CÓDIGO: FO-DOC-112

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

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PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016

LABORATORIO DE BIOLOGÍA
UNIDAD ACADEMICA: MVZ
CURSO: Biología
PRACTICA Nº 02: Microscopia I y Estereomicroscopia

1. OBJETIVOS
 Identificar las partes del microscopio de luz compuesto.
 Identificar los componentes del sistema óptico y del sistema mecánico del microscopio.
 Aprender algunos conceptos básicos en microscopía.
 Aprender y practicar el proceso de enfocar correctamente en el microscopio óptico.

2. CONSULTA PREVIA
1. Investigue qué son los Tunicados y qué características especiales tienen estos organismos.
2. ¿Cuál es el tamaño promedio de un espermatozoide? Investigue la organización estructural interna
del espermatozoide.
3. Diga que otros tipos de microscopios se encuentran aparte del microscopio óptico y cuáles son sus
diferencias.
4. En organismos como el Paramecium qué función cumplen los cilios.

3. FUNDAMENTO TEORICO
Un microscopio óptico es un microscopio basado en lentes ópticas. También se le conoce como microscopio de
luz. El desarrollo de este aparato se le atribuye a Anton Van Leeuwenhoek durante el siglo XVII. Los
microscopios de Leeuwenhoek constaban de una única lente pequeña y convexa, montada sobre una plancha,
con un mecanismo para sujetar el material que se iba a examinar (la muestra). Este uso de una única lente
convexa se conoce como microscopio simple, en el que se incluye la lupa, entre otros aparatos ópticos. El
microscopio con el que trabajaremos posee dos juegos de lentes y, por lo tanto, se conoce como microscopio
compuesto.

Este instrumento ha sido de gran utilidad, sobre todo en los campos de la ciencia en donde la estructura y la
organización microscópica es importante, incorporándose con éxito a investigaciones dentro del área de la
química en el estudio de cristales, la física en la investigación de las propiedades físicas de los materiales, la
geología en el análisis de la composición mineralógica de algunas rocas y por supuesto en el campo de la
biología, en el estudio de estructuras microscópicas de la materia viva, por citar algunas disciplinas de la
ciencia.

Como se dijo anteriormente, la invención del microscopio se le atribuye a Leeuwenhoek (1674) sin embargo,
varios científicos participaron en la invención y perfeccionamiento de este aparato óptico: Galileo (1610),
Zacharias Janssen (1608), Robert Hooke (1665), Marcello Malpighi (1668). Estos primeros microscopios,
aumentaban la imagen alrededor de unas 200 veces (X). En 1887 Abbe, por encargo de Carl Zeiss mejora la
microscopia de inmersión al sustituir el agua por aceite de cedro.

El gran cambio del siglo XX, fue la invención del microscopio electrónico de transmisión que reemplaza la luz
por un haz de electrones para enfocar la muestra consiguiendo aumentos hasta de 100.000 X (1937 Ernst
Ruska y Max Knoll, físicos alemanes). Sin embargo, no es el único tipo de microscopios que existe.
Actualmente se cuenta como microscopio de barrido electrónico, microscopio de fluorescencia, microscopio
invertido.

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4. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

Se debe listar los equipos, materiales y reactivos requeridos para el desarrollo de la práctica.

Equipos Materiales Sustancias y/o Reactivos

Portaobjetos y cubreobjetos
(laminas y laminillas)
Tijeras
Microscopio óptico (Por grupo) Letras impresas
Agua destilada
Algodón
Microscopio invertido Alcohol isopropilico

Estereoscopio

5. PROCEDIMIENTO O METODOLOGÍA
En este laboratorio usted realizará las siguientes prácticas:

1. Identificará los dos sistemas que componen el microscopio (óptico y mecánico) y sus diferentes partes.
2. Aprenderá a enfocar en este instrumento óptico.
3. Comprobará el tipo de imagen que forma el microscopio compuesto de luz.
4. Reconocerá el mantenimiento y precauciones para el microscopio óptico
5. Reconocerá las partes del microscopio invertido e identificará su función.
6. Reconocerá un esteromicroscopio y comprenderá su función.

1. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

Figura 1. Esquema de un microscopio compuesto de luz. Identifique las diferentes partes.

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El microscopio de luz compuesto está formado por dos sistemas: el sistema óptico y el sistema mecánico.

Partes del sistema óptica:

1. Ocular: Lente situado cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.
2. Objetivo: Lente situada cerca de la muestra. Amplía la imagen de ésta.
3. Condensador: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la muestra o preparación.
4. Diafragma: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
5. Foco: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

Partes del sistema mecánico:

1. Soporte: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
2. Platina: Lugar donde se deposita la preparación.
3. Cabezal: Contiene los sistemas de lentes oculares. El microscopio puede ser monocular o binocular.
4. Revólver: Contiene los sistemas de lentes llamados objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos.
5. Tornillos de enfoque: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que consigue el enfoque
correcto.
6. Carro: Permite desplazar la preparación en todos los sentidos (arriba-abajo, derecha-izquierda.

A. DEFINICIONES

Para esta práctica es necesario aprender y tener claros dos conceptos:

 PODER DE RESOLUCION

El poder de resolución se refiere a la capacidad de un sistema óptico de presentar dos puntos próximos
distintos o separados. Se especifica por la distancia mínima en que se logra resolver estos dos puntos. Este
depende a su vez de la longitud de onda y la apertura numérica del objetivo (NA); en la mayoría de
microscopios ópticos la longitud de onda generada por sus bombillos es de 600 nm aproximadamente.

