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FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016

LABORATORIO DE BIOLOGÍA

UNIDAD
ACADEMICA: REGENCIA DE FARMACIA
CURSO: REGENCIA DE FARMACIA
PRACTICA N.º 01: CONOCIMIENTO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO

1. OBJETIVOS
• Conocer e identificar las partes del microscopio óptico
• Conocer los cuidados del microscopio para su buen manejo
• Realizar un montaje húmedo para ser observado al microscopio

2. CONSULTA PREVIA
1. ¿Qué es un microscopio?
2. Describa el uso de las partes mecánicas y ópticas del microscopio óptico.
3. ¿Cuáles son las clases de microscopios y para qué sirven?

3. FUNDAMENTO TEORICO
A fines del siglo XVI el holandés Zcharias Hannsen, construyo el primer microscopio, lo que llevo al
hombre a sondear el mundo de lo infinitamente pequeño. Más tarde Leeuwenhoek mejoro
considerablemente la técnica del pulido de los lentes, lo que permitió describir protozoos y bacterias.

Los microscopios ópticos surgieron al principio del siglo XX y hacia mediados de este llego el
microscopio electrónico ampliando el poder de observación visual. El ojo humano posee una
resolución de más o menos 0,1 mm (1 micrón= 0,001 mm), lo que implica que dos puntos están a
menos de 100 micrones de distancia se ven como un solo punto. La mayoría de las células
eucarióticas miden de 3 a 10 veces menos que el poder de resolución del ojo humano y las células
procarióticas son más pequeñas todavía.

Para identificar las estructuras celulares tenemos que apelar a instrumentos con una resolución
mayor como son: El microscopio óptico o de luz transmitida, el microscopio electrónico de transmisión
y el microscopio electrónico de barrido.

Tabla 1. Algunas unidades de uso frecuente en microscopia

METRO (m) MILIMETRO MICROMETRO NANÓMETRO ANGSTRÖM
(mm) (µm) (nm) (A0)
1 1x103 1 x 106 1 x 10-9 1 x 1010
0.001 1 1000 1000000 1 x 107
0.000001 0.001 1 1000 1 x 104
1 x 10-9 1 x 10-6 0.001 1 10
1 x 10-10 1 x 10-7 1 x 10-9 0.1 1

Actualmente, el microscopio electrónico ha permitido un aumento aproximadamente unas 100 veces,

es decir de micrones a milimicrones (1 milimicrón= 0,000001 mm = 10 Angstron), permitiendo un salto
de la anatomía microscópica a la ultramicroscópica, de la anatomía de la célula a la anatomía de las
partículas subcelulares.
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Los mejores microscopios ópticos tienen un poder de resolución de 0,2 micrometros, es decir 200
nanómetros, de modo que mejoran la visión simple unas 500 veces. Con el microscopio óptico se
distinguen las estructuras más grandes de las células eucarióticas y también células procarióticas
individuales.

El microscopio compuesto está constituido por dos sistemas ópticos. Uno es el objetivo, constituido
por una lente (o sistema de lentes) dispuestos del lado que se sitúa el objeto. El otro es el ocular,
constituido por una lente (o sistema de lentes) colocada del lado por donde se mira. La finalidad del
objetivo es siempre producir el objeto una primera imagen en ciertas condiciones de proximidad o
tamaño. Esta imagen funciona como objeto frente al ocular que da la imagen definitiva observada. El
microscopio compuesto es un instrumento destinado a da una imagen virtual y amplificada de un
objeto pequeño.

El objetivo está constituido por una lente convergente de corta distancia focal (mm) y el ocular es
también una lente convergente pero de distancia focal algo mayor (2cm). La distancia entre el objetivo
entre el ocular y el ocular es de unos 15 a 20 cm y es fija en casi todos los microscopios.

La distancia de trabajo o DISTANCIA FRONTAL de un objetivo es el espacio que existe entre la

superficie de la lente del objetivo y la lámina cubre-objeto, una vez se encuentra enfocada la
preparación. A mayor aumento del objetivo, la distancia de trabajo disminuye y se requiere una mayor
intensidad de luz.

