Conservación y preparación de las muestras para ser procesadas.
 Siembra, seguimiento y mantenimiento de los cultivos según el tipo de muestra.
 Procesado de los cultivos y obtención de las extensiones con las metafases.
 Bandeo y tinción de las extensiones.
 Preparación de los reactivos.
 Almacenamiento, conservación y control de las muestras procesadas.
 Calibración, limpieza y mantenimiento de los equipos.
 Control del stock de los reactivos necesarios.
 En los laboratorios en los que poseen equipos automáticos de captura de metafases,
el personal técnico se ocupará de la carga de extensiones y programación de estos
equipos.
 El personal técnico entrenado puede realizar en la parte de estudio que corresponde el
cariotipado de las muestras, siempre bajo la supervisión de un facultativo.

FORMACIÓN DEL PERSONAL TÉCNICO

El personal técnico de un laboratorio de citogenética debe poseer la titulación de técnico de
laboratorio clínico. La formación teórica la realiza en el centro formativo; la formación práctica la
recibe durante un periodo de prácticas tuteladas en centros de trabajo.
Para realizar la formación en técnicas citogenéticas será necesario un periodo de formación en
un laboratorio de citogenética de 3 a 6 meses. De igual forma, deben realizar una formación continuada
para mantenerse al día en las nuevas técnicas.

Procedimientos de laboratorio;
Todos los procedimientos normalizados de trabajo (PNT) y protocolos deben ser autorizados y
validados por el director del laboratorio y por los responsables de su sección. Estos PNT deben ser
conocidos y seguidos por todo el personal del área correspondiente. Deben ser actualizados anualmente.
Es recomendable que el laboratorio de citogenética participe en controles de calidad internos
y externos con el fin de garantizar que se siguen protocolos de trabajo adecuados y eficaces.
Las muestras que se analizarán pueden extraerse en el mismo centro o en otros centros. Se pondrá
a disposición de los centros remitentes las condiciones de extracción, conservación y envío de las muestras
para cada tipo de estudio. A su vez, el laboratorio debe tener politicas para remitir las muestras a otros
laboratorios en aquellos casos que requieren técnicas más especializadas de las que no se disponen a nivel
local, por ejemplo, análisis de rotura de cromosomas, microarray, secuenciación...

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