Guia Nº02. Microscopia - Microbiologia Ambiental 2016 - I

UNIVERSIDAD MANUELA BELTRÁN
MACROPROCESO DE RECURSOS E INFRAESTRUCTURA ACADÉMICA

FORMATO PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO
Fecha: Abril de 2011 Código: GRL-006 Versión: 4.0
INFORMACIÓN BÁSICA
NOMBRE DE LA PRÁCTICA: Microscopía y recuento en cámara de Neubauer PRÁCTICA No. 2
ASIGNATURA: Microbiología Ambiental
TEMA DE LA PRÁCTICA: Conocimiento, uso y manejo adecuado del Microscopio.
LABORATORIO A UTILIZAR: Microbiología
CONTENIDO DE LA GUÍA
OBJETIVOS.
 Reconocer las diferentes partes que tiene el microscopio y determinar la función específica de cada una
de ellas.
 Adquirir habilidades en la manipulación del instrumento óptico, adecuando su uso en prácticas de
identificación microscópica y el recuento de algas en cámara de Neubauer.
 Aplica conceptos básicos en microscopía como poder de resolución, poder de aumento y campo visual.
INTRODUCCIÓN.
El microscopio además de aumentar la imagen de los objetos y hacer evidentes muchas cosas que a simple
vista no notaríamos, sirve para hacer mediciones de objetos y observaciones con un mayor detalle.
En la microscopia existen diferentes tipos de medidas que son el Amgstron, el nanómetro, y la micra, y sus
valores equivalentes son:
1 Amgstron Aº = 0.0000001 mm
1 Nanómetro nm = 0.000001 mm
1 Micra = 0.001 mm
1 Micra = 1000 milimicras
1 milimicra = 10 A°
MARCO TEORICO
El microscopio óptico está compuesto principalmente por tres partes: el sistema óptico, lumínico y mecánico.
Y cada uno de estos se compone de otros elementos como son:
1. SISTEMA ÓPTICO: es el conjunto de lentes que se encuentran en el microscopio y que tienen como
función principal ampliar la imagen del objeto observado.
a) Oculares: Están situados en el extremo superior del tubo, cerca del ojo del observador. Tienen como
función multiplicar el aumento logrado por el objetivo, el aumento que se logra con ellos se
representa por un número entero acompañado de una X. Los aumentos pueden ser de 4X, 6X, 8X, 9X,
10X y 12X.
b) Objetivos: Están ubicados en el extremo inferior del tubo en la pieza llamada "revólver" y son los que
están cerca del objeto que se va a observar. Los objetivos pueden ser "secos" o de "inmersión". Los
secos, se denominan así porque para usarlos no es necesario añadir ninguna sustancia entre ellos y la
preparación, sus aumentos pueden ser de 4X, 10X y 40X. Para los húmedos o de inmersión, es
necesario añadir una gota de aceite de cedro entre la preparación y el objetivo de tal manera que el
objetivo entre en contacto con el aceite ya que este evita que se desvíe la luz y se pierda la refracción,
el aumento suele ser de 100X.
2. SISTEMA DE ILUMINACIÓN: está constituido por las partes del microscopio, cuya función está relacionada
con la entrada de luz a través del aparato que ilumina la preparación. Está compuesto por:
a) Condensador: lente que concentra los rayos luminosos y los dirige hacia la preparación.
b) Diafragma: regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
c) Foco o lámpara: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
3. SISTEMA MECÁNICO: son las piezas que constituyen el microscopio en las cuales se encuentran
disponibles los lentes y el sistema de iluminación.
a) Tornillo macrométrico: permite realizar movimientos verticales grandes, es decir mueve el tubo de
arriba hacia abajo permitiendo un enfoque rápido, es un tornillo grande.
b) Tornillo micrométrico: permite realizar movimientos cortos, por lo cual sirve para afinar y precisar el
enfoque, el tornillo es pequeño y se encuentra sobre el macrométrico.
c) Revólver: estructura circular giratoria donde van enroscados los objetivos. Permite la colocación en
posición correcta del objetivo que se va a usar.
d) Platina: se utiliza para colocar la preparación u objeto que se va a observar, puede ser fija o giratoria,
tiene un hueco en el centro para dejar pasar los rayos luminosos.
e) Carro: dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la preparación de derecha a
izquierda y de atrás hacia delante.
f) Pinzas del portaobjeto: sirven para sostener la preparación.
g) Base o pie: es la estructura que se encuentra en la parte inferior del microscopio y que le sirve de
apoyo sobre una superficie.
h) Brazo: es la parte que une la base con la zona de los oculares. De esta parte se coge el microscopio
para su traslado de un lado a otro.
En la figura 1 encontrará la ubicación de las partes mencionadas anteriormente.
El microscopio, al desempeñar su función se le ha podido encontrar tres propiedades:
Poder separador.- Depende de la calidad del microscopio. Consiste en la capacidad de diferenciar dos
puntos muy próximos.
Claridad.- Es la nitidez con la que se observan las imágenes a través del microscopio y está relacionada
directamente con la cantidad de luz empleada para observar un objeto y con el sistema óptico utilizado.
Aumento del microscopio.- Consiste en la relación directa entre la imagen real y la que se obtiene por medio
del objetivo, es decir que si se amplía el aumento del objetivo, se obtendrá una imagen aumentada tantas
veces como aumentos tenga el objetivo.
Figura 1. Partes del microscopio
Fuente: https://asadijutt.wordpress.com/lab-tests/compound-microscope-parts/
CONCEPTOS BÁSICOS DE MICROSCOPIA
Poder de resolución
:
Es la capacidad que posee un instrumento óptico para diferenciar dos puntos que a simple vista parecen uno
solo, debido a la pequeña distancia que hay entre ellos. El poder de resolución del ojo humano es de 100
micras (u), el del microscopio compuesto es de 0.2 u y el del microscopio electrónico de 0.001 u. Lo anterior
significa que para que el ojo humano pueda diferenciar claramente dos puntos deben estar separados entre
sí por una distancia igual o mayor a 100 u.
Poder de aumento:
Es la capacidad que posee un instrumento óptico para dar una imagen aumentada de un objeto y depende
del tipo y calidad de las lentes utilizadas. Una lente dada puede dar una imagen mayor o menor dependiendo
de la distancia a la cual se encuentra el objeto. No obstante, hay una distancia óptima entre objeto y lente
que proporciona una imagen nítida.
Así por ejemplo, si un objeto tiene un tamaño de 1 mm. y una lente dada origina una imagen de 10 mm., se
dice que el objeto fue aumentado 10 veces, es decir el poder de aumento de la lente es de 10X, donde X
representa el tamaño original del objeto. El microscopio que se utiliza consta de 2 lentes (ocular y objetivo),
cada una de ellas con su respectivo poder de aumento. Cuando se observa un objeto a través del
microscopio, su aumento total (At) está dado por el producto del poder de aumento de cada una de las
lentes, o sea, aumento del objetivo (Aob), multiplicado por el aumento del ocular (Aoc):
At = Aob x Aoc
Siendo X el tamaño real del objeto, como ejemplo de lo anterior tenemos
Poder de aumento del Poder de aumento del ocular Aumento total

