Biología Celular y Molecular

Organización y Flujo de la Información

Genética

Departamento de Genética, Facultad de Medicina,

Universidad de la República
Agosto 2022

CONTENIDOS
Organización del material hereditario
Nucleótidos y ácidos nucleicos. Estructura y propiedades físico-químicas de los ácidos nuclei-
cos. Estructura de la doble hélice. Apareamiento de bases. ADN y ARN. Concepto de gen,
alelos, herencia. Organización del genoma, tipos de secuencias, organización y distribución,
genomas procariotas y eucariotas. Organización espacial, compactación de ácidos nucleicos,
niveles y correlación funcional, segregación cromosómica.
Mantenimiento de la información hereditaria
Bioquímica y mecanismo de la replicación. Principios de reparación de ADN y estabilidad
genética. Mutaciones y mutagénesis, significado biológico, variabilidad y patología . La ge-
neración de diversidad. La meiosis. La recombinación a nivel molecular.
Expresión de la información hereditaria
El flujo de información: El dogma central y sus variantes. Concepto del gen en procariotas y
eucariotas. El mecanismo de la transcripción. Tipos de ARN, transcripción en procariotas y
eucariotas. La maduración de los transcriptos. El papel de distintos ARN. El código genético
y la traducción. El mecanismo de la traducción y el papel de los distintos ARN.
Regulación de la expresión génica
Organización de los regulones procariotas y eucariotas. Procesos acoplados: transcripcion-
traduccion, transcripción-maduración. Regulación del inicio de la transcripción, operones
bacterianos. Regulación transcripcional en eucariotas, promotores y potenciadores. Relación
cromatina-transcripcion, epigenética. Regulación postranscripcional, procesamiento diferen-
cial, silenciamiento.
Coordinación por Genética: Silvana Pereyra y Bernardo Bertoni.
Material didáctico: Silvana Pereyra y Bernardo Bertoni.
Consultas: www.eva.fmed.edu.uy
Consultas administrativas: Secretaría de Apoyo a la Enseñanza

Prohibida la comercialización de este material sin la autorización del Dpto. Genética de la Fac. Medicina
(UDELAR).
Taller 1

Ácidos nucleicos y Genoma

1. La secuencia complementaria a la secuencia de ADN 5’-GCAGCAGCAT-3’ es:

a) 5’-GCAGCAGCAT-3’
b) 5’-CGTCGTCGTA-3’
c) 5’-ATGCTGCTGC-3’
d) 5’-TACGACGACG-3’

La secuencia del ARNm 5’-AUGCUGCUGC-3’ se generó a partir de la transcripción

de una hebra de ADN molde con la secuencia:

a) 5’-GCAGCAGCAT-3’
b) 5’-CGTCGTCGTA-3’
c) 5’-ATGCTGCTGC-3’
d) 5’-TACGACGACG-3’

2. El material hereditario de 3 tipos de virus distintos tiene los siguientes porcentajes de

bases nitrogenadas:

Virus A (% ) G ( %) C ( %) T ( %) U ( %)
1 31 19 19 —– 31
2 30 25 19 —– 26
3 18 32 32 18 —–

a) ¿Qué tipo de ácido nucleico constituye el material hereditario de cada uno de

estos virus?
b) Proponga una hipótesis que explique por qué el virus 2 no presenta iguales por-
centajes de bases complementarias. Describa un experimento que realizaría para
comprobarla.

2
TALLER 1. ÁCIDOS NUCLEICOS Y GENOMA BCM 2022

3. El ADN nuclear de dos organismos distintos tienen idéntico porcentaje de G+C.

a) ¿Significa que tienen la misma secuencia de bases nitrogenadas?
b) ¿Indica que tienen la misma cantidad de ADN?
c) ¿Sugiere que poseen la misma velocidad de re-naturalización?
d) ¿Tendrían estos dos ADN la misma temperatura de fusión (Tm)?
4. Con respecto al genoma humano, ¿cuáles de estas opciones pueden ser correctas?
a) El genoma equivale a todas las secuencias codificantes para proteínas.
b) Existe una relación directamente proporcional entre el valor C y la complejidad
del organismo.
c) Los genes codificantes para proteínas suponen el porcentaje más pequeño del
genoma humano.
d) Los minisatélites y microsatélites tienen utilidad en la genética forense.
e) Siempre se cumple que a mayor tamaño de cromosoma mayor cantidad de genes.
f ) El genoma mitocondrial está compuesto mayormente por genes con función en la
mitocondria.
5. Los productos del gen BRCA1 son esenciales en la reparación y recombinación del
ADN, pero su papel más conocido es por ser un gen supresor de tumores que se iden-
tifica en cáncer de mama. Se propone analizar la estructura genómica de la región
cromosómica donde se encuentra este gen. Para esto se utilizara una herramienta web
de libre acceso (https://genome.ucsc.edu/index.html). La siguiente imagen
es el resultado de pedir la representación de diferentes clases de repetidos, variantes en
el número de copias (CNVs) y de polimorfismos de un único nucleótido (SNP).

Figura 1.1: Distribución de repetidos y variantes de único nucleótido, o de copias en el gen

BRCA1.

