Buenas Tardes docentes, compañeros de tercer y cuarto ciclo.

A continuación mostraremos
nuestro proyecto integrador de saber

A nuestro grupo le corresponde hablar sobre los macro y micro organismo como indicadores de
la calidad del agua en la quebrada Carigan

Introducción (Diapositiva 3)

La contaminación de los recursos hídricos es un problema muy grande y está relacionado con el
crecimiento demográfico y a la producción de desechos, esto principalmente en el sector
urbano de la ciudad. Es por ello que es necesario llevar un monitoreo de los cuerpos de agua
para identificar los cambios de calidad del recurso, diversos parámetros fisicoquímicos son los
que nos ayudan a identificar la calidad de agua de la quebrada, y mediante pruebas
bioquímicas se logró determinar los diferentes tipos de bacterias presentes.

Objetivos (dispositiva 4)

Como objetivo general de este proyecto tenemos el:

Realizar la evaluación de la calidad de agua de la quebrada Carigan mediante el uso de la

Artemia salina y cultivos bacterianos.

Para los objetivos específicos se busca:

•Tomar muestras de agua en la quebrada Carigán usando el bioindicador Artemia

• Seguir el protocolo establecido para el ensayo de indicadores biológicos

• Realizar cultivos bacterianos e identificarlos morfológicamente mediante

pruebas bioquímicas.

• y finalmente aplicar los conocimientos previos adquiridos de las asignaturas cursadas.

A continuación, explicaremos la metodología utilizada en este proyecto

Georreferenciación (diapositiva 6 y 7)

En primer lugar, se realizó la visita a los diferentes puntos de la quebrada, seguidamente con la
ayuda de la app UTM Geo Map se registraron los datos de los diferentes puntos, cabe recalcar
que el sistema de coordenadas usado es el UTM. El primer punto se encuentra ubicado en el
tributario izquierdo de la quebrada, el segundo en el derecho

El tercero es la intersección de los dos primeros puntos y el cuarto se encuentra cerca de la

construcción del relleno sanitario de la parroquia Carigán.
Muestreo (diapositiva 8)

Para la toma de muestras se utilizaron: guantes de nitrilo, botella ámbar, fundas de basura y las
respectivas etiquetas de las botellas. Al momento de realizar el muestreo se pudo observar en
los tres primeros puntos un incremento en el caudal de la quebrada, esto debido a que el día
anterior se presentó la lluvia, en el punto 4 a causa de los avances en la construcción del
relleno se observó que en ese punto la quebrada aumentó en gran medida su caudal, así como
la presencia de vegetación nativa de la zona en los tres puntos.

Artemias (diapositiva 9)

Para realizar el cultivo de las artemias, se llevaron a cabo diferentes procesos, entre ellos
tenemos la hidratación, en este proceso se colocaron las artemias + agua salina en las cajas
petri y se las colocó en un lugar oscuro durante 12 horas, en este proceso se tapó las cajas Petri
hasta la mitad. Durante la eclosión se identifican las artemias vivas, y las artemias muertas se
desechan. Este proceso no se pudo terminar debido a que las bacterias no eclosionan debido a
las temperaturas bajas que presentaba la ciudad al realizar el proceso

PARÁMETROS FISICOQUÍMICOS (diapositivas 10 - 11)

Las pruebas fisicoquímicas se las realizó en el laboratorio de ingeniería ambiental en la cual se

determinó 8 parámetros

En el pH y Temperatura

Demanda química de oxígeno

Conductividad

Oxígeno disuelto

Turbidez

Nitrato

fósforo reactivo

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Cultivo microbiano (diapositiva 12 - 13)

Para los cultivos microbianos mixtos, puros y su posterior tinción se realizaron los siguientes
pasos:

Primero, se preparó el medio de cultivo el cual fue el agar agar nutritivo, a estos se los mezclo
con agua destilada, y se lo colocó en la autoclave durante 15 min a 120 °C. Pasado el tiempo se
lo distribuyó en las cajas Petri, que se colocaron en la incubadora durante 24 horas a 30 °C

El día viernes, se prepararon las disoluciones de la muestra del punto 4, de la muestra madre
tomamos 1 ml y la colocamos en un tubo de ensayo con 9 ml de agua autoclavada,
homogeneizamos con el Vortex, y obtenemos la dilución -1, de esta tomamos un ml y lo
colocamos en otro tubo de ensayo con 9 ml de agua autoclavada y homogeneizamos,y asi
hasta obtener la disolución -5 de la cual debemos quitar 1 ml.

Terminada la preparación de disoluciones procedimos a hacer la siembra de las 5 diluciones, el

control positivo y negativo (una repetición para cada siembra). EL método utilizado fue el de
estriado el cual consiste distribuir la muestra por la caja Petri haciendo movimientos de zinc
con un asa desinfectada, ya sembradas las cajas las sellamos y colocamos en la incubadora
durante 48 horas a 30° C

Pasadas las 48 horas obtuvimos los cultivos , y observando el crecimiento, se decidió realizar el
aislamiento de cultivos en las disoluciones -1 y -4 sembrando una muestra de ellas utilizando el
método de estriado, sellamos las cajas y las colocamos en la incubadora durante 24 horas a 30
°C

Ya obtenidos los cultivos puros, se realiza la tinción gram en un frotis de cada cultivo. la cual
consiste, en primero colocar encima del portaobjetos cristal violeta durante treinta segundos y
enjuagar con agua destilada, luego Lugol durante 1 minuto y lo enjuagamos, después alcohol
acetona durante 30 segundos y enjuagamos, y por último colocamos la safranina y la
enjuagamos también. Ya realizado el procedimiento se procede a observar la coloración y la
morfología colonial con ayuda de un microscopio

Bioquímica (Diapositiva 15)

En primer lugar mencionaré que el objeto de la realización de las pruebas bioquímicas es la

determinación de algunas características metabólicas propias de cada microorganismo.

