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INFORME PRCTICO DE BACTERIOLOGIA MEDIOS DE CULTIVO DIFERENCIALES PARA BGN PORFESORES: JOSE ALBERTO DIAZ TELLO MG.

BIOLOGO MICROBIOLOGO

FACULTAD: TECNOLOGIA MDICA ALUMNOS: Trujillo Lopez C!pillo lo#i$ !le"

V!le%zuel! !l"uj!r &o%!'(!% C!r)e%!$ !l!r o% p!'ri i! *ui$pe 'i% o %or+!

MEDIOS DE CULTIVO DIFERENCIALES PARA BGN MARCO TEORICO


En microbiologa, se denominan bacterias Gram negativas a aquellas bacterias que NO se tien de azul oscuro o violeta por la tincin de Gram, y lo hacen de un color rosado tenue: de ah el nombre de Gram!negativas o tambi"n gramnegativas # Esta caracterstica est$ ntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular, por lo que re%le&a un tipo natural de organizacin bacteriana# 'on uno de los principales grupos de bacterias y cuando se tratan como ta(n se utiliza tambi"n el nombre de Negibacteria# )as restantes son las bacterias Gram positivas#)as bacterias Gram!negativas presentan dos membranas lipdicas entre las que se localiza una %ina pared celular de peptidoglicano, mientras que las bacterias Gram!positivas presentan slo una membrana lipdica y la pared de peptiglicano es mucho m$s gruesa# *l ser la pared %ina, no retiene el colorante durante la tincin de Gram# +uchas especies de bacterias Gram!negativas causan en%ermedades# )os cocos Gram! negativos causan la gonorrea ,Neisseria gonorrhoeae-, meningitis ,Neisseria meningitidis- y sntomas respiratorios ,Moraxella catarrhalis-, entre otros# )os bacilos Gram! negativos incluyen un gran n.mero de especies# *lgunos de ellos causan principalmente en%ermedades respiratorias ,Haemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae , Legionella pneumophila, Pseudomonas aeruginosa-, en%ermedades urinarias ,Escherichia coli, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia marcescensy en%ermedades gastrointestinales ,Helicobacter pylori, Salmonella enteritidis, Salmonella typhi-# Otros est$n asociadas a in%ecciones nosocomiales ,Acinetobacter baumanii-#

MEDIOS DIFERENCIALES
'on empleados para detectar reacciones bioqumicas, con car$cter di%erencial de grupos, g"neros o especies microbianas, mediante el vira&e de color del indicador presente en el medio, demostrando algunas de sus caractersticas# Estos medios son el /'0, )0*, 1itrato de 'immons, '0+, 1aldo .rea#

DIFERENTES MTODOS DE SIEMBRA


, SEMBRAR:

Es el acto de colocar el material bacteriolgico en el medio de cultivo para promover su crecimiento y desarrollo, y subsiguiente multiplicacin# El resultado de una siembra se llama : Cul'i-o 2 )as siembras pueden ser:

, Pri+!ri!$: cuando el material es inoculado en los medios por primera vez , Se u%)!ri!$: cuando el material a inocular procede de una siembra primaria MTODOS GENERALES: ./ SIEMBRA POR DILUCI0N: 'e toma el tubo de ensayo con medio lquido, como el caldo simple# 'e toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada con el material bacteriolgico, se agita, con movimientos moderados# Me)io )e ul'i-o: )iquido I%$'ru+e%'o: *sa Fi%!li)!): poner la bacteria en suspensin 1/ SIEMBRA POR ESTR2AS SIMPLE: 'e siembra el material en la super%icie de el agar inclinado en un tubo de ensayo, all se e(tiende por toda la super%icie con el asa bacteriolgica, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar, haciendo estras no muy amplias, pero tampoco muy estrechas# 'e inicia por la parte m$s pro%unda de la super%icie inclinada y se termina la estra en la parte m$s cerca de la boca del tubo# +edio de cultivo: agar base inclinado 0nstrumento: asa o agu&a bacteriolgica

3/ SIEMBRA POR ESTR2A POR AGOTAMIENTO:


1on "ste procedimiento se puede conseguir una buena separacin de las colonias y aislarlas %$cilmente# 3ara ello se %unde el medio de cultivo, se vuelca en ca&a de 3etri y se de&a solidi%icar# 1on el asa previamente esterilizada se toma material de un cultivo heterog"neo y se descarga sobre la super%icie del medio %ormando estras# Esto puede realizarse de varias %ormas: !, *l comienzo se coloca el inoculo, luego se contin.a con las estras# 1uando se quiere obtener colonias muy separadas se puede utilizar dos o tres placas de 3etri, para lo cual se repite la operacin sin tomar con el asa nuevo material# ", 'e puede dividir la placa de 3etri en cuatro cuadrantes4 una vez depositado el material en el primero, siguiendo el sentido de las agu&as del relo&, se hace una estra luego en el segundo, tercero y cuarto cuadrante sin cargar nuevamente el asa4 en el .ltimo cuadrante aparecer$n las colonias aisladas , El inculo se e(tiende sobre una pequea zona de la placa, pr(ima al borde, se esteriliza el asa y se traza otra estra a partir del depsito y as sucesivamente# +edio de cultivo: solido en placa de 3etri 0nstrumento# *sa 5inalidad# Obtener colonias aisladas

4/ SIEMBRA POR PICADURA O PUNCI0N:


1on una agu&a se toma el material que se quiere sembrar y se lo introduce en el tubo, con medio semislido# 0ntroducir la agu&a hasta el %ondo, %ormando un canal de puncin, trayecto por el cual la retiraremos luego# Este m"todo se utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias# +edio de cultivo# 'emislido 0nstrumento: agu&a bacteriolgica 5inalidad: Estudiar la movilidad de las bacterias

5/ SIEMBRA EN TSI: 6POR PICADURA 7 ESTR2AS EN SUPERFICIE:


el /'0 ,/riple 'ugar 0ron- es un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro y un indicador que es el ro&o %enol#

En este medio sembraremos por picadura y estras en super%icie, como ya conocemos, para estudiar los cambios que ocurrir$n en super%icie y pro%undidad# * lo largo del canal se desarrollan los microorganismos, y seg.n lo hagan en la parte superior o in%erior del tubo, estar$n indicando su comportamiento %rente a los azucares, los cambios indican lo siguiente:

LECTURAS DE LOS MEDIOS DIFERENCIALES MATERIALES:


*gar +c con6ey *sa de siembra +echero 'epa de E# coli *gar tsi, lia, citrato, sim y urea

PROCEDIMIENTO:
/eniendo la sepa de e# coli vamos a sembra por estra E# coli )uego sembramos en cada uno de los agar las pruebas bioqumicas o di%erenciales

SIEMBRAS
TSI: 'embrado por puntura y estra SIM: 'embrado por puntura UREA: 'embrado por estra simple CITRATO: Estra simple

LIA: 'embrado por puntura y estra

INTERPRETACIONES8 FUNDAMENTO 7 RESULATDOS TSI 6 TRIPLE SUGAR IRON/ CARACTERISTICA


COLOR: ro&o ladrilo IN9IBIDORES: no tiene INDICADOR: ro&o %enol SUSTRATO PRINCIPALES: lactosa, sacarosa y glucosa , la proporcion en el medio de lactosa y sacarosa es de 78:7 con la glucosa

FUNDAMENTO:
En este medio se busca determinar la capacidad de la bacteria para degradar y los azucares y la %ormacin de gas y 9:'# la %ermentacin aerobia se produce en pico del tubo y la anaerobia en el %ondo del tubo# )a degradacin de la lactosa ocurre en la parte superior, la de la sacarosa en la parte intermedia y de la glucosa en la parte pro%unda produci"ndose un vira&e de ro&o a amarillo El tiosul%ato es reducido a 9:' quien reacciona con el citrato %"rrico amoniacal para dar %ormacin a sul%uro de %ierrro que es de color negro