3
TALLER 1. ÁCIDOS NUCLEICOS Y GENOMA BCM 2022

a) ¿Cómo es la estructura del gen BRCA1 ?

b) ¿Qué tipo de elementos repetidos son los que más se observan?
c) ¿Cómo se distribuyen en la región?
d) En la siguiente figura se muestran los mismos tipos de elementos en una región
diferente: una zona pericentromérica. ¿Cuáles son las diferencias al comparar esta
región con lo anteriormente observado en BRCA1 ?

Figura 1.2: Distribución de repetidos y variantes en región pericentromérica.

4
Taller 2

Replicación del ADN

1. Analice el siguiente esquema de una burbuja de replicación e indique las opciones

correctas:

Figura 2.1: Burbuja de replicación del ADN.

a) El origen de replicación está representado por la letra a.

b) La cadena retrasada está representada por la letra b.
c) La hebra molde superior genera la hebra líder y la inferior la hebra retrasada.
d) El extremo 5’ está representado por la letra d.
e) La ADN polimerasa es necesaria y suficiente para que la burbuja de replicación
avance.

2. La alta mutabilidad del virus HIV es uno de los principales problemas para su tra-
tamiento. El HIV es un retrovirus, y su ciclo depende de una transcriptasa reversa
responsable de la generación de copias de ADN del genoma viral que se integrará al
genoma del huésped. La alta mutabilidad del virus se relaciona con una fidelidad de
un orden de magnitud menor de la enzima viral con respecto a otras polimerasas del
huésped. ¿A qué se puede deber esta diferencia?
La primera droga utilizada con éxito en el control del Sida fue el AZT. El AZT es un
análogo de la deoxitimidina cuyo nombre formal es 3’-azido-2’3’-dideoxitimidina (ver
figura). Este nucleósido es fosforilado in vitro para formar deoxinucleósido-5’trifosfato
(AZT-TP).

5
TALLER 2. REPLICACIÓN DEL ADN BCM 2022

Figura 2.2: 3’-azido-2’3’-dideoxitimidina (AZT)

a) Sugiera un mecanismo de acción del AZT-TP.

b) ¿Será efectiva la administración del AZT sin trifosforilación para tratar la enfer-
medad? Justifique.
c) Se ha verificado que la transcriptasa reversa tiene mayor afinidad por el AZT que
por el TTP, a la inversa de lo que ocurre con las ADN polimerasas eucariotas.
¿Esto influye en algún sentido en el éxito del tratamiento?
d) ¿Qué otras aplicaciones puede tener un fármaco homólogo de una base nitroge-
nada?
3. En base a la imagen explique cómo avanza el replisoma durante la replicación.

Figura 2.3: El replisoma

4. Supóngase una bacteria que ha sido cultivada varias generaciones en un medio donde la
única fuente de nitrógeno es N15. Tomamos una muestra y la transferimos a un medio

6
TALLER 2. REPLICACIÓN DEL ADN BCM 2022

que contenga sólo N14 y después analizamos su ADN por centrifugación en gradiente de
densidad. ¿Cuál es la densidad esperada de este ADN? Si permitimos que se produzca
una segunda generación de replicación en N14, ¿qué resultado esperaríamos haciendo
la misma experiencia? Estimar este problema en dos escenarios: primero suponiendo
que la replicación es semiconservativa y luego suponiendo que es conservativa.

7
Taller 3

Técnicas de Biología Molecular

1. Las endonucleasas de restricción son enzimas que cortan el ADN en las zonas en que se
encuentran determinadas secuencias cortas llamadas “dianas” o “sitios”. En la siguiente
secuencia se señalan los sitios de corte de 3 enzimas de restricción:

HhaI

HaeIII

BclI

Si realizan digestiones de este fragmento de ADN con las tres enzimas por separado y
se corre un gel de agarosa:
1 CTTCCTCAGC CTGGGGCTGG TGAGCTTGGT GGAGAACGCG CTGGTGGTGG
51 CCACCATCGC CAAGAACCGG AACCTGCACT CACCCATGTA CTGCTTCATC
101 TGCTGCCTGG CCTTGTCGGA CCTGCTGGTG AGCGGGAGCA ACGTGCTGGA
151 GACGGCCGTC ATCCTCCTGC TGGAGGCCGG TGCACTGGTG GCCCGGGCTG
201 CGGTGCTGCA GCAGCTGGAC AATGTCATTG ACGTGATCAC CTGCAGCTCC

a) ¿Cuántos fragmentos se observan con una digestión realizada con Hha?

b) ¿Y en un ADN digerido con HhaI? ¿Y otro con BclI?

8
TALLER 3. TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR BCM 2022

c) Si la enzima BclI no puede reconocer su sitio de corte, ¿qué puede estar sucedien-
do?
d) En el caso de la digestión con la enzima BclI: ¿cómo se vería un gel donde se
encuentra un 50 % ADN que tiene el sitio de corte intacto y un 50 % con el sitio
de corte modificado?

