Suscríbete a DeepL Pro para poder traducir archivos de mayor tamaño.

Más información disponible en

Impreso en EE.UU.
0099-2399/85/1104-0156/$02.00/0 VOL. 11, No. 4, ABRIL 1985
REVISTA DE ENDODONCIA
Copyriglt it> 1985 por The American Association of EndOdonlists

ARTÍCULOS
CIENTÍFICOS

Efectos del hidróxido de calcio en el tejido pulpar

bovino: Variaciones en el pH y la concentración de
calcio
Los Efectos del Hidroxido de Calcio en el Tejido
Pulpar Bovino: Variaciones en el pH y la
Concentración de calcio
Terence M. Gordon, BDS, Don M. Ranly, DDS, PhD, y Barbara D. Boyan, PhD

Dos propiedades del Ca(OH)2, el alto pH y la P la estimación de la formación de la dentina u

concentración de iones de calcio, pueden contribuir a su reparativa dos propiedades del Ca(OH)2 su alto pH e y la
éxito en la estimulación de la formación de dentina concentración del ion Ca. La pulpa bovina fue d tratada
reparadora. Se trató la pulpa bovina con soluciones de con soluciones de diferente pH y
Ca(OH)2 de pH y concentración variables o con e concentración de Ca(OH)2 variable o con Ba(OH)2 n
Ba(OH)2 saturado y se examinó la actividad enzimática saturado, y se examinó la actividad enzimática y la
y la desnaturalización de las proteínas. Las pulpas desnaturalización proteica. Las pulpas tratadas
tratadas se homogeneizaron y centrifugaron y los c fueron homogeneizadas y centrifugadas, y el
sobrenadantes se analizaron para determinar la actividad o residuo flotante fue analizado estudiando n
de la fosfatasa alcalina y la deshidrogenasa láctica. t
Ambas actividades enzimáticas fueron ligeramente r
deprimidas por las soluciones de Ca de menor pH y i
completamente destruidas por el Ca(OH)2 saturado y el b
Ba(OH)2 saturado. La electroforesis en gel de la u
proteína de la pulpa tratada reveló que el Ca(OH)2 i
saturado no alteró el patrón en comparación con los r
controles, mientras que el Ba(OH)2 saturado modificó
significativamente el bandeado. Cuando la a
concentración de Ba(OH)2 se redujo a la molaridad del
s
Ca(OH)2 saturado, el
Los patrones electroforéticos de la proteína de la pulpa u
tratada fueron
similar. Estos resultados sugieren que los efectos del é
Ca(OH)2 dependen principalmente del pH. Su eficacia x
puede deberse a una menor solubilidad y, por tanto, i
toxicidad, en comparación con las sales alcalinas de t
iones catódicos divalentes como el Ba(OH)2. o

e
n
 l ica. Ambas actividades enzimáticas fueron
a ligeramente disminuidas por las soluciones de Ca de
menor pH y completamente destruidas por el
Ca(OH)2
a en lámina y Ba(OH)2 saturados. La electroforesis c
del gel de la proteína de las pulpas t
tratadas demuestra que el Ca(OH)2 saturado no i
alteraba el patrón cuando se lo comparaba con los v
controles, mientras que el Ba(OH)2 saturado i
modificaba con siderablemente la banda. Cuando d la
concentración de Ba(OH)2 se redujo a la a
molaridad del Ca(OH)2 saturado, los patrones d
electroforéticos de las pro teínas de las pulpas tratadas
fueron similares. Estos resultados
d sugieren que los efectos del Ca(OH)2 dependen
e fundamentalmente de su pH. Su eficacia puede ser el
resultado de su baja solubilidad, y por lo tanto,
l alcalinas cuando
toxicidad, se compara con las ventas
de cationes bivalentes, tal como ela
Ba(OH)2-
f
o
s f
El hidróxido de calcio se ha convertido en el agente
a
clínico estándar para promover la formación de
t
dentina reparadora desde su introducción en la
a
odontología en 1930 (1). Aunque se han postulado
s
muchas teorías, el mecanismo de esta inducción sigue
a
siendo desconocido. Dos propiedades del hidróxido de
calcio, los iones de calcio y el pH
a alcalino, pueden contribuir por separado o de forma
sinérgica a su éxito. Aunque los investigadores de los
l c
primeros estudios (2, 3) razonaron que el calcio del
a
puente dentinario lo proporcionaba el material de
l
recubrimiento de hidróxido de calcio, investigaciones
i
posteriores han sugerido que este calcio procede de la
circulación
n sistémica (4). Calcio
a

