UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA BIOLÓGICA

PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK

EXPERIENCIA EDUCATIVA: Laboratorio de Bioquímica CATEDRÁTICO: MTRA. LAURA MARTÍNEZ MÁRQUEZ INTEGRANTES: LUIS ALFREDO RODRÍGUEZ BLANCO JULIO VICENTE SERNA

XALAPA, VER A 9 DE MARZO DEL 2012

los ácidos débiles no. Material y reactivos: Material de laboratorio Vasos de precipitados de 100m\ Vasos de precipitados de 150ml Pipeta graduada de 1mi Bureta Agitador magnético . Los aminoácidos y las proteínas sirven de amortiguadores y pueden resistir a cambios de acidez y de alcalinidad. Los ácidos fuertes se disocian por completo. el pK.PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK Objetivo: Que el alumno realice una curva de titulación de aminoácidos y a partir de ella determine el pK y el pH en el que se encuentra su poder amortiguador. Fundamento: Los ácidos difieren en el grado en que se disocian en agua. La probabilidad de que un ácido se disocie se define por su constante de disociación. Kd: Kd= [H+][A]/ [HA] Debido a que las formas protonada y no protonada tienen propiedades biológicas diferentes. es importante poder predecir el grado de disociación de un ácido a cualquier pH. pK= -log kd Ahora. es posible usar la ecuación de Henderson-Hasselbalch para predecir el grado de disociación del medio: pK= pH + log [A]/[HA] Los aminoácidos tienen un grupo amino que les permite actuar como base y combinarse con ácidos y un grupo carboxilo les permite combinarse con bases. Es conveniente modificar la expresión de Kd en una forma análoga al pH.

Ponga 20ml de la solución de glicina en un vaso de precipitado de 100ml. 1.en 50mmoles. 4.B. Localiza en la grafica los diferentes pK de los aminoácidos. Repita el paso 3 hasta llegar a un pH de 12 aproximadamente. en una unidad de pH: C.0 Ácido aspártico 0. Haga una gráfica de pH contra volumen en mI de NaOH gastados luego de tomar en cuenta que cada 0.0 Lisina 0.1 ml de NaOH 1. Proceda a la medición del pH 3. Identifica a que pH tienen poder amortiguador Determinación de la capacidad buffer La capacidad buffer es la cantidad de base fuerte requerida para alterar el pH de la disolución reguladora. Añada 0.025M pH 2.= db/ dpH Siendo dpH el incremento de pH resultante de la adición de un volumen db de base. Agitar el vaso y volver a medir el pH anotando los resultados. 6. 2.025M pH 2.0M. 5. Haga lo mismo (pasos del 1 a 4) para los otros aminoácidos.025M pH 2.1 ml de NaOH diluido en 20ml aumenta la concentración de OH.PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK Reactivos Glicina 0. .0 NaOH 1M Equipo Potenciómetro Procedimiento: Determinación de pKa. 7. 8.

. introduzca los electrodos del potenciómetro y disponga una bureta con disolución de NaOH 1N Y un agitador magnético. dentro del vaso.PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK 1. Repita las adiciones de base. 2. hasta obtener por lo menos cinco lecturas. Anote el pH resultante. Ponga el agitador en marcha sin que este golpee los electrodos. Ponga su disolución en un vaso. Determine el pH inicial. Hipótesis: Los valores de pH deberían ir en aumento conforme se van agregando las cantidades de hidróxido de sodio a los diferentes aminoácidos partiendo del pH de cada uno de estos hasta llegar a un pH de 12 para cada uno de estos. y agregue un volumen de NaOH 1N medido exactamente en la bureta (1 ml). Los valores obtenidos deberán arrojar valores que al momento de graficar nos dará una curva que va en aumento de manera directamente proporcional al aumento de pH sobre el aumento de la cantidad agregada de hidróxido de sodio. en volúmenes iguales (1ml) y anote los valores de pH correspondientes.

