FACULTAD INGENIERÍA

AGRARIA

ESPECIALIDAD INGENIERÍA
BIORREMEDIACION
AMBIENTAL DE SUELOS

CONTAMINADOS POR HIDROCARBUROS CON

HONGOS PLEUROTUS OSTREATUS Y
TRICHODERMAS

CURSO: BIOTECNOLOGIA APLICADA PARA LA CONSERVACION DEL MEDIO

AMBIENTE

INTEGRANTES:

Guardamino Salvador, Mónica

Mallqui Pozo, Mariela
I.- Introducción
La contaminación con hidrocarburos en diferentes ecosistemas se ha
incrementado en los últimos años debido al aumento en la actividad
de exploración y producción de la Industria Petrolera. En la actualidad
los suelos contaminados con estos compuestos representan el 70 %
del total de los ecosistemas impactados (Swannell, 2000).
Los derrames de petróleo y sus derivados son considerados de gran
impacto al ambiente por los nefastos daños que ocasionan en los
ecosistemas impactados. Las investigaciones relacionadas con la
biorremediación de suelos con hidrocarburo derivados del petróleo
utilizando, hongos como Pleurotus ostreatus, constituye una
alternativa biológica y eficiente a través de la pudrición blanca para
el tratamiento de áreas contaminadas, ya que posee enzimas
ligninolíticas extracelulares como laccasa, lignino peroxidasa y
peroxidasa dependiente del manganeso, que permite la recuperación
de los suelos.
II.- OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

 Evaluar la efectividad de la biorremediación de hidrocarburo con los hongos

(Pleurotus ostreatus y Trichoderma).

OBJETIVOS ESPECIFICOS.

 Aislamiento de microorganismo del contaminado con hidrocarburo.

 Establecer metodología de biorremediación para el suelo contaminado con petróleo.

 Verificar mediante pruebas, análisis y ensayos el cumplimiento de la

biorremediación del suelo.

 Evaluar la cantidad de hidrocarburo en el suelo por el método de soxhlet

Biorremediación de suelos.
 
La biorremediación de suelos es una tecnología basada en la
utilización de los microorganismos y su potencial metabólico
degradador para eliminar o transformar los contaminantes del medio
en productos inocuos.
La capacidad metabólica de las poblaciones microbianas, frente a los
contaminantes presentes en un suelo, es el fundamento sobre el que
se sustenta la tecnología de la biorremediación (Alexander, 1999).
Generalmente en un suelo con contaminación recurrente o con
episodios previos de contaminación, las poblaciones microbianas
autóctonas se habrán seleccionado a favor de la metabolización del
contaminante, el cual puede ser transformado con mayor rapidez que
la materia orgánica húmica del suelo.
MATERIALES Y METODOS
 MEDIO DE CULTIVO
PARA PLEUROTUS OSTREATUS Y TRICHODERMA

 Se utilizó como medio de

cultivo, el trigo pelado,
cuya función es una
fuente de carbono
(comida que utiliza el
hongo para crecer y
componente
indispensable del medio
de cultivo), que contienen
buena cantidad de
carbohidratos.
 Elaboración de semillas en granos de
cereales
Materiales :
 Trigo resbalado 1 kilo.
 Carbonato de calcio (tiza) 3,5 g.
 Sulfato de calcio (yeso agrícola) 13 g.
 Bolsa de polipropileno.
 Alcohol.
 Bisturí.
 Micelio de hongos pleurotos ostreatus y
trichoderma.
 Balanza .
 Algodón
Procedimiento
a) escoger ,lavar y cocer el trigo resbalado
por 10 minutos.
b) el un recipiente colocar el trigo, añadir
el carbonato de calcio y el yeso.
c) embolsar y esterilizar por 45 minutos en
autoclave.
d) después de ser esterilizado y enfriado se
procede a la siembra de los hongos.
e) luego se lleva a incubación temperatura
ambiente 25°c y en inoculo estará lista
en 3 semanas aprox.
Método de Soxhlet
Materiales.
 Equipo de reflujo Soxhlet.
 Papel filtro.

 Papel Aluminio.