Los objetivos en ningún momento deben tocar la preparación, ya que se puede romper la lámina,
dañar el objetivo, o estropear el microscopio.

PODER DE RESOLUCION

El poder de resolución se refiere a la capacidad de un sistema óptico de presentar dos puntos

próximos distintos o separados. Se especifica por la distancia mínima en que se logra resolver estos
dos puntos. Este depende a su vez de la longitud de onda ( ) y la apertura numérica del objetivo (NA);
en la mayoría de microscopios ópticos la longitud de onda generada por sus bombillos es de 600 nm
aproximadamente. El poder de resolución está dado por la expresión.

Poder de resolución = (Longitud de onda) / (2 x NA)

La apertura numérica está limitada a algo menos de 90°, pues esto pondría a la lente y al objeto en
contacto. En microscopios buenos en realidad es de unos 85°. Sin embargo, mientras esta resolución
permite visualizar una considerable cantidad de detalles en la mayoría de las células (con diámetro de
10 a 20 micrómetros), muchas estructuras aun no son observables; por ejemplo los ribosomas y las
fibras de cromatina no condensadas del núcleo, miden alrededor de 0,02 micrómetros de diámetro.

PODER DE AUMENTO

Es la capacidad que presenta un instrumento óptico de aumentar en forma aparente, el tamaño real
de un objeto dado. En el caso del microscopio es la capacidad que posee este de presentar
aumentados los objetos que se observan en él.

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En óptica se acostumbra a designar con una X el valor del aumento. Así cuando se hace referencia al
objetivo u ocular X, se quiere decir que si se observara un objeto con una de estas lentes
independientemente del sistema óptico local, la imagen de este objeto aparecerá 10 veces mayor. El
poder de aumento total (AT) de un microscopio compuesto, está dado por el producto de los poderes
de aumento del objetivo (Aob) y del ocular (Aoc) utilizados.

Ejemplo: si observamos una estructura con un objetivo de 40X y un ocular de 10X, el aumento total
seria:

AT= Aob. Aoc

AT= 40X. 10X = 400X

PODER DE DEFINICIÓN

Permite formar imagines claras contornos definidos.

PODER DE PROFUNDIDAD

Permite observar varios planos de la imagen con un mismo enfoque.

CARACTERISTICAS DEL ESTEREOSCOPIO.

El estereoscopio está previsto de dos oculares y dos objetivos, lo cual da como resultado una imagen
tridimensional durante la observación.

Los oculares proporcionan aumento entre 6.3 y 25X. Los objetivos están compuestos también por
lentes de diferentes aumentos 0.63 -4.0X que están en el interior y acoplados al botón de
magnificación. Este último es el botón que permite el cambio rápido de los lentes seleccionado los de
aumento más apropiado.

4. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

Equipos Materiales Sustancias y/o Reactivos

Portaobjetos
Cubreobjetos
Microscopio Gotero Verde de metilo – rojo
Estereoscopio Papel periódico neutro.
Hilo
Aguas estancadas

5. PROCEDIMIENTO O METODOLOGÍA
COMO ENFOCAR AL MICROSCOPIO

 Proceda a conectar el microscopio a la toma eléctrica

 Provéalo de una fuente de luz

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 Verifique que la luz esté pasando a través del condensador observando si la parte superior de
dicho sistema aparece iluminada cuando se mira a través del orificio de la platina, si esto no
ocurre accione el diafragma de tal manera que se obtenga la iluminación deseada (no olvide
graduar la cantidad de luz apropiada, recuerde que el condensador, el diafragma y la fuente de
luz cumplen papeles importantes en la regulación de estas)
 Coloque el micro preparado, sobre la platina y fíjela usando los dispositivos que para el efecto
posee un microscopio. La lamina o portaobjetos que desea observar no debe estar húmeda
por debajo. Mueva la placa hasta que la preparación a observar quede localizada en el centro
del orificio de la platina.
 Accione el revolver de tal forma que el objetivo de menor aumento quede en posición
perpendicular con relación a la placa.
 Baje el lente del objetivo cerca de la lámina observando externamente (no a través del ocular).
Ahora mientras usted mira a través del ocular enfoque despacio hacia arriba utilizando el
tornillo macrométrico, hasta que la imagen sea visible. Accione el tornillo micrométrico hasta
que la imagen aparezca clara.
 Si es necesario gradúe la intensidad con ayuda del diafragma y acercando o retirando el
condensador. Evite sobre-iluminación o sub-iluminación.
 Si después de seguir minuciosamente cada uno de los pasos descritos la imagen deseada en
el microscopio no aparece repita los pasos o acuda a su profesor.