11 ml de NaOH agregados .2 Glicina pH inicial 7.65 9.35 9.1 .1 .2 .85 12.79 9.1 .1 .3 .1 .1 .08 9.85 11.44 9.62 4.21 ml de NaOH agregados .43 10.03 pH obtenido 9.2 .52 9.95 9.05 10.2 .03 9.78 10.75 10.2 .2 .2 .2 .1 .1 .62 12.3 .58 8.1 Lisina pH inicial 9.85 9.1 .79 8.08 ml de NaOH agregados .PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK Hoja de reporte 1.26 9.07 10.55 9.1 .69 9.1 .2 .2 .90 10.00 pH obtenido 8.84 .4 .2 .1 pH obtenido 3.28 11.5 .98 11.1 . Determinación de pka: Acido aspártico pH inicial 3.

08 14 12 10 pH obtenido 8 6 4 2 0 1 2 3 4 5 6 7 8 NaOH agregado (ml) NaOH agregados (ML) pH obtenido . Realice una grafica de los resultados (pH contra ml de NaOH gastados) Acido aspártico pH inicial 3.1 .1 .3 .3 .69 11.1 .PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK .81 12.3 9.3 .19 10.1 .26 10.60 11.0 2.2 .32 11.15 10.04 10.1 .94 10.

21 14 12 pH Obtenido 10 8 6 4 2 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 NaOH agregados (ml) pH obtenido ml de NaOH agregados Glicina pH inicial 7.PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK Lisina pH inicial 9.11 14 12 pH Obtenido 10 8 6 4 2 0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 NaOH agregado (ml) pH obtenido ml de NaOH agregados .

9/. ante cambios de la concentración de alguna de las especies o incluso ante la acción de un catalizador.45 pK= 12.92 4. dependen de otras variables.49 pK= 11.85 Lisina pH=10. .32 pK= 12. Determine la capacidad buffer Acido aspártico 1. mantiene su valor a la misma temperatura.98 Glicina pH=10. la constante de disociación cambia a temperaturas diferentes. que es más fuerte cuanto mayor es su pKa. Calcule el pK y el pH en el cual se encuentra la máxima capacidad amortiguadora. después de agregar determinada cantidad de NaOH se puede observar que el pH se dispara de manera considerable es por eso que las cantidades agregadas de NaOH se controlan y son muy pocas ya que si se agrega demasiado se puede sobrepasar el valor de pH que se espera obtener. Esas constantes de disociación no son fijas. la fortaleza del ácido aumenta.PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK 3. a medida que el pKa decrece.90= 2.1 Discusión de resultados: Al agregar las cantidades en ml de NaOH se puede observar que se llega a un momento donde el cambio del pH no es muy significativo. Sin embargo. Acido aspártico pH= 10.40= 3 Glicina 1.8 Lisina 1.8/1= 1. es decir se mantiene un tanto constante dentro de un rango.2/. que permite ver de una manera sencilla en cambios pequeños de pKa los cambios asociados a variaciones grandes de Ka. Por ejemplo. Valores pequeños de pKa equivalen a valores grandes de Ka (constante de disociación) y. Un ácido será más fuerte cuanto menor es su pKa y en una base ocurre al revés. Conclusión: Una forma conveniente de expresar la relativa fortaleza de un ácido es mediante el valor de su pKa.

esto es debido la presencia del grupo carboxílico que tiene carácter ácido y del grupo amino que tiene carácter básico. ¿Por qué los aminoácidos actúan como reguladores del pH? R= Los aminoácidos son sustancias anfóteras. Cuando están en disolución acuosa con pH próximo a la neutralidad los aminoácidos están ionizados formando iones dipolares o híbridos. aumenta la concentración de H+. de fórmula (HOCH2)3CNH2. ya que se comportan como ácidos o bases según convenga al organismo. libera protones y se carga negativamente. Tris es el nombre abreviado del compuesto orgánico conocido como tris(hidroximetil)aminometano. CAPS.06. El aminoácido tiende a neutralizar la basicidad.5 b) Ácido láctico pK= 3. El aminoácido tiende a neutralizar la acidez captando H+ y se carga positivamente. En algunos aminoácidos en las cadenas laterales existen otros grupos aminos (básicos) y carboxílicos (ácidos) que también se ionizan.0 y 9. El Tris tiene un pKa de 8. Si aumenta el pH el medio se hace básico.20 f) Ácido carbónico pK= 6. disminuye la concentración H+.2. se comporta como base.35 Indique el nombre completo. lo que le aporta capacidad tamponante efectiva en un intervalo de pH entre 7. el medio se hace ácido. pKa y peso molecular (o formula) de los siguientes compuestos usados como reguladores de pH en bioquímica: TRIS. .5 c) Ácido benzoico pK=4.20 d) Ácido oxálico pK= 1. el pH en el que un aminoácido forma un ión híbrido se denomina punto isoeléctrico (PI).PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK Cuestionario: Indica el pKa de los siguientes ácidos: a) Ácido pirúvico pK= 3. MES. se comporta como un ácido. Disminuye el pH. esto quiere decir que en disolución acuosa se pueden comportar como ácidos y como bases dependiendo del pH de la disolución.19 e) Ácido succínico pK= 4. El grupo carboxílico pierde un protón (actúa como ácido) y el grupo amino gana un protón (actúa como base). El carácter anfótero de los aminoácidos permite la regulación del pH. TES Y tricita.