156 y

l
a

d
e
h
i
d
r
o
g
e
n
a
s
a

l
a
t
 Vol. 11, No. 4, abril de 1985
10,2; 3: 0,01 M Ca(OH)2, pH 11,9; 4: 0,02 M Ca(OH)2 ,
del hidróxido de calcio podría desempeñar otro papel, pH 7,2; 5: 0,1 M Ba(OH)2, pH 12,3; y 6: solución salina
precipitándose como proteinatos de calcio (3) o cristales de fisiológica (0,9% NaCl). La pulpa no incubada se analizó
carbonato de calcio (5), cualquiera de los cuales podría como medida de la actividad basal. La pulpa se incubó en
actuar como demarcación entre el tejido pulpar necrótico y solución salina así como en las soluciones de prueba para
el vital y servir como matriz adecuada para la alineación de revelar los efectos no específicos de la incubación. Tras el
los odontoblastos. tratamiento, se decantaron los medios de incubación y las
Se ha postulado que el elevado pH del hidróxido de pulpas se lavaron con agua destilada y se homogeneizaron
calcio saturado mantiene la región inmediata del sitio de en
recubrimiento en un estado de alcalinidad, una condición
favorable para la formación de dentina (6). Sin embargo, el
fracaso en la inducción de dentina reparadora utilizando
otros compuestos básicos sugiere que el pH no es el único
factor. El hidróxido de bario y el hidróxido de amonio, con
alcalinidades similares, provocan la liq uefacción de la
pulpa cuando se colocan sobre el tejido expuesto
(7) y el hidróxido de magnesio provoca más inflamación y
menos formación de tejido duro tanto en perros como en
humanos
(8). Además, cuando se utilizó hidróxido de bario en un
intento de apexificar incisivos de mono, se produjo
inflamación, proliferación epitelial y una grave reacción a
cuerpo extraño (9).
A la luz de la incertidumbre sobre el mecanismo de
acción del hidróxido de calcio, este estudio se diseñó para
investigar los cambios bioquímicos del tejido pulpar tras el
tratamiento con este compuesto con el fin de diferenciar
las acciones de los iones de calcio y del pH.

MATERIALES Y MÉTODOS

Preparación de las
soluciones de ensayo

Las molaridades de las soluciones saturadas de Ca(OH)2

y Ba(OH)2 se determinaron gravimétricamente. Al secar
las soluciones al vacío, se evitó la formación de sales de
CaCO3 o BaCO3. Todas las demás soluciones se
prepararon con respecto a las concentraciones determinadas
de Ca(OH)2 saturado (0,02 M) y Ba(OH)2 (0,1 M).