2. Llega a consulta de neonatología, Daniel, un varón de 14 días de vida, con los resultados
del estudio de pesquisa neonatal el cual informa: Test de tripsina inmunoreactiva (TIR)
80ng/dl (punto de corte normal 60ng/dl). Dada la alteración en este resultado, el
médico decide realizar un test del sudor con resultado de 60ml/dl. Con estos resultados
el médico informa a la familia que su hijo presenta una enfermedad genética llamada
fibrosis quística y plantea a la familia la necesidad de realizar un estudio genético ya
que la fibrosis quística puede ocasionarse por diferentes mutaciones que podrían tener
implicancias clínicas distintas. La mutación más común ∆F508 es ocasionada por la
deleción de 3 bases en el exón 10 del gen CFTR generando la pérdida del aminoácido
fenilalanina. Está presente en más del 70 % de los individuos afectados. Con el fin de
detectar esta mutación el neonatólogo decide realizar un análisis genético, para lo cual
se requiere previamente amplificar la secuencia de interés en el laboratorio, por medio
de la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

Figura 3.1: Diagrama de la reacción de PCR.

a) ¿Qué es una PCR y cuál es su finalidad?

b) ¿Cuáles son los elementos indispensables para realizarla?
c) ¿Cómo se realiza dicha técnica?
d) ¿Cuáles son los sucesos principales en cada ciclo de replicación?
e) En la siguiente figura se muestra un sector del gen CFTR, y en negrita se marca
la secuencia de nucleótidos cuya mutación determina la pérdida del aminoácido
fenilalanina en la posición 508 (mutación ∆F508).

9
TALLER 3. TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR BCM 2022

5’ CAGTTTTCCT GGATTATGCC TGGCACCATT AAAGAAAATA TCATCTTTGG

3’ GTCAAAAGGA CCTAATACGG ACCGTGGTAA TTTCTTTTAT AGTAGAAACC

TGTTTCCTAT GATGAATATA GATACAGAAG CGTCATCAAA GCATGCCAAC

ACAAAGGATA CTACTTATAT CTATGTCTTC GCAGTAGTTT CGTACGGTTG

TAGAAGAGG 3’
ATCTTCTCC 5’

Para analizar dicha mutación se realiza una amplificación por PCR de este sector
del gen.

Elija oligonucleótidos cebadores de 20 nucleótidos de largo que le permitan am-

plificar esta región. Escriba la secuencia en la dirección 5’ → 3’.

Primer directo 5’ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 3’

Primer reverso 5’ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 3’

f ) Una vez amplificado este segmento se realiza una hibridación con dos sondas (se-
cuencias de nucleótidos) específicas, una correspondiente a la secuencia portadora
de la mutación (sin los 3 nucleótidos marcados en negrita) 5’-CACCAATGATATTT
TCTT-3’ y otra con la secuencia normal 5’-CACCAAAGATGATATTTTC-3’.
Los fragmentos de ADN que no poseen la mutación se pegan a la sonda 1 (alelo
normal) y los fragmentos portadores de la mutación se van a pegar a la sonda 2
(alelo mutado) generando una imagen como se muestra en la figura.

Figura 3.2: Resultado del experimento de hibridación de dos sondas.

10
TALLER 3. TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR BCM 2022

¿Qué conclusiones puede sacar a partir de este experimento? ¿Cómo serían los
genotipos de cada uno de los individuos? ¿Cómo asesoraría a la familia de Daniel?

3. Un forense extrae el ADN de: la sangre de una víctima (V) de violación, el semen
extraído de su cuerpo (S) y de muestras de sangre tomadas de 4 sospechosos (S1, S2,
S3 y S4). Para determinar de cuál de los sospechosos procede el semen encontrado en
la víctima, realiza un estudio de polimorfismos del tipo minisatélites “Repetidos en
Tándem de Número Variable” (que se abrevian en inglés como “VNTRs”). Analizó un
VNTR llamado D1S80 situado en el cromosoma 1.
Efectuó una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) utilizando cebadores en los
extremos de la región que contienen la secuencia de D1S80 (cuya unidad repetida es
de 16 pares de bases) y determinó los alelos que posee cada individuo analizando el
tamaño de los productos de PCR en una electroforesis. Los resultados se muestran en
la figura siguiente.

Figura 3.3: Electroforesis de agarosa de VNTRs de la víctima, semen y sospechosos.

a) ¿Por qué los alelos de cada individuo tienen una migración diferente entre sí en
el gel?
b) ¿Puede estimar la diferencia de tamaño entre ellos?
c) ¿Por qué la mayoría de los individuos son heterocigotos para este D1S80?
d) ¿Existe algún sospechoso que no pueda ser descartado como culpable?
e) ¿Por qué se analiza el ADN de la víctima?
f ) Si el semen contiene gametos que son células haploides, ¿por qué se observan dos
bandas en ese carril?

11
Taller 4

Cromatina

1. Las histonas tienen una alta proporción de aminoácidos básicos. ¿Qué ventajas puede
ofrecer esta característica de acuerdo a la función que estas proteínas cumplen? ¿Por
qué otras moléculas de unión al ADN pueden no presentar esta característica?

2. La nucleasa micrococal (MNasa) es una ADNasa capaz de cortar ambas hebras del
ADN doble hebra si éste no está unido a proteínas. El ADN celular de fibroblastos,
empaquetado en nucleosomas (Cromatina) o desnudo (ADN desnudo), se sometió a
una digestión con nucleasa micrococal. El resultado de la digestión se analizó mediante
electroforesis y se muestra en el esquema. Para ambos tipos de ADN se ensayó una
reacción sin enzima (0) y tres reacciones a concentraciones crecientes de enzima (trián-
gulo creciente hacia la derecha). Los números ubicados a la derecha del gel señalan la
migración esperada de las moléculas de ADN de los tamaños indicados en pares de
bases.

Figura 4.1: Digestión de Cromatina y ADN desnudo con nucleasa micrococal.