EJERCICIOS

1. EJERCICIO PARA EL AUMENTO DEL TAMAÑO DE LAS IMÁGENES Y PODER DE

RESOLUCION

- Coloque sobre una lámina portaobjetos con un gotero, una gota de agua, a continuación
coloque una palabra impresa luego coloque el cubreobjetos, enfoque cada una de sus letras.
- En primer lugar observe la posición de la imagen, mueva la platina hacia la izquierda y la
derecha (o viceversa) y/o hacia adelante y hacia atrás. En segundo lugar observe en qué
sentido se mueve la imagen en cada uno de los movimientos de la cremallera.
- Observe una letra cualquiera a simple vista y luego al microscopio con los objetivos de 5X y
40X; esquematice lo observado en cada caso.

2. VISUALIZACIÓN DEL PODER DE DEFINICIÓN Y PROFUNDIDAD

- Siguiendo el anterior procedimiento monte ahora un filamento de hilo. Enfoque con los
objetivos de 5X y 40X e identifique la existencia de diferentes planos de profundidad,
manipulando exclusivamente el tornillo micrométrico hacia adelante y hacia atrás. Describa y
esquematice lo observado.

3. VISUALIZACION DEL MOVIMIENTO CELULAR

- Monte una gota de agua estancada y observe con los objetivos 10X y 40x. Esquematice lo
observado.

Nota: para obtener un mayor éxito en esta parte de la práctica es necesario llevar a cabo las
siguientes preparaciones:

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- Con una semana de anticipación recoja agua en dos frascos. En uno adicione hojas de
lechuga, acelgas y espinacas. Al otro frasco adicione estiércol seco de res. Manténgalos
destapados en un lugar fresco y sombreado.
- Tomar con un gotero una muestra de agua del fondo del frasco y colocar una gota sobre la
lámina portaobjetos. Adicione una gota de verde metilo, coloque un cubreobjetos. El exceso
de sobrenadante se seca con un papel toalla.
- Realice otro montaje, adicione una gota de agua y una gota de rojo neutro. Cubra y seque los
bordes de la lámina con papel toalla. Observe con 5X o 10X, si hay microorganismos,
identifíquelos, de lo contrario realice otro montaje.

4. OBSERVACION CON EL ESTEREOSCOPIO

- Tome un insecto y una hoja, obsérvelos en los diferentes aumentos, manipulando el ángulo de
incidencia de la luz. Identifique los detalles de sus estructuras. Elabore un diafragma de un
segmento y de la hoja en el mayor aumento.

6. RESULTADOS
CUESTIONARIO:

- Explique brevemente en qué consisten las aberraciones cromáticas y de esfericidad de las

lentes de ciertos microscopios. Utilice esquemas explicativos.
- ¿es posible observar preparaciones en vivo con el microscopio electrónico?
- Indique algunas diferencias entre un microscopio compuesto y un estereoscopio
Nota: completar la actividad que aparece después de la Bibliografía.

7. BIBLIOGRAFIA
Alberts, B., Bray , D., Hopkin, K., & et all. (2006). INTRODUCCIÓN A LA BIOLOGIA CELULAR
(Segunda ed.). España: Medica PanamericanaS.A.

Campbell, N., & Reece, J. (2007). BIOLOGIA (Septima ed.). Madrid, España: Medica Panamericana
S.A.

Curtis, H., & Schnek, A. (2008). BIOLOGIA (Septima ed.). España: Medica Panamericana.

Tortora, G., Funke, B., & Case, C. (2007). INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGIA (Novena ed.).
Argentina: Medica Panamericana.

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