Poder de resolución = (Longitud de onda)/ (2 x NA)

La apertura numérica está limitada a algo menos de 90°, pues esto pondría a la lente y al objeto en contacto. En
microscopios buenos en realidad es de unos 85°. Sin embargo, mientras esta resolución permite visualizar una
considerable cantidad de detalles en la mayoría de las células (con diámetro de 10 a 20 micrómetros), muchas
estructuras aun no son observables; por ejemplo, los ribosomas y las fibras de cromatina, miden alrededor de
0,02 micrómetros de diámetro.

 PODER DE AUMENTO

Es la capacidad que presenta un instrumento óptico de aumentar en forma aparente, el tamaño real de un
objeto dado. En el caso del microscopio es la capacidad que posee este de presentar aumentados los objetos
que se observan en él.

En óptica se acostumbra a designar con una X el valor del aumento. Así cuando se hace referencia al objetivo u
ocular X, se quiere decir que si se observara un objeto con una de estas lentes independientemente del sistema
óptico local, la imagen de este objeto aparecerá 10 veces mayor. El poder de aumento total (AT) de un
microscopio compuesto, está dado por el producto de los poderes de aumento del objetivo (Aob) y del ocular
(Aoc) utilizados.

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Ejemplo: si observamos una estructura con un objetivo de 40X y un ocular de 10X, el aumento total seria:
AT= Aob. Aoc
AT= 40X. 10X = 400X
 PODER DE DEFINICIÓN

Permite formar imagines claras contornos definidos.

 PODER DE PROFUNDIDAD

Permite observar varios planos de la imagen con un mismo enfoque.

2. MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

1. Colocar en posición el objetivo de menor aumento y bajar la platina completamente (si el microscopio se
recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones).

2. Colocar la preparación sobre la platina

3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x.

4. Para enfocar:

a. Usando el tornillo macrométrico, acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación. Esto debe
hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo
en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación con
el macromético y, cuando se observa algo nítida la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un
enfoque fino.

5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un
poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es
preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3.

3. TIPO DE IMAGEN DEL MICROSCOPIO COMPUESTO DE LUZ

1. Corte un trozo de papel en el cual aparezcan letras de tamaño pequeño.

2. Colóquelo en un portaobjetos al derecho, es decir, como si usted lo fuera a leer.

3. Seleccione el objetivo de menor aumento y enfoque.

4. ¿Cómo se observa la imagen? Investigue que tipo de imagen forma estén tipo de microscopio.

5. Desplace el carro a la derecha y a la izquierda y en cada caso observe el desplazamiento de la imagen.

4. MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

1. Al finalizar el trabajo hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación,
asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su
funda. Siga los siguientes pasos: a. Bajar la preparación, b. Poner el objetivo de menor aumento en posición de
observación, c. Limpiar la platina, d. Bajar la intensidad de luz de la lámpara, e. Apagar el microscopio, f.

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Desenchufar, g. Dejar enfriar el bombillo antes de mover el microscopio, h. Transportar el microscopio
asegurándose de cogerlo firmemente por la base. No inclinarlo.

2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se
ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un
armario para protegerlo del polvo.

3. Nunca hay que tocar los lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de
filtro o, mejor, con un papel de óptica.

4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.

5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pañuelos
especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso, se pasará el papel por la
lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que
limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si
se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción.

6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina, revólver y
condensador).

7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación para
prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni
hacerlo mientras se está observando a través del ocular.

8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido, secarlo con un con
un algodón y alcohol isopropilico

9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y, al acabar el curso,
encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.

5. RECONOCIMIENTO DEL MICROSCCOPIO INVERTIDO

En el microscopio invertido, la luz se concentra en el condensador, y después pasa a través de la plataforma.

Los lentes objetivos reciben estos rayos y son enviados hasta los oculares, gracias a unos espejos que se
encuentran en el interior. Los objetivos del microscopio están mucho más cerca de la plataforma, reduciendo así
la distancia de trabajo en comparación a otros microscopios.

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Figura 2. Esquema de un microscopio invertido. Identifique las diferentes partes.

A continuación, identifique las partes del microscopio invertido, su función, su manejo, y las diferencias que
presenta con el microscopio óptico.

6. MONTAJE EN EL ESTEREOSCOPIO

El estereoscopio está previsto de dos oculares y dos objetivos, lo cual da como resultado una imagen
tridimensional durante la observación.

Los oculares proporcionan aumento entre 6.3 y 25X. Los objetivos están compuestos también por lentes de
diferentes aumentos 0.63 -4.0X que están en el interior y acoplados al botón de magnificación. Este último es el
botón que permite el cambio rápido de los lentes seleccionado los de aumento más apropiado.

Para la observación de una muestra en el estereoscopio:

1. Tome un insecto y una hoja, obsérvelos en los diferentes aumentos, manipulando el ángulo de
incidencia de la luz. Identifique los detalles de sus estructuras.
2. Elabore un diafragma de un segmento y de la hoja en el mayor aumento.
3. Además, identifique las partes del equipo que está empleando.

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Figura 3. Esquema de un estereomicroscopio. Identifique las diferentes partes.

6. BIBLIOGRAFIA
 Alberts, B., Bray , D., Hopkin, K., & et all. (2006). INTRODUCCIÓN A LA BIOLOGIA CELULAR
(Segunda ed.). España: Medica PanamericanaS.A.

 Campbell, N., & Reece, J. (2007). BIOLOGIA (Septima ed.). Madrid, España: Medica Panamericana
S.A.

 Tortora, G., Funke, B., & Case, C. (2007). INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGIA (Novena ed.).
Argentina: Medica Panamericana.

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