12
TALLER 4. CROMATINA BCM 2022

a) Describa el patrón de bandas que se observa en el gel.

b) ¿A qué se debe la acción diferencial de la enzima entre el ADN desnudo y la
cromatina?
c) Sugiera una explicación al patrón regular de bandas obtenido para la cromatina.

3. Respecto a la heterocromatina, indique las afirmaciones correctas:

a) Es visible sólo durante la metafase.

b) No contiene proteínas asociadas.
c) Contiene genes inactivos.
d) Puede contener ADN repetido.

4. Respecto a los telómeros, indique las afirmaciones correctas:

a) Contienen el mismo tipo de cromatina que el resto del cromosoma.

b) Contienen secuencias específicas de ADN repetitivo.
c) Contienen ADN apareado de un modo diferente al del modelo de Watson y Crick.
d) No son necesarios para el mantenimiento del cariotipo normal.

5. La familia de histonas H2A contiene múltiples variantes. Se desea conocer cuán diferen-
te o parecida es H2A.1 humana con respecto a otros organismos. Para esto se comparan
las secuencias de aminoácidos de H2A.1 humana y de histonas de otros organismos. La
tabla muestra en forma ordenada las variantes de histonas por su similitud con H2A.1
humana.
Los valores de Blast E-value informan de la similaridad entre la secuencia problema y
la que se esta comparando. Cuanto más cercano a 0 es el valor, mayor es su similitud.
Dentro de las histonas H2A.1: ¿cuál es el organismo más cercano? ¿Y el mas disímil?

13
TALLER 4. CROMATINA BCM 2022

Cuadro 4.1: Resultados parciales obtenidos con la búsqueda de la secuencia mencionada en

HistoneDB 2.0

GI Variant Taxonomy BLAST E-value

25092737 H2A.1 Homo sapiens 1.26192E-92
675650858 H2A.1 Callithrix jacchus 1.38136E-89
348586313 H2A.1 Cavia porcellus 1.52586E-85
752439274 H2A.1 Ailuropoda melanoleuca 1.70178E-85
329663492 H2A.1 Bos taurus 1.70178E-85
545554572 H2A.1 Canis lupus familiaris 1.70178E-85
344307320 H2A.1 Loxodonta africana 2.38674E-85
655885615 H2A.1 Oryctolagus cuniculus 2.38674E-85
335291892 H2A.1 Sus scrofa 2.38674E-85
694915112 H2A.1 Pan troglodytes 2.46521E-85
75832135 H2A.1 Rattus norvegicus 4.74618E-85
226532207 H2A.Z Zea mays 1.58848E-41
15232536 H2A.Z Arabidopsis thaliana 1.24161E-40

14
Taller 5

Transcripción de ARN

1. Dibuje un ARNm eucariota típico y el gen a partir del cual fue transcripto. Marque los
extremos 5’y 3’ de ambas moléculas e identifique las siguientes regiones o secuencias.
Promotor
Región 5’ no traducida
Región 3’ no traducida
Secuencia codificante
Sitio de inicio de la transcripción
Codón de inicio y finalización
2. El siguiente es un esquema simplificado de la transcripción de un gen eucariota. La
flecha indica la dirección de avance de la ARN polimerasa.

Figura 5.1: Esquema de transcripción de un gen eucariota

15
TALLER 5. TRANSCRIPCIÓN DE ARN BCM 2022

Indique las opciones correctas.

a) La letra a indica los desoxi-ribonucleótidos a ser incorporados.
b) La letra b indica el promotor del gen.
c) La letra c indica el sitio con actividad exonucleasa 3’-5’de la polimerasa.
d) La letra d representa el lugar donde se colocará la caperuza al ARN mensajero.
e) Las letras e y f representan los extremos 5’ y 3’ respectivamente de la hebra molde
de ADN.
3. Una ARN polimerasa está transcribiendo un segmento de ADN que contiene la siguiente
secuencia:

5’- GTAACGGATG- 3’
3’- CATTGCCTAC- 5’

Si la polimerasa transcribe esta secuencia de izquierda a derecha, ¿cuál será la secuencia

de ARN obtenida? ¿Y si transcribe de derecha a izquierda?
4. El siguiente es un fragmento de ADN con la secuencia de la región que se encuentra
alrededor del sitio de inicio de la transcripción de un gen procariótico. Escriba la
secuencia de ARN del transcripto.

5’ CTCCCTATAATGCGCCTCCATCGTCGATCTTAGTC 3’
3’ GAGGGATATTACGCGGAGGTAGCAGCTAGAATCAG 5’

5. Un microarray es una tecnología que permite estudiar la expresión de muchos genes a

la vez. Consiste en colocar miles de secuencias génicas en lugares determinados sobre
un portaobjetos de vidrio llamado chip. Una muestra que contiene ADN o ARN se
pone en contacto con el chip. El apareamiento de las bases complementarias entre la
muestra y las secuencias de genes en el chip produce una cantidad de luz que se puede
medir. Las áreas del chip que producen luz identifican los genes que se expresan en esa
muestra.

En el siguiente experimento se analiza la expresión de genes de una muestra de tejido

tumoral.

16
TALLER 5. TRANSCRIPCIÓN DE ARN BCM 2022

a) Explique el experimento.
b) Indique si puede detectar genes que se expresan en el tumor únicamente.
c) ¿Hay genes que no se están expresando?