objetivo
10X 10X 100X
60X 20X 1200X
Campo visual del microscopio.

Es el área circular que se observa al mirar a través del microscopio y varía según las lentes utilizadas.
Para mayor información sobre el uso del microscopio, puede consultar el siguiente video:
http://bcove.me/vzge6wgg.
La Cámara de Neubauer
Es un portaobjetos con una depresión en el centro hundida 0.1 mm, en el cual se encuentra la cuadrícula que
se observa en la figura. El tamaño de la cuadrícula completa es de 3x3 mm y dentro de esta hay divisiones de
0.25 mm, por eso el área marcada con L mide 1 mm 2. Campuzano, M, G. (2007). El volumen comprendido
entre la superficie de la cuadrícula y del cubreobjetos es de 0.1 mm3.
El número de células obtenido después del recuento se expresa sobre milímetro cúbico de muestra:
celulas/mm3 = (Células contadas x 10 x 10)/4
Donde:
Células contadas: colocar el promedio del recuento de los cuadrantes
10: es el factor de dilución (puede cambiar dependiendo el utilizado)
10: corrección de la altura
4: Número de cuadrantes contados de 1mm. Contar mínimo 3.
Se debe realizar al recuento de cada uno de los cuadrantes (L) y sacar el promedio de células contadas.
Figura 5. Tomado de: http://shop.serviquimia.com/INFO318_LANG_ES.HTM
Para mayor información, puede ayudarse del siguiente video:

https://www.youtube.com/watch?v=JCpCOhm8a50
CONSULTA PREVIA
Elabore un mapa mental a partir de la información contenida en el folleto titulado la vida oculta del agua,
que podrá encontrar en: http://www.iesbatalladeclavijo.com/tablon/folletooptimizado.pdf. Entregue su
trabajo de manera individual.
*Para mayor información sobre los mapas mentales, puede remitirse al artículo de Eduardo Gonsenheim;
titulado Mapas mentales Utilícelos y potencie su creatividad, que podrá encontrar en el siguiente
enlace: http://www.casia-creaciones.mx/ifile/Pyme%202009/Enero%20177/Pyme177p13-15.pdfn
METODOLOGIA
Esta práctica de laboratorio se realizará en grupos de máximo 4 estudiantes, cada integrante deberá realizar
montajes en fresco y tinciones simples según instrucciones del procedimiento para practicar técnicas de manejo del
microscopio.
MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS A UTILIZAR

Materiales y Equipos Reactivos Materiales Estudiante*
Microscopio Aceite de inmersión Laminas y laminillas
Pipetas pasteur Colorantes de Gram Bata blanca manga larga
Cultivo líquido de levadura Guantes - Gorro
Asas redonda Tapabocas
Cultivo bacteriano Toallas de papel
Gafas de seguridad
Jabón antibacterial
100 mL de agua de Teusacá, antes
de la entrada al embalse San Rafael
o agua de humedal
*El estudiante debe traer todos los elementos mencionados en la guía, de lo contrario no podrá entrar al
laboratorio.
PRECAUCIONES Y MANEJO DE MATERIALES Y EQUIPOS. CONSULTA DE EQUIPO ESPECIALIZADO.
 Ser cuidadoso con el manejo del microscopio, es un equipo delicado y costoso.
 Utilizar los cubreobjetos en todas las observaciones para no ensuciar los lentes.
 Consulte sobre el funcionamiento del Microscopio óptico.
PROCEDIMIENTO
PREPARACION EN FRESCO
1. Con ayuda de una pipeta plástica tome una gota de la muestra de agua y póngala en una lámina limpia y
desengrasada
2. Cúbrala con una laminilla limpia y desengrasada
3. Monte la muestra en el microscopio y enfóquela con los objetivos de 4X – 10X – 40X y 100X
4. Observe el montaje pasando por los cuatro objetivos e identifique por lo menos tres clases de
microorganismos en cada uno de ellos apoyándose en las guías de identificación suministradas por el
docente
TINCION SIMPLE
1. Tome un tubo que contenga un cultivo líquido

2. Con ayuda de un asa redonda coloque una gota del cultivo líquido sobre una lámina limpia y
desengrasada
3. Extienda la gota sobre la lámina
4. Deje secar cerca del mechero
5. Fije la preparación pasando la lámina con la muestra tres veces por el mechero
6. Deje enfriar la muestra

7. Aplique una gota de cristal violeta sobre la preparación y déjela actuar por un minuto
8. Retire el exceso de colorante poniendo la lámina de forma perpendicular en un chorro fino de agua
9. Deje secar cerca al mechero
10. Monte la muestra en el microscopio y enfóquela con los objetivos de 4X, 10X, 40X y 100X
11. Observe el montaje pasando por los cuatro objetivos y dibuje lo observado
12. Tome una caja que contenga un cultivo en medio sólido

13. Coloque una gota de solución salina estéril en una lámina limpia y desengrasada
14. Con ayuda de un asa recta tome una poco de una sola colonia
15. Homogenice la colonia con la solución salina que previamente colocó en la lámina y haga un extendido
17. Fije la preparación pasando la lámina con la muestra tres veces por el mechero
18. Deje enfriar la muestra
19. Aplique una gota de cristal violeta sobre la preparación y déjela actuar por un minuto
20. Retire el exceso de colorante poniendo la lámina de forma perpendicular en un chorro fino de agua
22. Monte la muestra en el microscopio y enfóquela con los objetivos 4X, 10X, 40X y 100X
23. Observe el montaje pasando por los cuatro objetivos y dibuje lo observado
RECUENTO EN CÁMARA DE NEUBAUER
1. Tome el tubo que contiene 9mL de solución salina 0.1% y adiciónele 1mL de la muestra (agua de
estanque o humedal). Dilución = 1/10.
2. Aliste la cámara de Neubauer y colóquele la laminilla encima de la zona de la cuadrícula.
3. Antes de colocar la muestra en la cámara, elimine las tres primeras gotas de la pipeta, ya que esta
zona no tiene células.
4. Luego coloque la punta de la pipeta sobre el borde del cubreobjetos y deje que el líquido penetre por
capilaridad, como se observa en la siguiente figura:
Figura 3: cámara de neubauer y pipeta