que se halla en elevadas concentraciones en el cerebro de pacientes afectados de hiperglicinemia no cetósica (NKH). lo que implica daño oxidativo en lípidos. Objetivos: Hemos investigado los efectos de la administración in vivo en el estriado de glicina (Gly). en términos químicos. glutatión reductasa. (2009). (2a edición). es decir. Bibliografía: Horton Robert H. Moran. Nelson. Raymonds S. David Rawn J. Lawrence A. después de la inyección de glicina. superóxido dismutasa y glucosa 6-fosfato deshidrogenasa (defensas antioxidantes). contenido de grupos sulfidrilo. Resultados clave: La administración de Gly aumenta significativamente los valores de TBA-RS. sobre parámetros importantes de estrés oxidativo. concentración de glutatión reducido. que puede oponerse a grandes cambios de pH (en un margen concreto) en una disolución acuosa. ARTICULO La administración de glicina en el estriado induce daño oxidativo en lípidos y proteínas y altera las defensas antioxidantes en el cerebro de ratón. Ochs. Métodos principales: Se han medido en el estriado de ratas de 30 días de edad los valores de sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBA-RS. Define ¿Qué es la capacidad buffer? Un buffer o Tampón químico. Cox. Principies of Biochemistry. Además. que valoran la peroxidación lipídica).PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK 5. Michael M. lo que indica .. España: Omega. producción de óxido nítrico y actividad de las enzimas antioxidantes glutatión peroxidasa. fomación de grupos carbonilo ( expresión del daño oxidativo en proteínas).USA: Prentiee-Hall.\Scrirngeour Gray K (1996). David L. Principios de Bioquímica (4a Edición) Barcelona. catalasa. también es un sistema constituido por un ácido débil y su base conjugada o por una base y su ácido conjugado que tiene capacidad "tamponante". este aumento se puede prevenir totalmente mediante el antagonista MK-801 del receptor de NMDA.

Amaral AU. Universidade Federal do Rio Grande do Sul. 2011 Aug 15. Eichler P.PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK la implicación del receptor de glutamato NMDA en este efecto.89(7-8):276-81. da Rosa MS. Por el contrario. Seminotti B. Fernandes CG. contenido de sulfidrilos. así como la elevación de las actividades de glutatión peroxidasa. induce la oxidación proteica y modula las actividades de importantes enzimas antioxidantes en el estriado. Life Sci. Brazil. probablemente secundaria a la estimulación de NMDA. Porto Alegre. Wajner M. producción de óxido nítrico y actividad de glucosa 6-fosfato deshidrogenasa no se modifican por la Gly. es posible que el estrés oxidativo pueda estar implicado en la fisiopatología del daño cerebral observado en pacientes con esta enfermedad neurológica. los niveles de glutatión. Instituto de Ciências Básicas da Saúde. Lycine intrastriatal administration induces lipid and protein oxidative damage and alters the enzymatic antioxidant defenses in rat brain. Significado: Estos datos muestran que la administración de Gly in vivo causa peroxidación lipídica. En el caso de que estos hallazgos se puedan extrapolar a la NKH humana. La inyección de Gly también induce la formación de carbonilos de las proteínas. RS. Departamento de Bioquímica. . glutatión reductasa. Knebel LA. catalasa y superóxido dismutasa. Leipnitz G.

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