6. La siguiente secuencia de ADN doble cadena pertenece al gen que codifica el factor
de transcripción de tipo “dedos de Zinc” SP1. La mayoría de la secuencia promoto-
ra (la secuencia “río arriba” se numera negativamente) y parte del primer exón (la
transcripción comienza en el +1) se muestran en la siguiente página:

a) Escriba las primeras 10 bases del transcripto primario del gen SP1.
b) ¿En qué se diferencia el extremo 5’ de este transcripto con el del ARNm maduro?
c) Considerando que la secuencia ADN a la que une el factor de transcripción SP1
es CCCGCCC, ¿podría SP1 regular la transcripción de su propio gen?

17
TALLER 5. TRANSCRIPCIÓN DE ARN BCM 2022

Figura 5.2: Secuencia de ADN del gen SP1.

18
Taller 6

Procesamiento del ARN

1. Se sospecha que el gen HEP, cuya estructura se esquematiza en la figura A, está aso-
ciado a una patología hepática. Se extrae ARN de distintos tejidos de un paciente
afectado por dicha enfermedad y se analiza mediante la técnica de Northern blot (si-
milar al Southern Blot pero se analiza ARN en vez de ADN) utilizando dos sondas. En
un experimento se usa como sonda una secuencia complementaria al tercer exón del
gen y en otro experimento una sonda complementaria al exón 4. El patrón obtenido se
muestra en la parte B de la figura.

Figura 6.1: Estructura del gen HEP (A) y resultado de los experimentos de Northern blot
(B).

19
TALLER 6. PROCESAMIENTO DEL ARN BCM 2022

Indique cuales de las siguientes afirmaciones son correctas:

a) El exón 3 mide 650 pares de base.

b) El exón 4 mide 850 pares de base.
c) La patología puede estar asociada a la ausencia del exón 3 en el hígado.
d) El gen se transcribe en todos los tejidos analizados.

2. Los investigadores sabían que dos endonucleasas (EcoR I y Hind III) no cortaban nin-
gún ADNc (es decir el ADN obtenido por retrotranscripción del ARNm) del gen de
la ovoalbúmina de gallina. Sin embargo, al someter al ADN genómico de gallina (que
naturalmente contiene entero el gen de la ovoalbúmina) a estas enzimas, el gen en cues-
tión es cortado en varios fragmentos. Serían explicaciones posibles de este fenómeno,
las siguientes:

a) El ARNm del gen de la ovoalbúmina sufre un procesamiento diferencial.

b) Porque el ADN genómico es sintetizado por la ADN polimerasa y el ADNc por la
retrotranscriptasa.
c) Las dianas de las enzimas de restricción se encuentran en los intrones del gen.
d) Porque los nucleosomas que enrollan el gen de la ovoalbúmina están muy acetila-
dos.
e) El ARNm del gen de la ovoalbúmina sufre un proceso de edición (o “editing”) que
elimina las secuencias diana.

3. El gen de la alfa-tropomiosina contiene 13 exones (indicados como cuadrados blancos)

y tres señales de poliadenilación (indicadas por una A). Como resultado del procesa-
miento alternativo de intrones y de señales de poliadenilación, el transcripto primario
puede procesarse en varios ARNm. A continuación se representan 3, los cuales son
expresados específicamente en el músculo estriado, músculo liso y cerebro.

Figura 6.2: Transcriptos del gen de la alfa-tropomiosina.

20
TALLER 6. PROCESAMIENTO DEL ARN BCM 2022

En base a estos datos:

a) ¿Considera a la alfa-tropomiosina como una unidad transcripcional simple o com-

pleja?
b) ¿Cuál es la ventaja de tener un gen que puede ser procesado de maneras diferentes?
c) Una mutación en el gen de la alfa-tropomiosina resulta en la pérdida de tropomio-
sina funcional en los tres tejidos analizados. ¿Dónde podría ubicar esta mutación?
d) Una mutación diferente produce la pérdida de función sólo en músculo liso. ¿Dónde
ubicaría usted esta mutación?

4. En eucariotas, los genes codificantes de las histonas tienen la peculiaridad de que no

poseen intrones, y sus ARNm no tienen colas poli(A). Además, estos ARNm presentan
una vida media de menos de 30 minutos, cuando los ARNm humanos en general tienen
una vida media de 10 horas. En casi todos los eucariotas, los genes de las histonas
están dispuestos en múltiples dominios en tándem, de manera que cada dominio lleva
una copia de cada uno de los cinco genes de las histonas. ¿Cuáles serán las ventajas de
estas características a la hora de sintetizar estas proteínas?

21
Taller 7

Código genético y Traducción de

proteínas

1. En la siguiente secuencia codificante de preARNm los exones están representados en

mayúsculas y los intrones en minúsculas.

