Aquí está el esquema para empezar

echos clave acerca de su tema

a ingeniería genética es la manipulación directa de los genes de un organismo usando la biotecnología para modificar los genes,
liminarlos o duplicarlos.

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BIOTECNOLOGIA
GRUPO: BREÑA-KRIGER-GONZALEZ
OBJETIVO
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TERMINOLOGIA
Técnicas
 La organización realizada es la siguiente:
I. Generación de bases de datos de genes de Vitamina C en de M. dubia, árbol filogenético y
Metodologia

alineamiento de secuencias.
II. Diseño de cebadores degenerados y verificación de su capacidad de amplificación de prolactina.
III. Clonaje de ADNc de gen L-GalLDH de M. dubia
IV. Diseño de cebadores para cuantificación de ARNm de e L-galactono-1,4-lactona deshidrogenasa
obtenidos del banco de genes mediante PCR cuantitativa (qPCR).
V. Cuantificación de ARNm de e L-galactono-1,4-lactona deshidrogenasa.
I. Generación de bases
de datos de genes de
Vitamina C en de M.
dubia,
s estudios filogeneticos intentan reconstruir la genealogía
ecta entre los organismos y en algunos casos, estimar el
po de divergencia entre los mismos desde el último
cesor común. Para este caso se utiliza bases de datos de
enia molecular de la especie que estamos estudiando con
especies de plantas.
sta información se obtiene del sitio web de Tree of Life Web
ect (http://tolweb.org/tree/phylogeny.html) que muestra
elaciones filogenéticas de las especies en base a estudios
culares
filograma muestra que M. dubia del orden Myrtales, tiene
similitud genética con el orden Geraniales, pero menos
itud genética con otros órdenes integrantes de Malvidae
II. Diseño de cebadores
degenerados
ra diseñar los cebadores degenerados ingresamos al sitio web del
ama SCPrimer
partir de la información obtenida de alineamiento se procede a diseñar
parejas de cebadores en las zonas de mayor homología entre las
ncias. Para ello, una vez identificadas las zonas con menor variabilidad
específica, se diseñan los posibles cebadores en sentido directo (forward)
entido inverso (reverse).
los más de 50 pares de cebadores degenerados obtenidos con el
ama SC Primer, sólo fueron seleccionados cinco pares para amplificar
entos > 350 pb del gen de interés (Tabla 2). Los cinco pares de cebadores
n sintetizados y empleados para amplificar regiones del gen (ADNc) bajo
ntes condiciones de PCR (temperatura de hibridación, [MgCl2],
dores], etc). De los cuales, el segundo par nos permitió amplificar un
ucto del tamaño esperado (921 pb).
 PROCESO
• se realiza la Purificación de ARN total y síntesis de ADN complementario
• El ARN total se purificó a partir de la pulpa y cáscara de frutos verdes y maduros: Amp
del gen Para la reacción en cadena de la polimerasa
• Clonación y secuenciamiento del gen La clonación del gen se realizó de acuerdo
Clonación TOPO®TA (Invitrogen) y las colonias de Escherichia coli con inserto
seleccionadas por PCR y cultivaron en caldo LB por 24 horas. Luego, los p
recombinantes fueron purificados según Sambrook. Los productos del secuenciamient
purificados por precipitación con etanol/EDTA, desnaturalizados y resueltos en un an
genético 3130XL. Las secuencias obtenidas fueron analizadas con el programa Seq
Analysis v5,2,0 (Applied Biosystems). La identidad de la secuencia se verificó con anális
• Que se obtuvo de los 50 genes, un par fue aislado. Del cultivo bacteriano, se pu
plásmido recombinante y secuenció en ambas direcciones el segmento del gen clonado
• la secuencia del segmento del gen de 921 pb, obtenida de los frutos de M. dubia, se b
un análisis BLAST las secuencias homólogas en los bancos de genes. Los resultados
análisis nos muestran que el segmento del gen codifica la enzima Lgalactono-1,4
deshidrogenasa.
• Esto se deduce porque presenta una gran homología con secuencias de este gen re
para varias especies de plantas Populus trichocarpa, Cirus unshiu, Vitis vinifera
communis, Prunus persica, Rosa roxburghii, Malus x domestica con las que
identidades máximas de 78 a 81% y Evalues = 0,0
Discusion
 Foto

CONCLUSIONES
Con estas estrategias podemos disponer de secuencias parciales y completas
odos los genes que se expresan en las células, tejidos ú órganos de cualquier
ecie. Aunque NO DISPONEN de estas tecnologías de secuenciamiento masivo,
osible ejecutar investigaciones de este nivel, porque varias instituciones
anjeras brindan servicios de secuenciamiento con estas tecnologías, a muy
o costo.[
Además, para contar con un catálogo de todos los genes y establecer todas
vías metabólicas de la especie, necesitamos secuenciar los transcriptomas en
rentes etapas de crecimiento.

CONCLUSIONESCon las estrategias bioinformáticas y moleculares descritas se

ó el segmento de un gen que codifica la enzima L-galactono1,4-lactona
hidrogenasa de la vía biosintética de vitamina C en M. dubia, especie de la que
e disponía de secuencias génicas. Con estas mismas aproximaciones será
ble aislar genes de interés biotecnológico de esta y otras especies amazónicas
as que aún no disponemos de bases de datos de secuencias nucleotídicas de
e acceso
MUCHAS GRACIAS