Actividad enzimática

Para determinar el daño celular tras la exposición al

hidróxido de calcio y bario, se evaluaron las actividades de la
deshidrogenasa láctica y la fosfatasa alcalina. Las mandíbulas
de los terneros de la vid se obtuvieron del abat toir local y
se transportaron en hielo al laboratorio donde se
molares fueron extirpados. Las pulpas se cosecharon expe
damente, picados en trozos de aproximadamente 1 mm3 y
congelados. Tras la descongelación, se pesaron alícuotas
(aproximadamente
0,5 g} se incubaron durante 1 hora a 23°C en un agitador
recíproco en una de las siguientes soluciones 1: 0,02 M
de Ca(OH)2 saturado, pH 12,0;
2: 0,02 M de Ca(OH)2, pH
 Efectos del hidróxido de calcio 157 uniforme. Las muestras se electroforizaron en geles de
acrilamida al 7,5% (11} y se visualizaron mediante tinción
10 ml de tampón apropiado para el ensayo enzimático. Se con azul de Coomassie para los supernadantes liofilizados
utilizó Tris HCI (0,2 M, pH 7,3) para el ensayo de o con plata para los supernadantes no liofilizados. Se
deshidrogenasa láctica y AMP 0,62 M (pH 10,2) para el examinaron los supatantes no liofilizados para garantizar
ensayo de fosfatasa alcalina. Los homogeneizados se que la liofilización no contribuyera a la desnaturalización
centrifugaron durante 10 minutos a 300 rpm en una de las proteínas tratadas.
centrífuga clínica IEC (Inter national Equipment Co.,
Needham, MA}, y los su pemantes se guardaron para su uso
posterior.
Para el análisis de la actividad de la deshidrogenasa
láctica, se añadieron 50 µI del sobrenadante a cubetas que
contenían
2,8 ml de Tris-HCI 0,2 M, 1,0 ml de NADH 6,6 mM y
0,1 ml de piruvato sódico 30 mM. La mezcla de reacción
se agitó durante 10 s. El cambio en la absorbencia por
minuto se midió
espectrofotométricamente a 345 nm a temperatura
ambiente. Las actividades se calcularon como unidades
de actividad por miligramo de peso
húmedo (unidad de actividad = oxidación de 1 µmol
de NADH/min), y un
Se calcularon la media y el error estándar de la media para
cuatro muestras de cada grupo.
Para el análisis de la actividad de la fosfatasa alcalina,
se añadieron 100 µI del sobrenadante del homogeneizado
a 2 ml del tampón de ensayo (400 ml de AMP:1 ml de 1,0
MgCl2 :1,0 ml de 0,003 mM de p- nitrofenilfosfato}.
Después de agitar durante 10 s, se midió el cambio de
absorbancia por espectrofotometría a 410 nm a
temperatura ambiente. Las actividades se calcularon como
unidades de actividad por mili
gramo de peso húmedo (unidad de actividad =
hidrólisis de 1
µmol de sustrato/min), y se calculó la media y el
error estándar de la media para cuatro muestras de cada
grupo.

Análisis electroforético

Para determinar si la proteína de la pulpa fue alterada

por el tratamiento con Ca(OH)2 o Ba(OH)2, se analizó la
proteína mediante electroforesis en gel de dodecil sulfato
de sodio y poliacrilamida. La pulpa picada se incubó
durante 1 hora a temperatura ambiente en una de las
siguientes soluciones 1:
0,02 M Ca(OH)2, pH 12,0; 2: 0,1 M Ba(OH)2, pH 12,3;
¡3: 0,02 M Ba(OH)2, pH 12,1; y 4: 0,06 M Ba(OH):!
pH 12,2. Los tejidos no incubados y tratados con
solución salina sirvieron de control.
Tras la incubación, se decantaron los supemantes y se
lavó la pulpa residual, para después homogeneizarla en
Tris-HCI 0,2 M (pH 7,3). Los homogeneizados se
centrifugaron durante 10 minutos a 300 rpm y los
sobrenadantes se decantaron y se liofilizaron o se
almacenaron sin liofilizar a -20°C. La concentración de
proteínas se determinó según el ensayo de Bradford (10).
Antes de la electroforesis, las muestras liofilizadas se
resolvieron en tampón de muestra a concentraciones
adecuadas para asegurar un tamaño de muestra
 Vol. 11, No. 4, abril de 1985
La pulpa tratada con hidróxido de calcio mostró
movilidades electroforéticas prácticamente idénticas a las
proteínas solubles de los tejidos tratados con solución
salina. Cuando la pulpa fue sometida a hidróxido de bario
saturado, la posición de las proteínas solubles se modificó
significativamente. Varias de las principales bandas de elec
troforesis en gel de dodecil sulfato de sodio-poliacrilamida
estaban ausentes, y gran parte de la proteína permanecía en
el origen. La disminución de las concentraciones de
hidróxido de bario produjo menos alteraciones en el
comportamiento de la proteína soluble en los geles.
(5).
Nuestros datos sugieren que el papel del calcio puede ser
mucho más indirecto, en el sentido de que puede servir sólo
como el catión que limita la solubilidad de su com binación
de hidróxido. El pH de una solución de sal de hidróxido es
una función de su solubilidad y de su constante de
ionización, es decir, de su pro piedad para disociarse en
cationes de carga positiva y

