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MEDICIONES MICROSCÓPICAS
DOCENTE:
MG. ROSA HAYDEE MEDINA IBARRA
OBJETIVOS GENERALES
➔ Comprender conceptos básicos de microscopía, tales como: poder de
resolución, poder de aumento y campo visual.
➔ Adquirir destreza para calcular mediciones aproximadas de células y otras
estructuras.
➔ Identificar las unidades de medida de mayor uso en micrometría y utilizarlas
resolviendo algunos problemas comunes.
➔ Desarrollar la capacidad investigativa mediante el uso del microscopio.
Microscopio es un vocablo que proviene del griego micro, que significa pequeño, y
skopein, mirar. Este aparato permite observar lo que es invisible a simple vista.
Existen diversos tipos de microscopios, desde la lupa, formada por una sola lente,
hasta el microscopio electrónico.
El microscopio simple o también llamado lupa, consta de una de sólo una lente
biconvexa o plano- convexa, que proporciona una amplitud moderada del objeto.
Estativo o brazo: pieza sólida y firme que une al tubo de observación con la
platina. Esta es la parte por la cual, debe tomarse el microscopio con el propósito
de desplazar de un sitio a otro
Revólver portaobjetivos: parte giratoria en la que están colocados los objetivos del
microscopio.
Limpie bien una lámina, manipule la lámina únicamente por los bordes. Si requiere
preparar una muestra húmeda, coloque una o dos gotas de agua en la mitad de la
lámina y ponga la muestra a observar sobre ella. Sostenga la laminilla en un
ángulo de 45º en relación con la lámina y lentamente bájalo hacia el agua con la
muestra. No presione la laminilla. Coloque la preparación en la platina del
microscopio y sujétalo presionando con la pinza del microscopio. La parte o
muestra deberá estar sobre el orificio de la platina. Para observar proceda de la
siguiente manera:
PODER DE RESOLUCIÓN
Es la capacidad para diferenciar dos puntos que a simple vista parecen uno solo,
debido a la pequeña distancia que hay entre ellos. Es característico de cada
instrumento y depende en gran parte de la calidad de las lentes utilizadas. Por
ejemplo, el poder de resolución máximo del ojo humano es de 100 micras (100μ),
el del microscopio compuesto es de dos décimas de micra (0.2 μ) y el del
microscopio electrónico es de una milésima de micra (0.001 μ). De esta forma
para que el ojo humano pueda diferenciar claramente dos puntos, estos deben
estar separados entre sí por una distancia igual o mayor a 100 micras.
PODER DE AUMENTO
Aunque una lente dada puede dar una imagen mayor o menor dependiendo de la
distancia a la cual se encuentre del objeto, hay una diferencia óptica entre objeto y
lente, que proporciona una imagen lo más nítida posible.
Por ejemplo, si un objeto tiene un tamaño de 1mm y una lente dada origina una
imagen de 10mm, se dice que el aumento es 10 veces, es decir, el poder de
aumento de esa lente es de 10. De igual forma, esta imagen puede ser aumentada
por otra lente, si en el caso anterior se toma la imagen obtenida de 10mm, y se
añade otra lente, que obtiene una nueva imagen de 50 mm, tenemos que el
aumento total es de 5 veces en relación con el tamaño de la primera imagen o de
50 veces en relación con el tamaño del objeto. Se deduce por tanto que el
El microscopio óptico consta de dos lentes: ocular y objetivo. Cada una de ellas
con el respectivo poder de aumento. Es decir, cuando se observa un objeto a
través de él, su aumento total está dado por el producto del poder de aumento de
cada una de las lentes, o sea, aumento del objetivo (Aob), multiplicado por el
aumento del ocular (Aoc), correspondiendo así a la siguiente fórmula:
At = Aob x Aoc
40;172
Es el área circular que se observa al mirar a través del microscopio y varía según
las lentes utilizadas.
