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cnolgica de Len.
b e r, H a c e r.
PRESENTAN
GRIMALDO MNDEZ JESS ADIR
MARTN DEL CAMPO ORTIZ ISRAEL
PREZ RAMREZ MIRIAM ALEJANDRA
PEDROZA LVAREZ JESS OMAR
RAMREZ RAMREZ MIGUEL ANGEL
QU-301
ASESORA
Dra. ROSA RICO MATA
GENERACIN: 2014-2016
LEN, GUANAJUATO. 24 DE JUNIO DE 2015
EXISTENTES
2
2
2
Construccin
industrias manufactureras
10
1200
575
2475
49
58
80
58
138
Servicios educativos
121
126
84
25
751
972
Dicho muestreo se efectu a las 12:30 del da tomando una muestra simple
de agua, con ayuda de una
jeringa estril se deposit 1 mL
de muestra en el agar
previamente mencionado, la
caja Petri que contena el
medio
y
la
muestra
rpidamente fue colocada en
una hielera para mantener en
buen estado la muestra.
Observar Figura 6 Siembra in
situ agua.
Figura 6 Siembra in situ agua
PRUEBA PRESUNTIVA
Procedimiento
Para la confirmacin de presencia de coliformes en agua y suelo es necesario
primero sembrar muestras de agua y suelo en cajas Petri con agar rojo bilis violeta
de manera que el suelo se siembre con un isopo estril y el agua con una jeringa 1
mL, ambos en el sitio de muestreo que se preservaran a 4 C.
Marca y
contenido de
producto
Contenido
Mtodo de preparacin
-Peptona de gelatina
5.0 g
-Extracto de carne
3.0 g
-Lactosa
g
-pH final 6.9 0.2.
5.0
Procedimiento de anlisis
1. Preparacin del medio
1.1. Verificar la preparacin que viene establecida en el frasco del medio.
1.2. El volumen que se preparara de caldo se determina de acuerdo a las
proporciones de ensayo que se desean analizar.
TABLA 2. PROPORCIONES DE ENSAYO PARA LA DISTRIBUCIN DE MUESTRA EN
LOS TUBOS.
Proporciones
de ensayo
A1
A2
A3
A4
A5
1 volumen de
muestra
3 tubos con 10 mL
5 tubos con 10 mL
1 matraz con 10 mL
5 matraz con 100 mL
1 matraz con 10 mL
2 volumen de
muestra
3 tubos con 1 mL
5 tubos con 1 mL
5 tubos con 1 mL
1 tubo con 10 mL
5 tubos con 1 mL
3 volumen de
muestra
3 tubos con 0.1 mL
5 tubos con 0.1 mL
1 tubo con 1 mL
5 tubos con 0.1 mL
2.2
Tomar con pipetas diferentes las cantidades de muestra de agua y suelo
requeridas para cada tubo de caldo lactosado y completar un volumen de 20 mL.
2.3
Tapar los tubos con sus respectivas capuchas y poner en la incubadora a
una temperatura de entre 35-37 C durante 18-48 horas.
PRUEBAS CONFIRMATIVAS
PRUEBA CONFIRMATIVA PARA DETERMINAR COLIFORMES
TOTALES
Fundamento:
Durante la fase confirmativa se emplea como medio de cultivo caldo bilis
verde brillante el cual es un medio selectivo que solo permite el desarrollo de
aquellos microorganismos capaces de tolerar tanto las sales biliares como el verde
brillante.
La determinacin de microorganismos coliformes totales por el mtodo del
Nmero ms Probable (NMP), se fundamenta en la capacidad de este grupo
microbiano de fermentar la lactosa con produccin de cido y gas al incubarlos a
37C durante 48 hr.
Caldo
verde
bilis
brillante
Marca y
contenido de
producto
BD BIOXON
CONT.
450 g
Contenido
Mtodo de preparacin
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Interpretacin de resultados:
Si se observa turbidez y produccin de CO2 e H2: La prueba se considera
POSITIVA, debiendo anotar el nmero de tubos positivos para posteriormente hacer
el clculo del NMP.
Si en ninguno de los tubos se observa produccin de gas, aun cuando se observe
turbidez: estos se consideran NEGATIVOS.
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PRUEBA DE LA OXIDASA
Fundamento
Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La
reaccin de la oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromo oxidasa que
activa la oxidacin del citocromo que es reducido por el oxgeno molecular que
produce agua o perxido de hidrgeno segn la especie bacteriana. El oxgeno
acta por tanto como aceptor final de electrones en la cadena transportadora de
electrones.
La prueba de la oxidasa se usa sobre todo para identificar todas las especies de
Neisseria (+). Diferenciar Pseudomonas de los miembros oxidasa negativos de las
enterobacterias. Tambin se usa en algunos casos para diferenciar gnero y
especie de otras bacterias
METODOLOGA PARA LA PREPARACIN DE REACTIVOS
Disolver 0.1 gr de Clorihidrato de tetrametil-p-fenilendiamina en 1000 mL de agua
destilada
Desarrollo de la prueba
1. Llevar a cabo la prueba con subcultivos puros de los organismos
fermentadores de lactosa, crecidos en medio nutriente de agar, como sigue:
2. Levantar con el ansa una colonia del cultivo puro.
3. Colocar de 2 a 3 gotas de reactivo de oxidasa recientemente preparado en
un papel filtro en una caja de Petri.
4. Con una barra de vidrio o un asa de alambre de platino (no de nicromel),
colocar parte del cultivo en el papel filtro preparado.
5. Esperar 5-10 segundos y observar la coloracin.
Interpretacin de resultados:
La prueba se considera POSITIVA si la coloracin se produce a los 5-10
segundos.
De lo contrario la prueba se considera como NEGATIVA.
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