DISCUSIÓN

Los resultados de esta investigación permiten

comprender la toxicidad del hidróxido de calcio saturado,
tal como se ha demostrado en anteriores estudios
histológicos y de cultivo de tejidos (12, 13). Aunque el
hidróxido de calcio se aplica al tejido pulpar para inducir la
dentina reparadora, el efecto inmediato es la necrosis
localizada (14). Se ha postulado que la alta alcalinidad es la
causa de la muerte celular, y la inhibición de la actividad
enzimática determinada en este estudio ofrece una
explicación parcial de este fenómeno. Aparentemente, los
iones de calcio tienen poco papel en este sentido, ya que las
distintas soluciones equimolares de hidróxido de calcio
difieren en su efecto, siendo las soluciones con un pH más
bajo menos eficaces para deprimir la actividad enzimática.
Además, el tratamiento con 0,01 M Ca(OH)2 a pH 11,9 no
produjo una inhibición de la actividad enzimática
significativamente menor que el tratamiento con 0,02 M
Ca(OH)2 a pH 12,0.
Sin embargo, el calcio puede desempeñar un papel en la
inducción de
procesos de cicatrización por debajo del tejido pulpar
desvitalizado. El papel más obvio del hidróxido de calcio
parecería ser el suministro de calcio para el puente
dentinario; sin embargo, el trabajo de Pisanti y Sciaky (4)
sugiere que esto no ocurre. Glass y Zander
(3) postularon que los iones de calcio podrían combinarse
con las proteínas de manera que se forme una barrera entre
el tejido muerto y el viable. Los odontoblastos podrían
entonces encontrar la matriz de proteinato de calcio
adecuada para la alineación y posterior dentinogénesis.
Holland et al. (5) han sugerido que se crea una barrera
cristalina. Su análisis histoquímico de la pulpa dental
tratada con hidróxido de calcio reveló que se formaron
cristales de carbonato de calcio durante la reacción del
dióxido de carbono del tejido con el calcio del material de
recubrimiento. Supuestamente, estos cristales se incorporan
a la capa superficial del puente dentinario, actuando como
una capa favorable para la diferenciación odontoblástica y
la deposición de dentina. Sin embargo, los preparados de
bario y estroncio también crean sus respectivos carbonatos
cuando se aplican al tejido pulpar, pero ninguno de ellos es
eficaz para inducir la formación de dentina
 Efectos del hidróxido de calcio 159
actividades más altas en el tejido tratado a este pH.
grupos hidroxilos cargados negativamente. Por tanto, la Nuestros datos no muestran que el hidróxido de calcio
moeidad del catión determina la alcalinidad final del tenga ninguna propiedad especial, salvo un efecto
compuesto. Por ejemplo, el hidróxido de calcio y el inespecífico del pH. Los resultados clínicos obtenidos con
hidróxido de bario son sólo moderadamente solubles en este compuesto pueden reflejar la cicatrización favorecida
comparación con el hidróxido de sodio o el hidróxido de por una zona estéril y mínima de necrosis y un pH elevado
potasio. Además del factor de solubilidad, el NaOH y el pero no perjudicial en el entorno local. Posiblemente el
KOH se disocian casi por completo; en consecuencia, las calcio favorezca el proceso al disminuir la solubilidad del
soluciones saturadas de estos compuestos presentan un pH hidróxido, reduciendo así su toxicidad. Pruebas in vivo