MEDICIÓN DEL DIÁMETRO (D) Y DEL ÁREA (A) DEL CAMPO VISUAL DE UN
MICROSCOPIO
Medición del diámetro visual: Para hacer mediciones aproximadas de
microorganismos usando el microscopio se mide en forma aproximada el diámetro
del campo visual. Tal medición puede hallarse experimentalmente de forma
aproximada utilizando papel milimetrado. Medición del área visual: El área del
campo visual (A), se calcula con base en el área del círculo utilizando la fórmula
A= π r 2 , siendo el radio, que es la mitad del diámetro del campo visual.
Fundamento
Es una técnica que presenta 4 pasos fundamentales: tinción, fijación con el
mordiente, decoloración y contratinción. Por tanto, además de colorear las
bacterias, también permite diferenciarlas.
El cristal violeta es el primer colorante utilizado. El mismo tiene afinidad por el
peptidoglicano y teñirá de morado a todas las bacterias presentes, posteriormente
se coloca el Lugol, que actúa como mordiente, es decir, inducirá a la formación de
complejos insolubles de cristal violeta/yodo/proteínas ribonucleases dentro de la
célula.
Consulta previa
Si, podría ver separado dos puntos que están a 10 micrómetros entre sí, ya que el
poder de resolución máximo aproximado del microscopio compuesto es de 0.2
micrómetros.
4. Resuelve:
- De contraste de fases
- De interferencia
Para cumplir con las altas exigencias de tales preparados, los microtomos
permiten realizar cortes extremadamente finos.
Para poder analizar objetos, estos debían ser lo suficientemente finos para que la
luz los traspasara. Los primeros micrótomos eran en su inicio simples cuchillas
(normalmente cuchillas de afeitar) con los que se hacían cortes de forma manual.
Como las exigencias a los preparados iban en aumento, fue necesario que los
microtomos se desarrollaran.
Los primeros micrótomos, tal como hoy en día los conocemos, se desarrollaron en
1770. Con estos se podía fijar la prueba y ajustar el grosor del corte mediante
unos tornillos. Hoy en día, los micrótomos mecánicos se componen de un bloque,
un sujeta-muestras y un equipo técnico para el control del avance. La calidad de
los preparados depende del tipo de avance, de la geometría de la cuchilla y de la
declinación (ángulo entre la cuchilla y la dirección de corte). Adicionalmente se
puede influir en el resultado en la preparación de la muestra (p.e. mediante
congelación).
Además de los microtomos mecánicos hoy en día se usan cada vez más los
micrótomos láser, con los que es posible preparar muestras sin contacto.
PAPEL MILIMETRADO
4x 10x
Figura 1 y 2. Medición del diámetro del campo visual utilizando papel milimetrado a)
Objetivo 4X b) Objetivo 10X
a. 0.025 mm en μ y en Å
25 μ; 250.000Å
c. 1300 Å en mμ, en μ y en mm
0,00013 mm;0,13 μ;130mμ
d. ¿A cuántas m μ equivale 1 mm?
1.000.000mμ
e. ¿A cuántas m μ equivale 1 Å?
0,1mμ
4x:Con el primer vistazo se observa que gracias al azul de metileno la muestra toma el
color de este mismo, dejando ver así partículas sumamente pequeñas. Parecen ser
células
10x:Se observan partículas que ya las podemos identificar cómo las células pero estas
no se evidencian en una forma específica, además se ven menos células.
40x:Con el lente de 40X se observan menos células pero muchos más grandes, ahora se
ven más su forma que es un poco redonda pero irregular. Se puede notar lo que creemos
es un núcleo de la célula.
● Mafer:
Por otro lado, se puede concluir que si se logro complir con el objetivo de la
práctica, ya que, fue de gran utilidad para el aprendizaje de cada estudiante de
bacteriología en formación, debido a que se reforzaron conocimientos, en relación
a conocer cada parte del microscopio y de la misma manera a manejarlo de forma
correcta.
● Benford, J.R. The Theory of the Microscope. New York. Bausch and Lomb Inc. 28 p.
● Biología; El Hombre y su ambiente. Medellín, Edit Norma p. 11 – 15. Volumen I
● Dayson. R. D. Principio de la Biología Celular México, Fondo Educativo Interamericano. 431
p.
● Peñaranda, E. (2018). Práctica Mediciones microscópicas. Manual de prácticas de Biología
celular. Bacteriología y laboratorio clínico.