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Curvas de Titulación de Aminoácidos

Curvas de Titulación de Aminoácidos

Guadalupe A. Abreu Hernández.

Objetivos. a) Determinar el comportamiento de un ácido
fuerte y uno débil al titularse con una base fuerte.
b) Comprobar el carácter anfotérico de los aminoácidos.
c) Comprobar la estructura de ion dipolar de los
aminoácidos.
INTRODUCCIÓN.
presentar una buena capacidad amortiguadora de cambios
de pH. La relación cuantitativa entre pH, la acción
tamponante de una mezcla de ácido débil con su base
conjugada, y el pKadel ácido débil viene dada por la
ecuación de Henderson-Hasselbach, que se anuncia a
continuación en su forma más general:

Los ácidos clorhídrico, sulfúrico y nítrico, (ácidos fuertes),

están completamente ionizados en soluciones acuosas
diluidas; al igual que las bases fuertes NaOH y KOH. Los La estructura general de los aminoácidos presentes en las
bioquímicos están frecuentemente más interesados en el proteínas, es la siguiente:
comportamiento de los ácidos y bases débiles, que son los
que están parcialmente ionizados al disolverse en el agua.
Un dador protónico y su correspondiente aceptor forman
un par ácido-base conjugados. Cada ácido tiene una
tendencia característica a perder su protón en solución
acuosa. Cuanto más fuerte sea el ácido mayor será la
tendencia a perder el protón. La tendencia de cualquier
ácido (HA) a perder un protón y formar su base conjugada Con excepción de la naturaleza del grupo R, esta estructura
(A-) se define mediante una constante de equilibrio (K) es común a todos los aminoácidos, y el más sencillo de
para la reacción reversible: éstos es la glicina:

Las constantes de disociación de los ácidos (constantes de

equilibrio) son a menudo designadas como K a. Los ácidos
más fuertes como el fórmico y el láctico, tienen constantes Los aminoácidos en solución acuosa están ionizados y
de disociación más altas; el pKa es análogo al pH y se pueden actuar como ácidos o como bases. El conocimiento
define mediante las ecuaciones: de las propiedades ácido-base de los aminoácidos es muy
importante para comprender las propiedades físicas y
1 biológicas de las proteínas. Además las tecnologías de
pH = -log [H+] ; pKa = log = -log Ka separación, identificación y cuantificación de los diferentes
Ka aminoácidos se basan en estas propiedades. La estructura
que se muestra anteriormente de la glicina, es su forma no
La titulación se utiliza para determinar la cantidad de un iónica, pero a pH neutro predomina su estructura
ácido en una solución, se titula un volumen determinado de zwitteriónica, que es la siguiente:
ácido con una solución de una base fuerte, normalmente
NaOH, de concentración conocida. El NaOH se añade en
pequeñas porciones hasta que se ha consumido
(neutralizado) el ácido según se determina mediante un
colorante indicador o un pHmetro. Al graficar el pH frente
a la cantidad de NaOH añadido, obtenemos la curva de
titulación. En el punto medio de la titulación las
concentraciones del dador de protones y del aceptor de Los aminoácidos tienen curvas de titulación características.
protones son iguales, en este punto el pH es numéricamente
igual al pKa. El rasgo más importante de la curva de
titulación de un ácido débil es que muestra gráficamente
que un ácido débil y su anión, un par ácido-base
conjugados, pueden actuar como tampones, es decir,

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Curvas de Titulación de Aminoácidos

RESULTADOS

pKa Glicina: 2.25, pKbGlicina: 9.71; pKa Glicina(Reportado en la literatura):2.34, pKbGlicina (Literatura):9.6. pK CH3COOH:
4.6; pK CH3COOH (Literatura):4.76. pI: 5.98; pI (Literatura): 5.97.

ANÁLISIS DE RESULTADOS Ahora bien, a la mitad de nuestra titulación, la cantidad de