muy elevado de 14. En cambio, los valores de pH del
Ca(OH)2 saturado y del
Ba(OH)2 son 12,0 y 12,3, respectivamente, lo que indica
una
Una concentración 100 veces menor de iones hidroxilo
libres. Así, la menor concentración limita tanto la
cantidad de Ca(OH)2 que puede difundirse en el tejido
como el grado de alcalinidad de la solución.
La evidencia de que el hidróxido de calcio puede tener
un impacto óptimo en los tejidos vivos en virtud de su
limitada solubilidad y concentración de iones hidroxilo,
propiedades que aparentemente evitan la
desnaturalización de las proteínas de la pulpa, se
encuentra en el patrón electroforético exhibido por los
tejidos pulpares tratados. El hidróxido de calcio saturado
apenas modificó la estructura terciaria de las proteínas, ya
que las movilidades electroforéticas fueron muy similares
a las de las proteínas de la pulpa incubada en solución
salina. Sin embargo, el hidróxido de bario saturado, que es
más soluble que el hidróxido de calcio, debe
desnaturalizar profundamente las proteínas, como lo
demuestra la alteración del patrón de separación. Cuando
la molaridad del hidróxido de bario se redujo a la del
hidróxido de calcio saturado, su efecto sobre las proteínas
fue comparable. Esto sugiere que el fracaso de los
hidróxidos no cálcicos in vivo puede atribuirse a un
simple efecto de concentración.
Aunque se ha atribuido al hidróxido de calcio una
propiedad general de inducción de tejido duro (15), las
pruebas de formación de hueso en lugares ectópicos bajo
su influencia nunca han sido del todo convincentes (16).
El hidróxido de calcio puede permitir la cicatrización de la
pulpa porque posee propiedades antibacterianas (17), y el
pH alcalino cerca de su punto de aplicación puede
favorecer la actividad de la fosfatasa de línea alfa de las
células viables adyacentes. Un estudio en el que se aplicó
fosfatasa alcalina purificada a las pulpas expuestas, que
dio lugar a la diferenciación de las células precursoras en
odontoblastos y a la elaboración de la matriz de la
dentina, apoya esta última teoría (18). Nuestros resultados
también sugieren la importancia de un entorno
ligeramente alcalino, ya que la actividad de la
deshidrogenasa láctica fue estadísticamente mayor tras el
tratamiento a pH 10,2 que a 7,2. No es de extrañar que la
fosfatasa alcalina, que tiene un pH óptimo de 10,2,
presentara
160 Gordon et al.
de otros hidróxidos a concentraciones reducidas
puede
proporcionan pruebas de este postulado.
RESUMEN Y CONCLUSIONES
El tejido pulpar bovino se trató con soluciones de
hidróxido de calcio y de bario y luego se examinó la
actividad enzimática residual y la modificación de las
proteínas solubles. El calcio saturado y el hidróxido de
bario inhibieron por completo la actividad de la fosfatasa
alcalina y la dehidrogenasa láctica, pero las preparaciones
de hidróxido de calcio a niveles de pH más bajos fueron
mucho menos inhibitorias. La electroforesis en gel reveló
que las proteínas constituyentes de la pulpa tratada con
solución salina y con calcio eran prácticamente idénticas,
pero que el hidróxido de bario saturado alteraba
drásticamente el patrón de bandas. Cuando el tejido
pulpar se incuía en esta última solución, preparada con la