FORMACION DE GAS

FORMACION DE 91S

MEDIO DE LIA 6Li$i%! Iro% A:!r/


CARACTERISTICA COLOR: LILA IN9IBIDORES: no tiene INDICADOR: purpura de bromo cresol SUSTRATO PRINCIPALES: lisina y glucosa SUSTRATO SECUANDARIO: peptona, tiosul%atode sodio, e(tracto de levadura#; FUNDAMENTO: En este medio se permite evidenciar la descarbo(ilacin del amino$cido lisina en la diamina cadaverina, como tambi"n

la desaminacin de la lisina en un al%a ceto$cido# Estas dos reacciones se ponen de mani%iesto por el vira&e del indicador p.rpura de bromocresol ' )a %ormacin de 9:' se pone de mani%iesto por la presencia del tiosul%ato sdico, que dar$ %ormacin al sul%ato %"rrico

CITRATO
CARACTERISTICA COLOR: Ver)e IN9IBIDORES: no tiene INDICADOR: azul de bromo cresol SUSTRATO PRINCIPALES: citrato de sodio SUSTRATO SECUANDARIO: %os%ato dipotasio, cloruro de sodio, sul%ato de magnesio y %os%ato monoamonio FUNDAMENTO Nos permite comprobas la capacidad de la bacteria de utilizar el citrato como .nica %uente carbono )a degradacin del citrato conlleva a la alcalinizacin del medio y el vira&e del indicador azul de bromo timol de verde a azul 3rusia 1on este medio podemos di%erenciar entre las coli%ormes %ecales y itrobacter como algunas especies de Salmonella

MEDIO I%)ol,

SIM 6Sul;uro,

Mo'ili)!)/ CARACTERISTICA COLOR: crema, transparente IN9IBIDORES: no tiene INDICADOR: no tiene SUSTRATO PRINCIPALES: peptona SUSTRATO SECUANDARIO: tisul%ato de sodio, hierro y amonio Este medio se utiliza para comprobar la movilidad, la produccin de h:s y la produccin de indol por parte de la bacteria FUNDAMENTO El tript%ano es un amino$cido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la triptena, que puede ser o(idado por algunas bacterias para %ormar indol# En el proceso interviene un con&unto de enzimas llamadas tripto%anasa# El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de <ovac=s o de Erlich, para originar un compuesto de color ro&o# )as cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sul%hdrico se distinguen por la %ormacin de un precipitado negro de sul%uro de hierro a partir del tiosul%ato siempre que el medio se mantenga a un p9 mayor a >#:#

MOVILIDAD

9IDROGENO SULFURADO: *qu se estudia el metabolismo de la cisteina que posee dos mol"culas de asu%re,'- que ser$n liberados como 9:' por accin de la cisteinasa y con la presencia de sales %errosas %ormaran ':5e que le dar$ un precipitado de color negro

INDOL:

para la demostracion de indol de usa el reactivo de <obacs, que mani%iesta la degradacion del tripto%ano por la enzima tripto%anasa en indol, que se combina con el aldehido,paradimetilbenzaldehido- presente en el reactivo de <obacs, para producir un color ro&o

UREA 1*?*1/E?0'/01* 1O)O?: *+*?0))O 0N@01*@O?: no tiene 'A'/?*/O 3?0N103*)E': Area 'A'/?*/O 'E1A*N@*?0O: e(tracto de levadura, %os%ato monopotasio y %os%ato dipotasio

FUNDAMENTO: 'e observa la capacidad de la bacteria de degradar la urea por medio de la enzima ureasa %ormando amoniaco y carbonato de aminio, que alcaliniza el medio por lo cual el ro&o de %enol vira a un ro&o cereza

BIBLIOGRAFIA
)ibro medio de cultivo , +*NAE) +EN@O ?AB0O )ibro microbiologa , AN0CE'0@*@ 1*DE/*NO 9E?E@0*-

http:EEandres! laboratorioclinico#blogspot#comE:878E8FEmedios! di%erenciales#html http:EEGGG#slideshare#netEroberchavezEmedios!de!cultivo!y! pruebas!bioquimica!presentation http:EEes#scribd#comEdocEH:8I8JJE+edios!de!1ultivo!y! 3ruebas!Bioquimicas

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