ácido acético y su sal conjugada con la que contamos, es la
Al graficar los datos de pH obtenidos experimentalmente, misma, a este punto lo llamamos punto de equivalencia,
construimos la curva de titulación del HCL y del usando la ecuación de Henderson-Hasselbach:
CH3COOH, el primero un ácido fuerte y el segundo uno
débil, (Ver grafica 1 anexa) ambos titulados con una base
fuerte (NaOH) y lo que observamos es que en el HCl el
valor de pH se mantiene casi constante hasta llegar a la
mitad de la titulación, donde sube bruscamente hacia su pH
neutro. En el caso del CH 3COOH al ser titulado con NaOH
observamos en nuestra curva de titulación cambios bruscos
al inicio y al final de la valoración, mientras que en la parte
media el pH casi no varía, entonces decimos que esta zona
presenta una buena capacidad amortiguadora ante cambios Obtenemos:
de pH, o es un tampón. Sabemos que el HCl es un ácido
fuerte, mientras que el CH3COOH es un ácido débil, el que pH = pK;
sea un ácido fuerte nos indica que se disocia totalmente,
pero un ácido débil sólo se disocia parcialmente, para Por lo que decimos que el pK es el pH cuando la
calcular cuantitativamente la proporción en que lo hace, concentración de ácido y su base conjugada son las
nos ayuda la constante de disociación o K d. La cual se mismas, interpolando en la grafica, el punto de
expresa como el cociente de productos sobre reactivos, en equivalencia, obtuvimos un pK de 4.6. Y utilizando la
el caso del CH3COOH, el cual empleamos: fórmula:

pK = -log Kd.
Kd = 10 -4.6
Kd = 2.511 x 10-5

Este fue el valor de constante de disociación del ácido

acético que obtuvimos experimentalmente.

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En la Grafica 2, se observan las titulaciones de la Glicina, pH = pKa + log [HCO3-]

con HCl y NaOH, en las cuales las curvas que obtuvimos [H2CO3]
están invertidas una respecto a la otra, con esto
comprobamos el carácter anfotérico de los aminoácidos 7.4-6.4 = log [HCO3-]
pues nos indica que el grupo amino en estado ionizado (- [H2CO3]
NH3+) se comporta como ácido y el carboxilo en estado
ionizado se comporta como base. Además al agregar [HCO3-] 101 10
formol neutro (CH2O) a la glicina la curva de titulación con [H2CO3]
HCl no varía apreciablemente, mientras que en la curva de
titulación con NaOH sí se observa un gran cambio, esto Por lo que en este sistema, la concentración de sal
porque al titular con una base fuerte, el grupo amino pasa conjugada debe ser 10 veces mayor a la del ácido, esto nos
de ser una amina secundaria a una terciaria (se vuelve más indica que hay una mayor capacidad de regular sustancias
ácido) ácidas en nuestra sangre.

El pH al cual la glicina se encuentran en su forma 2. Investigar la estructura del ácido glutámico, sus
zwitteriónica, es conocido como punto isoeléctrico pI, el estructuras ionizables, valores de pK para cada
cual se calcula mediante la ecuación: una, su curva de titulación y su curva de
titulación con formol.

Y nuestro valor de punto isoeléctrico obtenido

experimentalmente fue:

pI = 2.25 + 9.7
2

pI= 5.98

*El pKa lo obtuvimos al interpolar en la grafica el pH a la

mitad de la titulación de la glicina con HCl y el pKb al
interpolar el pH a la mitad de la titulación con NaOH.

CONCLUSIONES

Esta práctica, aunque su desarrollo fue sencillo, nos deja

conocimientos amplios, sobre todo las curvas de titulación,
que son herramientas muy poderosas, ya que a través de
éstas pudimos determinar, por ejemplo, el pKa, el pKb, y
por medio de éstos, el punto isoeléctrico de un aminoácido.

El conocer el comportamiento ácido-base de los

aminoácidos es de vital importancia, por ejemplo, para su
separación. Tabla 2. Valores de pK para las estructuras ionizables del Ácido
Glutamico.
Además esta práctica nos ayuda a entender las propiedades
de los aminoácidos, como su elevado punto de fusión, que Aminoácido pK1 pK2 pK3
podemos atribuir a su estructura de ión dipolar. (-COOH) (-NH3+) (R)

CUESTIONARIO Ác. glutámico 2.19 9.67 4.25

1. Investigar cuáles son los principales pares ácido-

base conjugados que se encargan de regular el
pH en el plasma sanguíneo. Investigar su pK. BIBLIOGRAFÍA

El sistema tampón del bicarbonato (H 2CO3 - HCO3-) es el Lehninger, Albert., Nelson, David L., Cox, Michael M.,
principal regulador del plasma sanguíneo. (1993) “Principios de Bioquímica”. Segunda Edición,
pH H2CO3= 3.8; pH HCO3- = 10.2; pKa= 6.4, pK Ediciones Omega, Barcelona, España
H2CO3=3.8; pK HCO3- = 10.2

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