misma mo laridad de hidróxido de calcio, el efecto sobre las
proteínas era comparable. Estos datos sugieren que el
hidróxido de calcio ejerce un efecto inespecífico del pH que
no es excesivamente tóxico en virtud de su baja solubilidad.
Este estudio fue apoyado por la subvención OR 005 de los Fondos de Investigación
Organizada del Estado.
El Dr. Gordon es profesor adjunto del Departamento de Endodoncia del Centro de
Ciencias de la Salud de la Universidad de Texas en San Antonio, San Antonio, TX. El
Dr. Ranly es profesor del Departamento de Odontología Pediátrica del Centro de
Ciencias de la Salud de Texas en San Antonio. El Dr. Boyan es profesor asociado
de los Departamentos de Periodoncia y Bioquímica del Centro de Ciencias de la Salud
de Texas en San Antonio.
JoumatofEndodontica
Referenciaa
1. Herman BW. Dentinobfiteration der WU "Zelkanale nach der
behandlung mit kalcium. Zahnaerztl Rundsch 1930;39:888-9.
2. Zander HA. Reacción de la pulpa al hidróxido de calcio. J Dent Res
1939;18:373-9.
3. Glass RL, Zander HA. Curación de la pulpa. J Dent Res 1949;28:97-107.
4. Pisanti S, Sciaky I. Origen del calcio en la pared de reparación tras la
exposición pulpar en el perro. J Dent Res 1964;43:641-4.
5. Holland R, Pinheiro CE, De MelloW, NeryMJ, De Souza V. Análisis
histoquímico de la pulpa dental de los perros tras el recubrimiento pulpar con
hidróxidos de calcio, bario y estroncio. J Endodon 1982;8:444-7.
6. Seltzers, Bender IB. The dental pup. 2nd ed. Philadelphia: JB Lippincott
Co., 1975:252-69.
7. Seltzer S, Bender IB. Algunas influencias que afectan a la reparación del
cachorro de los dientes de los perros. J Dent Res 1958;37:678-87.
8. Svejda J. Gewebsreaktionen der pupa bei direkten uberkappung an
mensch LOO tier. Deutsch Zahn-Mund-Kieferheilk 1964;41:433-45.
9. Smith JW, Leeb kl, Tomey DL. A comparison of calcium hydroxide and
barium hydroxide as agents for inducing apical closure. J Endodon 1984;10:64- 70.
10. Bradford MM. A rapid and sensitive method for the quantitation of
microgram quantities of protein utiizing the principle of protei'l-dye binding. Anal
Biochem 1976;72:248-54.
11. Laemmli U, Favre M. Maturación de la cabeza del bacteriófago T4. J
Mel Biol 1973;80:575--99.
12. Stanley HR, Lundy T. Terapia Dycal para la exposición pulpar. Oral Surg
1972;34:818-27.
13. Kawamara H, Yamagami A, Nakamura M. Pruebas biológicas de
materiales mediante cultivo de tejidos. Int Dent J 1968;18:443-67.
14. Schroder U, Granath LE. Early reaction of intact human teeth to calc:illl!
hydroxide folowing experimental pulpotomy and its significance to the devel opment
of hard tissue barrier. Odontol Rev 1971;22:379-96.
15. Mitchell OF, Shankwalker GB. Potencial osteogénico del hidróxido de calcio
y otros materiales en heridas de tejidos blandos y huesos. J Dent Res 1958;37:1157-
63.
16. Rasmussen P, Mjor IA. El hidróxido de calcio como inductor óseo
ectópico
en ratas. Scand J Dent Res 1971;79:24-30.
17. Spangberg L, Engstrom B, Langelmld K. Efectos biológicos de los
materiales dentales. Ill. Toxicidad y efectos antimicrobianos de los antisépticos
endodónticos in vitro. Oral Surg 1973;36:856-71.
18. Atalla MN, Noujaim AA. Role of calcium hydroxide in the fonnation ol
dentina reparadora. Can Dent Assoc J 1969;35:267-9.