Fuente: http://tertuliadeamigos.webcindario.com/imagepr10.jpg
5. Llene el espacio bajo la laminilla pero no ponga exceso de la muestra, ya que esto alterará el volumen
y el recuento de las células. Si hay exceso elimínelo oprimiendo suavemente la laminilla con el dedo.
Deje que las células se sedimenten por unos minutos y luego observe en el microscopio para contar en 10x.
ANEXO.
Figura 2. Vida microscópica presente en agua dulce. Detalle de micro algas. Tomado de http://jcoll.org/genoma/vida_microsubmarina/protozoos/protozoos.html
Figura 3. Vida microscópica presente en agua dulce. Detalle de diatomeas. Tomado de http://jcoll.org/genoma/vida_microsubmarina/protozoos/protozoos.html
Figura 4. Vida microscópica presente en agua dulce. Detalle de protozoos. Tomado de http://jcoll.org/genoma/vida_microsubmarina/protozoos/protozoos.html
Fecha: Abril de 2011
Código: GRL-006
Figura 5. Vida microscópica presente en agua dulce. Detalle de pólipos, gusanos y crustáceos. Tomado de http://jcoll.org/genoma/vida_microsubmarina/protozoos/protozoos.html
Versión: 4.0
BIBLIOGRAFÍA RECOMENDADA.
 MORALES.J. 2008. Experimentos con el microscopio. Una guía clara para conocer su manejo y sacar el
máximo rendimiento. En: http://jcoll.org/genoma/microscopio/index.html.
 TORRE, J. et al. 2005. Prácticas de biología y geología. Colección: materiales didácticos de aula. Serie:
secundaria. Consejería de educación y ciencia. Centro del profesorado y de recursos de nor-occidente.
 MADER, S. (2008). Biología. 9na edición. Mcgraw hill. México, D.F.
 MATTA, N; Garcia, m. (1997). Curso libre juvenil en biología. Facultad de ciencias. Departamento de
biología. Universidad nacional de Colombia.
 Narváez, D. (2005). La microscopía: herramienta para estudiar células y tejidos. Capítulo 3: la imagen.
Sistemas ópticos. Universidad de los andes de Venezuela. Materiales educativos computarizados.
Recuperado el 28 mayo de 2014 en:
http://www.medic.ula.ve/histologia/anexos/microscopweb/monoweb/capitulo3_4.htm
 WONG, Kate (2013). Maravillas diminutas: el microscopio óptico desvela secretos sorprendentes de la
naturaleza. Investigación y Ciencia. (438). P. 76-81.
 ZEWAIL, A. (2010). Microscopia electrónica ultrarrápida. Investigación y Ciencia. (409). P. 69 -75
 ATLAS, R., BARTHA, R. (2001).Ecología Microbiana y Microbiología ambiental. Editorial Addison Wesley.
España. 696 p.
 BROCK. Biología de los Microorganismos Décima edición. (Prentice Hall).
 CAMPUZANO, M, G. (2007). Del hemograma manual al hemograma de cuarta generación. Medicina &
Laboratorio, Volumen 13, números 11-12.
 DIAZ M; BUSTOS M; ESPINOSA A. (2004). Pruebas de toxicidad acuática: fundamentos y métodos.
Primera edición. Unibiblos. Bogotá.
 GÓMEZ, N. DONATO, J,C. GIORGI, A,. GUASCH, H. MATEO, P. & SABATER, S. (2009). Conceptos y técnicas
en ecología fluvial. La biota de los ríos los microorganismos autótrofos. BBVA. En:
http://www.fbbva.es/TLFU/microsites/ecologia_fluvial/pdf/cap_12.pdf
ELABORÓ REVISÓ APROBÓ
Firma: Firma: Firma:
Nombre: Equipo docentes laboratorio Nombre: Mic. Andrea Cortés B. Nombre: Ing. Claudia Fernández
de microbiología
Fecha: Enero 2016 Fecha: Enero 2016 Fecha: Enero 2016

INFORME DE LABORATORIO
ESTUDIANTES: GRUPO:



NOTA:


CARRERA:
Formule tres objetivos que desee cumplir con la Práctica de Laboratorio



Elabore un Mapa conceptual del tema a tratar en la Práctica de Laboratorio.

