Procedimiento para Enterobacter y Pseudomona en aguas

Deivis Hernández

Microbiología de aguas

Detección de Pseudomona aeruginosa

Número más probable

• Prueba presuntiva: Se inoculan volúmenes de 10 ml de muestra en cada uno de 5 tubos que

contienen caldo Asparagina, doble concentración, volúmenes de 1 y 0.1 ml en cada uno de 5
tubos con caldo Asparagina concentración sencilla respectivamente.

Se incuban a 35 -37°C. Después de 24 horas, examine los tubos con lámpara ultravioleta de onda
larga, en un cuarto oscuro, a fin de observar la aparición de un pigmento fluorescente verde. En
caso de no observar fluorescencia se reincuban por 48 horas o más.

• Prueba confirmatoria: De cada tubo positivo de la prueba anterior, se trasfieren una asada o 0.1
ml del cultivo a un tubo de agar Acetamida sobre la superficie del agar (en bisel). Se incuban a 35
– 37°C durante 24 – 48 horas. Finalizado el período de incubación se consideran como tubos
positivos en la prueba confirmatoria, aquellos donde se observa la aparición de fluorescencia. Se
cuenta el número de tubos positivos obtenidos y el resultado se lleva a las tablas de número más
probable que corresponda.
 El resultado se expresa como número más probable de Pseudomonas aeruginosa por 100 ml de
muestra. En caso de que todos los tubos sean negativos, el resultado se expresa como “menos de
1.8 o menos de 1,1”, según hayan utilizado 5 a 10 tubos respectivamente. En caso de que todos
los tubos sean positivos, el resultado se expresa como “más de 1600 o más de 23000”, según se
hayan inoculado 5 o 10 tubos respectivamente. El resultado según el número de tubos positivos.

Medios de cultivo utilizado para el método NMP para Pseudomona aeruginosa.

• Caldo de Asparagina: este medio puede no estar disponible en forma deshidratada y puede
requerir la preparación de los ingredientes básicos. Ajustar el pH a 6.9 a 7.2 antes de la
esterilización.
• Caldo Acetamida: Este medio puede no estar disponible en forma deshidratada y puede requerir
la preparación de los ingredientes básicos.

Detección de Enterobacter

Las bacterias Gram negativas fermentadoras se desarrollan en agar sangre de carnero y agar
Mc Conkey, pero en agar sangre de carnero no podemos hacer mayor diferenciación entre las
colonias, sin embargo, en el agar Mc Conkey podemos diferenciar las colonias lactosa positivas y
lactosas negativas.

a) Identificar la colonia sospechosa que se encuentra en la placa de agar Mc Conkey.

b) Esterilizar al rojo vivo el asa de siembra recta en un mechero de Bunsen.
c) Enfriar el asa.
d) Obtener la colonia seleccionada con el asa recta, tratando de no tocar el fondo del medio de
cultivo ni otra colonia vecina.
e) Sembrar por estría en los medios diferenciales empezando por el agar citrato, urea (en la
superficie) , TSI, LIA (introduciendo el asa por el centro hasta tocar el fondo del tubo, retirar por
el mismo trazo y sembrar en estría la parte inclinada), caldo para la prueba de indol, MRVP.
f) Sembrar por puntura en el centro del agar movilidad hasta una profundidad aproximada de 1.5
cm.
g) Incubar a 35 – 37° C de 18 a 24 horas.

Lecturas

Agar TSI
En estos medios se determina la capacidad de la bacteria de utilizar la lactosa, glucosa y sacarosa
(en TSI), con producción o no de gas y la producción de ácido sulfhídrico.

Es importante hacer la lectura entre las 18 - 24 horas para no obtener resultados erróneos.
La lectura se hace sobre la base de tres características: Utilización de hidratos de carbono,
producción de gas y producción de ácido sulfhídrico.
Uso de pseudomonas en la contaminación

P. aeruginosa presenta un rol a destacar en la biorremediación debido a su gran capacidad

catabólica, requerimientos abióticos no muy exigentes y fácil adaptación a condiciones adversas.
Lo cual le permite participar activamente en la degradación de contaminantes tales como
hidrocarburos y metales pesados. varias de sus cepas han sido reportadas con capacidad
desintoxicante de ciertos contaminantes orgánicos e inorgánicos de suelos.