5’-ACCGGGCGAUGGAAacgucgucgucagcgggaagucgaucguucggGAGAACUGCGCa
cuguuccgaucgauucgaucgaucgauuuagguucggggAAAUACAGCGGGcguuaauuuc
cggaaaaacccuuuuacuacuaucuaaaaaccccgggggggUUCGCUUCCUGUAUAAACGC
CGGaucggcugugcuaggcuagccgaucguugcagcagcucggcuugccguugacaGAUAU
CGUGAagcguuugacgagcuagcuagcuagcuggacuugacuugacuuagcuggguagcuu
gacugauUUGAAAGAACUGAGGGacguucgugagcugauuucggguaauuuaaaUGAAAAU
GAGACUAUUUGUGCUUGACCGGUUA-3’

Describa la secuencia de aminoácidos resultante (usando la abreviación de c/u de ellos

con una única letra) cuando en el procesamiento alternativo del ARN se toman en
cuenta:

a) Los exones 1, 2, 3 y 7
b) Los exones 1, 4 y 7
c) Los exones 1, 5, 6 y 7

2. A continuación se describe un ARNm maduro eucariota. mG5’ representa el cap, y

(AA)200 la cola de poli(A). mG5’-CUCUCAGGCAUGACCUCGCCUAGGUCGAGUAGGUGAC
ACGUACUGAG-(A)200 - 3’. Recordando que el codón de inicio es AUG (Metionina)
y los codones de terminación son UAA,UGA, UAG, considere cuáles de las siguientes
afirmaciones son correctas si se traduce este ARNm.

a) El polipéptido codificado tiene 12 aminoácidos.

22
TALLER 7. CÓDIGO GENÉTICO Y TRADUCCIÓN DE PROTEÍNAS BCM 2022

Figura 7.1: Código genético

b) El último aminoácido del polipéptido es Glu.

c) El tercer aminoácido es Ser.
d) El anticodón del ARNt para el segundo aminoácido podría ser GGU.
e) El anticodón del ARNt para el penúltimo aminoácido podría ser ACU.
3. La siguiente secuencia corresponde a un gen que no contiene intrones, ¿cómo será el
ARNm que se sintetiza a partir de la misma?

Figura 7.2

¿Si en el proceso anterior se cometieran los siguientes errores, qué consecuencias ob-
servaría a nivel de la proteína?
a) Una mutación puntual en la 8ª base
b) Un cambio T>C en el nucleótido 30
c) Una transición en la posición 42
d) Un cambio C56A

23
TALLER 7. CÓDIGO GENÉTICO Y TRADUCCIÓN DE PROTEÍNAS BCM 2022

4. De las siguientes afirmaciones sobre la traducción del ARNm, indique cuáles corres-
ponden a organismos procariotas, cuáles a organismos eucariotas, cuáles a ambos y
cuáles son falsas:

a) Inicia con un único tipo de codón.

b) Transcurre sin desensamblar las subunidades menor y mayor del ribosoma durante
el proceso.
c) El “CAP” es la estructura responsable del reconocimiento del ARNm por parte
del ribosoma.
d) La cola poli(A) es una estructura necesaria para que ocurra el proceso.
e) La secuencia Shine Dalgarno se hibrida con una de las moléculas de ARNr.
f ) Comienza en el extremo 3’, en dirección 3’-5’.
g) El ribosoma puede escindir un enlace peptídico en dirección C-N terminal para
corregir errores de aminoácidos agregados de forma incorrecta.

5. Para lograr elucidar el mecanismo de traducción de genes en organismos eucariotas se

hizo uso de la droga harringtonina. En la figura se esquematiza el resultado de uno de
estos experimentos.
En la parte superior (panel A) se representa un ARNm eucariota que está siendo
traducido por cuatro ribosomas (numerados del 1 al 4). Las etiquetas 1a y 1b indican
las subunidades mayor y menor del ribosoma antes de su ensamblaje. La situación
representada es inmediatamente anterior al agregado de la droga.
En la parte inferior (panel B) se muestra como queda el ARNm que estaba siendo
traducido en A, luego de la incubación con la droga durante un intervalo de tiempo.
Los ribosomas 1 y 2 de B son los mismos 1 y 2 observados en A.
El ARNm maduro representado mide 1200 pares de bases desde su extremo 5’ hasta
su extremo 3’ (como se indica con el corchete en la figura).

Figura 7.3: Traducción de un ARNm eucariota

24
TALLER 7. CÓDIGO GENÉTICO Y TRADUCCIÓN DE PROTEÍNAS BCM 2022

Encuentre la opción correcta en las siguientes preguntas:

Con respecto al ribosoma marcado con 1:

a) En ambos paneles (A y B) se encuentra unido a la secuencia Shine Dalgarno.

b) Es el primero que se unió al ARNm respecto a los demás.
c) Su unión depende de la estructura CAP en 5’.
d) Es un complejo macromolecular compuesto únicamente por proteínas.

El tamaño de la proteína traducida en condiciones normales a partir del ARNm repre-

sentado en la figura será:

a) de 400 aminoácidos
b) mayor a 400 aminoácidos
c) menor a 400 aminoácidos

De acuerdo a la figura podemos concluir que la harringtonina:

a) impide la translocación de todos los ribosomas

b) impide la translocación del ribosoma que se une al sitio de inicio traduccional
c) desensambla los ribosomas que se encuentran traduciendo
d) desensambla los ribosomas que alcanzan el codón de terminación

Los péptidos nacientes que se muestran en la figura:

a) Son todos distintos ya que cada ribosoma traduce una proteína diferente.
b) Tienen extremos carboxilo terminales idénticos.
c) El próximo aminoácido que se agregará a la cadena seguro es el mismo en todos
los casos.
d) El presente en el ribosoma 4 de la parte superior y el del ribosoma 2 de la parte
inferior son idénticos.