RESULTADOS
PREPARACION EN FRESCO
4x 10x 100x
Microorganismos encontrados: Microorganismos encontrados: Microorganismos encontrados:
_____________________________ _____________________________ _____________________________
_____________________________ _____________________________ _____________________________
____________________ ____________________ ____________________
TINCION SIMPLE A PARTIR DE CULTIVO LIQUIDO
4x 10x 100x
TINCIÓN SIMPLE A PARTIR DE CULTIVO SÓLIDO
4x 10x 100x
RECUENTO DE ALGAS EN CAMARA DE NEUBAUER
Escriba la fórmula que utilizó para el recuento de algas en la Cámara de Neubauer e intérprete los
resultados obtenidos.
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_________________________________________________
Identifique las diferentes morfologías que observó al microscopio y realice un dibujo de cada una,
describiendo las principales características. Apóyese de información suministrada en el marco teórico.
CUESTIONARIO
1. Describa la función de:

a) El condensador:
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________
b) El diafragma:
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________
c) Ajuste axial de platina X-Y

_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________
2. Explique brevemente los pasos indispensables para el enfoque con objetivo de inmersión.
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
_______________________________________
3. ¿Explique cuál es la razón de usar tinciones en la preparación de una muestra cuando se va realizar su
observación por microscopia?
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
________________________________________________
4. ¿Cuál objetivo del microscopio es el indicado para la observación de nematodos en muestras de

suelo? Explique su respuesta.
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
_______________________________________________
5. Cuándo realiza el recuento de algas por cámara de Neubauer, ¿Cómo sería el factor de conversión
para informar algas/ml?
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
CAUSAS DE ERROR Y ACCIONES PARA OBTENER MEJORES RESULTADOS:
CONCLUSIONES
APLICACIÓN PROFESIONAL DE LA PRÁCTICA REALIZADA
BIBLIOGRAFIA UTILIZADA

Guia Nº02. Microscopia - Microbiologia Ambiental 2016 - I

Cargado por

Información del documento

Descripción original:

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Guia Nº02. Microscopia - Microbiologia Ambiental 2016 - I

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

UNIVERSIDAD MANUELA BELTRÁN

MACROPROCESO DE RECURSOS E INFRAESTRUCTURA ACADÉMICA

En la figura 1 encontrará la ubicación de las partes mencionadas anteriormente.

El microscopio, al desempeñar su función se le ha podido encontrar tres propiedades:

Figura 1. Partes del microscopio

CONCEPTOS BÁSICOS DE MICROSCOPIA

Siendo X el tamaño real del objeto, como ejemplo de lo anterior tenemos

Poder de aumento del Poder de aumento del ocular Aumento total

Campo visual del microscopio.

celulas/mm3 = (Células contadas x 10 x 10)/4

Figura 5. Tomado de: http://shop.serviquimia.com/INFO318_LANG_ES.HTM

Para mayor información, puede ayudarse del siguiente video:

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS A UTILIZAR

1. Tome un tubo que contenga un cultivo líquido

6. Deje enfriar la muestra

12. Tome una caja que contenga un cultivo en medio sólido

RECUENTO EN CÁMARA DE NEUBAUER

Figura 3: cámara de neubauer y pipeta

FORMATO PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO

ELABORÓ REVISÓ APROBÓ

Firma: Firma: Firma:

Fecha: Enero 2016 Fecha: Enero 2016 Fecha: Enero 2016

Formule tres objetivos que desee cumplir con la Práctica de Laboratorio

Elabore un Mapa conceptual del tema a tratar en la Práctica de Laboratorio.

TINCION SIMPLE A PARTIR DE CULTIVO LIQUIDO

TINCIÓN SIMPLE A PARTIR DE CULTIVO SÓLIDO

RECUENTO DE ALGAS EN CAMARA DE NEUBAUER

1. Describa la función de:

c) Ajuste axial de platina X-Y

4. ¿Cuál objetivo del microscopio es el indicado para la observación de nematodos en muestras de

CAUSAS DE ERROR Y ACCIONES PARA OBTENER MEJORES RESULTADOS:

APLICACIÓN PROFESIONAL DE LA PRÁCTICA REALIZADA

También podría gustarte