Reactivo.
 Eter de Petróleo.
 Procedimiento.
 Se coloco 10g de suelo en un cartucho
de papel filtro, luego se introdujo en el
columna extractora del equipo de
Soxhlet.
 Se peso el matraz de bola ,para
después agregar aproximadamente
250 mililitros.
 Ensamblar el equipo Soxhlet e
iniciar calentamiento.
 Mantener el reflujo en estas
condiciones.
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL SUELO

 El análisis microbiológico del suelo

sirve para identificar y cuantificar el
crecimiento de microorganismos del
suelo y actividades microbianas en dos
medios de cultivos (en Peptona Water
y Tripteina Soya Agar).
 Peptona Water: Es un medio de
enriquecimiento no selectivo, la
peptona proporciona nutrientes
necesarios para el desarrollo
microbiano y el cloruro de sodio
mantiene el balance osmótico.

 Tripteina Soya Agar: Medio

utilizado para propósitos generales,
favorece el desarrollo y aislamiento
de una gran variedad de
microorganismos aerobios, y
anaerobios facultativos y estrictos. 
Para realizar el análisis del
crecimiento microbiológico a
partir de dos medios de cultivo,
se realizaron los siguientes pasos:
1) El método de dilución, en donde:
_Se tomó 10g de suelo con petróleo y se
diluyo con 100mL de agua destilada, en
un matraz.
_En un matraz se diluyo 3g de Peptona
Water en 200mL de agua destilada, en
un matraz
_Se diluyo 5.6g de Tripteina Soya Agar
en 140 mL de agua destilada, en un
matraz.
2) Medio de cultivo con
Peptona Water en tubos de
ensayo.
 Se tomó 9mL de Peptona Water
diluida con agua destilada del
matraz, luego se agregó a los 3
tubos de ensayos y fueron
sellados con algodón.

3) Se llevó a la autoclave a los 2 matraces de medios de

cultivos del y los 3 tubos de ensayos, a una temperatura de
120 ° C y luego se dejó enfriar.
4) Preparación de los 3 tubos de ensayo con
Peptona Water agregando la dilución del suelo con
petróleo, realizando lo siguiente:

 Se sacó un 1mL de la muestra del matraz que

contiene el suelo con petróleo con agua destilada y
se le agrego al tubo de ensayo “A” que contiene
Peptona Water.
 Luego de este tubo de ensayo “A” se le saco 1mL y
se le agrego al tubo de ensayo “B” y del tubo de
ensayo “B” se sacó 1mL y se le agrego al tubo de
ensayo “C”.
5) Preparación de las placas con el medio
de cultivo Tripteina Soya Agar:
 Se agregó el medio de cultivo Tripteina Soya
Agar a la placa Petri bajo condiciones
ambientales apropiadas, teniendo las placas
“A1”, “A2”, “A3”,”B1”,”B2”,B3”,”C1”,”C2” y
“C3”.
6) Se realizó la siembra en las placas Petri que
contienen Tripteina Soya Agar a partir de las
disoluciones hechas a partir del anterior procedimiento
que contienen la Peptona Water con el suelo
contaminado con petróleo, tanto en la placa, donde:

 En la placa A1, A2 y A3 se le realizo la siembra del tubo

de ensayo A.
 En la placa B1, B2 y B3 se le realizo la siembra del
tubo de ensayo B.
 En la placa C1, C2 y C3 se le realizo la siembra del tubo
de ensayo C.
7) Las placas fueron guardadas bajo
condiciones ambientales apropiadas para
el desarrollo de colonias.
8) Se puede observar el crecimiento de
colonias en las diferentes.
Cronograma
Fecha Metodología
07-10-15  Preparación de semilla de trigo.

14-10-15  Aislamiento de microorganismos del

suelo contaminado con Hidrocarburo.
 Aplicación del método de Soxhlet.
21-10-15  Siembra de las cepas de hongo en el
suelo contaminado con petróleo.
 Aplicación del método de destilación.
28-10-15  Coloración Gran.
Conclusiones.
 La metodología de cuantificación de hidrocarburos por el método
de Soxhlet ,se desarrollo satisfactoriamente ,para este caso se
aplica el método de destilación para no perder el Éter de Petróleo
que se podrá utilizar en otras evaluaciones.
 En las bolsas de trigo se pudo identificar el crecimiento de
colonias de hongos; tanto del hongo Pleurotus ostreatus y
Trichoderma
 Se pudo lograr la identificación del crecimiento de colonias en las
placas Petri.
GRACIAS