6. Se está estudiando el efecto de 3 antibióticos en la síntesis de proteínas utilizando un

sistema de transcripción y traducción in vitro (libre de células) que emplea un extracto
de E. coli conteniendo la maquinaria necesaria para la transcripción y traducción de
ARNm. El molde de ADN a ser transcripto y traducido es un plásmido conteniendo el
gen de la luciferasa (proteína que genera emisión de luz en las luciérnagas), de modo
que la síntesis proteica puede medirse por luminiscencia. Los antibióticos utilizados son:
ampicilina, tetraciclina y puromicina. En la siguiente figura se grafica la luminiscencia
en función del tiempo obtenida en ausencia (control) y presencia de cada uno de los
antibióticos (parte A).
¿Cuál de estos antibióticos interfiere con la expresión de la proteína luciferasa?

25
TALLER 7. CÓDIGO GENÉTICO Y TRADUCCIÓN DE PROTEÍNAS BCM 2022

¿Estos resultados le permiten distinguir si el antibiótico afecta la transcripción, la

traducción del gen, u otro paso de la expresión génica?
Para comprender a qué nivel actúan estos antibióticos se realizó un ensayo de Northern-
Blot donde se midieron los niveles de ARNm con una sonda anti-mARN del gen luci-
ferasa y un Western-Blot utilizando un anticuerpo anti-luciferasa. Las dos membranas
resultantes de estos experimentos se muestran en la parte B de la figura.

Figura 7.4: Luminiscencia registrada en función del tiempo.

Discuta si las siguientes afirmaciones son correctas o incorrectas:

a) La ampicilina no afecta los niveles de ARNm y de proteína luciferasa.
b) La tetraciclina no afecta los niveles de ARNm y de proteína luciferasa.
c) La tetraciclina parece inhibir la transcripción de la luciferasa.
d) La tetraciclina parece inhibir la traducción de la luciferasa.
e) La tetraciclina podría actuar inhibiendo el ensamblaje de las subunidades riboso-
males e impidiendo su unión al ARNm.
f ) La puromicina podría actuar inhibiendo el ensamblaje de las subunidades riboso-
males e impidiendo su unión al ARNm.
g) La puromicina tendría un mecanismo de inhibición de los pasos tardíos de la
síntesis proteica.
¿Qué nos dicen estos resultados acerca del mecanismo de acción de estos 3 antibióticos?
Busque en la bibliografía y proponga un mecanismo de acción plausible para cada uno
de ellos.

26
Taller 8

Regulación en Procariotas

1. La siguiente figura muestra el esquema de un plásmido (llamado pQE-T7) diseñado

para la expresión de proteínas recombinantes en Escherichia coli, como por ejemplo la
hormona peptídica insulina (codificada por el gen INS), que es ampliamente utilizada
para el tratamiento de la diabetes.

Figura 8.1: Plásmido pQE-T7.

a) ¿Qué es un plásmido?
b) ¿Cuál es la función de cada uno de los elementos que aparecen marcados en el
esquema superior, donde se amplía el gen clonado para su expresión?
c) ¿Cuál es la función de los elementos indicados como LacI, Ori, y Kanamicina?
d) ¿Cuál es la función natural de los plásmidos en las bacterias? ¿Qué importancia
tienen para la terapia con antibióticos?

27
TALLER 8. REGULACIÓN EN PROCARIOTAS BCM 2022

2. En la figura se muestra la región del ADN bacteriano que contiene mayormente al

operón lactosa y varias proteínas (5-10) relacionadas con su función.

Figura 8.2: Operón Lactosa.

a) Describa el significado de todas las siglas e identifique los elementos numerados

del 1-10.
b) Dibuje la posición y la presencia de estas moléculas cuando la bacteria crece en
presencia de lactosa (a), o en ausencia de lactosa (b) y en presencia de glucosa
(c). Incorpore a la lactosa y el cAMP en su dibujo.

3. ¿Qué efecto tienen sobre el operón lac las siguientes mutaciones?:

a) una mutación de cambio de sentido en el represor que impide su unión a la alo-

lactosa.
b) una mutación de cambio de sentido en el represor que impide su unión al operador.
c) una mutación en el operador que elimina su función.

4. En la tabla se listan 6 bacterias diferentes, que poseen los genotipos indicados para
el operón lac. En la columna titulada Genotipo, el signo + indica que las secuencias
son normales/salvajes, mientras que el signo – indica la presencia de una mutación de
pérdida de función. Asocie las mutaciones OC y IS con el ejercicio anterior. En este
ejercicio se interroga si se producirá o no beta-galactosidasa y permeasa cuando las
bacterias indicadas se cultivan en un medio sin o con lactosa.

28
TALLER 8. REGULACIÓN EN PROCARIOTAS BCM 2022

Complete la siguiente tabla insertando un signo “+” donde se produzca enzima y un

signo “-“ en caso de que no se sintetice la enzima.

Beta-galactosidasa Permeasa
Genotipo Sin lactosa Con lactosa Sin lactosa Con lactosa
Ej: I P O Z Y /I P O Z Y
+ + + + + + + + + +
- + - +
a) I− P+ OC Z+ Y− /I+ P+ O+ Z− Y+
b) I+ P− OC Z− Y+ /I− P+ OC Z+ Y−
c) IS P+ O+ Z+ Y− /I+ P+ O+ Z− Y+
d) IS P+ O+ Z+ Y− /I− P+ OC Z− Y+
e) I− P− O+ Z+ Y+ /I− P+ OC Z+ Y−

29
Taller 9

Regulación en Eucariotas

1. En la figura se detalla un experimento de los efectos de mutaciones puntuales en dis-

tintas regiones del promotor en los niveles de expresión del gen para la β-globina.
¿Cuáles son los efectos y por qué?