Para la determinación de esas características empleamos tres pruebas bioquímicas. La prueba

agar TSI, prueba SIM y prueba de la catalasa.

La prueba tsi nos sirvió para determinar la fermentación de azúcares como la lactosa, sacarosa
y glucosa.

identificar si el microorganismo presente en el medio producía o no la ácido sulfhídrico y gas.

El método de siembra está en la diapositiva

Diapositiva 16

La prueba SIM la realizamos para lograr identificar si el microorganismo tiene movilidad, si

produce ácido sulfhídrico y si producen indol aplicando reactivo de kovacs

El método de siembra está en la diapositiva

Diapositiva 17

La prueba de la catalasa se empleó para la identificación de la enzima catalasa, para esto se usó
peróxido de hidrógeno sobre una muestra de bacterias.

Si la reacción era un burbujeo o una efervescencia dábamos como positivo la presencia de la

enzima catalasa en cambio si no sucedía nada pues asumimos que esta bacteria en particular
no presenta la enzima catalasa

RESULTADOS

PRUEBAS FISICOQUÍMICAS diapo 18

Conforme con los resultados obtenidos el grado de contaminación de los diferentes puntos de
la quebrada Carigan se encuentra dentro de los límites permisibles. Referente a los niveles de
pH se identificó que en los cuatro puntos que el agua es ligeramente básica. Además, en los
parámetros de temperatura, conductividad, oxígeno disuelto, identificación de nitrato y fósforo
presentes, se identificó que estos parámetros están dentro de los límites permisibles en los
cuatro puntos. Sin embargo, la turbidez en el punto cuatro se encuentra elevado a
comparación de los demás puntos, esto se debe a que este punto se encuentra cerca de un
relleno sanitario en este lugar entran en contacto con diferentes desechos sólidos, lo cual
provoca que el agua presente mayor turbidez. En el caso de la demanda química de oxígeno
(DQO), la cual nos ayuda a determinar la presencia de residuos sólidos,se determinó que en el
punto dos la demanda es relativamente baja, mientras que en los puntos uno, tres y cuatro se
denota una demanda más alta.De acuerdo a estos resultados la calidad del agua en los
diferentes puntos estudiados se encuentran en niveles aceptables basándonos en de TULSMA.

CULTIVO PURO Y TINCIÓN GRAM diapo 19

Los resultados obtenidos en las pruebas de morfología colonial y celular de los cultivos puros
de la disolución -1 Y -4, en ambas disoluciones obtuvimos Cocos gram negativas.

En la disolución -1 observamos que tenían bordes rizados, una superficie elevada brillante, y
un color rosado. Mientras que en la disolución -4 obtuvimos unas colonias separadas y un color
rosado más claro en comparación a la disolución menos -1

Resultados prueba tsi diapo 19

Placa con el cultivo con concentración 10 a la menos 1

● dieron positivo para fermentación de lactosa y sacarosa (fermentación de azucares)

● El medio no presenta rupturas o fraccionamiento para decir que estos

microorganismos sean productores de gas

● se produjo un color negro en el fondo del medio TSI por tanto los microrganismos
serian productores de ácido sulfhídrico.

Placa con el cultivo con concentración 10 a la menos 4

● En cuanto a la placa de cultivo con concentración 10^-4 existió un viraje del rojo fenol a
amarillo en todo el medio dando positivo a la fermentación de azucares.

● En el medio no sufrió ruptura, indicador que nos demuestra que las bacterias no serían
productoras de gas.

● Finalmente obtuvimos un negativo para la producción de H2S pues no hubo presencia

de color negro en el medio

Resultados Prueba sim

Placa con el cultivo con concentración 10 a la menos 1

el medio semisólido casi en su totalidad paso a un color negro lo que significó que los
microorganismos de esa muestra son productores de ácido sulfhídrico
 también esto demuestra que hubo movimiento por parte de los microorganismos dando como
resultado motilidad positiva

Dentro de esta prueba también se realizó la prueba de indol agregando 5 gotas de reactivo de
Kovacs al medio SIM.

● La superficie del medio se tornó de color rojizo concluyendo así que hubo degradación
del triptófano por la enzima bacteriana triptofanasa. Por tanto, tenemos indol positivo.

Placa con el cultivo con concentración 10 a la menos 4

● no presento el precipitado de color negro por tanto no existe la producción de h2s por
parte de las bacterias,

● Por otra parte, se determinó que el microorganismo no presenta motilidad debido a

que no existió crecimiento o esparcimiento de las bacterias fuera de la picadura de
siembra.

Tampoco hubo producción de indol dado que al agregar reactivo de Kovacs no se formó el
anillo rojo en la interfaz entre el cultivo

Resultados catalasa

Como resultado de la prueba catalasa obtuvimos que ambos cultivos las bacterias presentes
tienen la enzima catalasa porque al hacer reaccionar las muestras de bacteria con el peróxido
de hidrógeno se produjo un burbujeo.

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Como conclusiones tenemos:

● Con respecto a los análisis fisicoquímicos realizados en los 4 puntos de la quebrada

Carigan, concluimos que el agua de esta quebrada no presenta un grado de
contaminación elevado, esto no quiere decir que sean aptas para el consumo.
● El análisis microbiano, así como las pruebas bioquímicas permitieron la detección de
microorganismos en las muestras de agua de la quebrada Carigan, microorganismos
que pueden resultar patógenos en seres humanos y que sirven como bioindicador de
contaminación.