Figura 9.1: Niveles de expresión del gen β-globina cuando se realizan mutaciones puntuales
en los nucleótidos de su promotor.

2. Las células de Schneider en cultivo responden al tratamiento con la hormona RZR

alterando su patrón de expresión génica. Se sospecha que el gen de la mucina podría
estar sujeto a esta regulación.
Para probar esta hipótesis se estudió la expresión génica de células tratadas (50 mg/ml
RZR) o sin tratar (0 mg/ml RZR) con la hormona. Por otro lado se extrajo ARN de
moscas Drosophila en varias etapas del desarrollo y en varios tejidos adultos: sistema
nervioso (CH5), tubo digestivo (gut), glándulas salivares y células de Schneider. El
ARN fue separado por electroforesis, transferido a una membrana e hibridizado con
una sonda de ADNc del gen de la mucina de Drosophila (Northern blot). Iguales can-
tidades de ARN-polidenilado (ARNm) fueron sembradas en cada pocillo del gel.

30
TALLER 9. REGULACIÓN EN EUCARIOTAS BCM 2022

¿Cuál o cuáles de las siguientes afirmaciones son correctas basándose en el Northern

blot que se observa a continuación?

Figura 9.2: Northern blot del gen de la mucina.

a) El transcripto de mucina sufre splicing alternativo.

b) El transcripto de 1 kb es específico del tubo digestivo (gut).
c) El transcripto de mucina es más abundante en las glándulas salivares del adulto
que en el intestino del adulto (adult gut).
d) La expresión de mucina se incrementa con el tratamiento con RZR.
e) El transcripto de 1.5 kb es más abundante que el de 1 kb en todos los tejidos.

3. El genoma del virus HIV pese a tener varias regiones codificantes (indicadas con rec-
tángulos en la parte A del esquema), da lugar a un único transcripto primario de 9
kilobases. Por splicing alternativo se generan otros dos ARNm de 4kb y 2 Kb. El trans-
cripto de 2 Kb da lugar a la proteína Rev que es imprescindible para el transporte al
citoplasma de los ARNm de 9Kb y 4 Kb.
Teniendo en cuenta el esquema, indique cuáles de las siguientes afirmaciones considera
correctas:

a) La proteína Gag sólo puede ser traducida a partir del mensajero de 9 Kb.
b) La proteína Rev es una proteína de unión al ARN.
c) La proteína de cubierta Env puede sintetizarse a partir del ARNm de 4 Kb.
d) La región codificante para la proteína Vpu es escindida como intrón en el ARNm
de 2 Kb.
e) Es necesaria la existencia de ARNm de 2Kb funcionales para poder traducir la
proteína Pol a partir del ARNm de 9 Kb.

31
TALLER 9. REGULACIÓN EN EUCARIOTAS BCM 2022

Figura 9.3: (A) Regiones codificantes del genoma del virus HIV. (B) ARN mensajeros gene-
rados por el virus HIV.

4. ¿Qué papel juega la acetilación/deacetilación de histonas en la regulación de la activi-

dad transcripcional de los genes eucariotas?

5. En el cortometraje “¿Tienes lactasa? La co-evolución de genes y cultura” (material

complementario del práctico del curso), vemos que los investigadores no encontraron
ningún cambio en la secuencia de ADN, o mutación, en la región codificante del gen
de la lactasa que estuviera asociado con la tolerancia/intolerancia a la lactosa. Este
hallazgo sugiere que el cambio genético responsable de la tolerancia o intolerancia a la
lactosa no se encuentra en la región codificante del gen. En la primer figura de la pagina
siguiente vemos un esquema de la estructura de la región, que incluye el promotor y
sitio de inicio del gen LCT y el intrón 13 del gen MCM6. En el intrón 13 se señalan
variantes de un único nucleótido, en particular la variante C/T-13910 (rs4988235)
¿Podría ser el producto del gen MCM6 responsable de esa regulación? ¿Podría el
cambio encontrarse en una región de ADN que regula el gen LCT ?

32
TALLER 9. REGULACIÓN EN EUCARIOTAS BCM 2022

Figura 9.4: Nivel de transcripción de la lactasa. Las barras amarillas indican sitios ubicados
a 14k aprox. en el gen MCM6, en azul se indica metilación del ADN en el sitio. La barra
horizontal indica la región promotora del gen y el estado de metilación del ADN.

Estudios posteriores describen que el cambio C>T-13910 (rs4988235) aumenta la afi-

nidad de un factor de transcripción (Oct-1) a un elemento de respuesta en ese sitio. En
otro estudio independiente demuestran que la presencia del alelo rs4988235_C induce
un estado de hipermetilación de la región y del promotor de LCT. ¿Con estos datos
puede construir una hipótesis que explique la regulación del gen LCT ?
En la figura inferior de la pagina siguiente se muestra la distribución de otras variantes
asociadas a la persistencia de la tolerancia a la lactosa. ¿Pueden estar vinculadas con
la acción de rs4988235?

Figura 9.5: Distribución de variantes asociadas a la persistencia de la tolerancia a la lactosa

33