GUÍA DE LABORATORIO VIRTUAL 2022 CURSO

BIOQUÍMICA
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ÍNDICE

1. Introducción
i. Objetivos
2. Procedimiento Experimental
ii. Anexos
3. Apliquemos lo aprendido
4. Discusión
5. Conclusiones
6. Referencias Bibliográficas
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INTRODUCCIÓN

En principio la desnaturalización de proteínas es la pérdida de la estructura cuaternaria, la

estructura terciaria y la estructura secundaria las cuales producen una ruptura de sus enlaces que

mantenían sus estructuras, además SDS-PAGE (electroforesis en gel de poliacrilamida con

dodecilsulfato de sodio ) es un sistema electroforético discontinuo, Así mismo, la electroforesis en

geles de poliacrilamida es uno de los métodos más utilizados para la purificación, análisis y

caracterización de proteínas y esta nos permite separar moléculas cargadas y explota diferencias en

movilidad cuando se les somete a la acción de un campo eléctrico.

En la electroforesis desnaturalizante (SDS-PAGE), como su propio nombre indica, se utilizan agentes

desnaturalizantes de proteínas, como pueden ser: detergentes (p.e. SDS), caótropos (p.e. urea) y

agentes reductores (2- mercaptoetanol, DTT). Para la visualización de las proteínas se utilizan

diferentes métodos de tinción, siendo el más habitual el azul de coomassie. En la SDS-PAGE, la

separación es función del tamaño (masa molecular), lo que permite determinar el peso molecular

de las proteínas. Para ello se compara la movilidad electroforética (Rf) de la proteína de peso

molecular desconocido con el de proteínas de referencia de peso molecular conocido.

OBJETIVOS

● Conocer la desnaturalización de proteínas por electroforesis en gel de poliacrilamida con

dodecilsulfato sódico.

● Determinar y definir el proceso desnaturalizante (SDS-PAGE)

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PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
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POSTERIORMENTE:
Una vez completada la tinción retiramos la tinción con cuidado de no perder el gel en el proceso

(ANEXO 1)

El gel debe verse completamente azul , lavamos con agua abundante varias veces para retirar la
solución de tinción no fijada en el gel

(ANEXO 1)
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Los lavados con agua no eliminan el color azul fijado en el gel , por eso se incuba en una segunda
disolución decolorante , que elimina el colorante que no se ha unido de forma específica a las
proteínas separadas en la electroforesis.

(ANEXO 1)

Finalmente podemos distinguir las bandas correspondientes a las proteínas separadas por
electroforesis , la migración de estas bandas es inversamente proporcional a su tamaño , menor
tamaño menor migración es decir más cerca de la parte inferior del gel con patrones de peso
molecular conocidos podemos identificar las proteínas presentes en nuestras muestras.

(ANEXO 1)
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APLIQUEMOS LO APRENDIDO

- ¿Cuál es el fundamento de la electroforesis?

La electroforesis es una técnica que se utiliza de una forma generalizada en la que

fundamentalmente , se aplica corriente eléctrica a moléculas biológicas , ya sean proteínas
,ARN o ADN , y se separan en función de su tamaño, sea de si son más grandes o más
pequeñas . También son muy importantes en la investigación de proteínas, y en la
investigación de mutaciones genéticas, porque cuando las proteínas o el ADN están
mutados, son con frecuencia más o menos largos, y por lo tanto, aparecen en un gel de
electroforesis de manera diferente de lo normal .

- ¿Cuál es la diferencia entre electrophoresis nativa y desnaturalizante?

La electroforesis nativa o en condiciones no desnaturalizantes , es la que va a someter a las

proteínas a migración sin desnaturalización. Cuando llegan a esta situación las proteínas
migrarán en función de su carga, de su tamaño y de su forma .

- ¿Cómo se verían los resultados de la SDS-PAGE, utilizando SDS y b-mercaptoetanol, para la

keratina?

Los resultados de la SDS - PAGE , usando SDS y b - mercaptoetanol ,para la keratina sería que
cuando agreguemos la b- mercaptoetanol se va a producir una gran disminución en los
puentes en este caso del disulfuro . Al suceder la disminución del sulfuro se producirá una
división de las cadenas polipeptídicas . Por otro lado, la cadena hidrocarbonada hidrófoba de
el SDS va a empezar bordeando las cadenas polipeptídicas , por esa razón las cadenas van a
ganar una carga negativa ( - ) , y las cadenas polipeptídicas van a quedar a un lado apartadas
o aisladas .
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DISCUSIÓN

● En el procedimiento presentado ha sido posible visualizar la disgregación molecular en la

cubeta electroforética, llevándonos al reconocimiento y familiarización procedimental de la
técnica del electroforesis.

● Del mismo modo, ha sido posible verificar conocimientos teórico práctico relacionados a las
proteínas y su interacción con cargas eléctricas, además con la relación de la proteína actina
y mioglobina y sus condiciones reductoras y no reductoras, además de sus condiciones
desnaturalizantes y no desnaturalizantes.En la desnaturalización de proteínas intervienen
agentes desnaturalizantes como detergentes o agentes reductores.

● La desnaturalización de las proteínas es una pérdida de las estructuras de orden superior

(secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptídica reducida a un
polímero estadístico sin ninguna estructura tridimensional.Este proceso opuesto se conoce
como renaturalización, en el caso de desnaturalización irreversible, la reestructuración de la
proteína de vuelta a su conformación espacial funcional puede ser lento, las proteínas
pierden su función biológica cuando están desnaturalizadas, por ejemplo, las enzimas
pierden su actividad catalítica, porque los sustratos no pueden unirse más al sitio activo, y
porque los residuos del aminoácido implicados en la estabilización de los sustratos no están
posicionados para hacerlo.

CONCLUSIONES
● Como primera conclusión, reconocimos la electroforesis en gel de poliacrilamida con
dodecilsulfato sódico y su efecto en la desnaturalización de proteínas, ya que intervienen
agentes desnaturalizantes como detergentes o agentes reductores.

● También llegamos a analizar que la electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato

sódico (SDS) es una técnica muy sencilla y rápida para la separación e identificación de
proteínas. El análisis de proteínas nos permite detectar el efecto del proceso sobre los
alimentos para la mejora de la calidad de los mismos.

● Los pasos son Polimerización del gel separador , gel acumulador o concentrador, realizar
pocillos (peine) antes de polimerizar el gel acumulador, Colocar el gel en soporte, Quitar
peine de pocillos de muestra,Adicionar tampón de corrida, Cargar muestra,iniciar corrida y
al finalizar la corrida colorear el gel para visualizar las bandas.
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REFERENCIAS

1. Bjellqvist B et al. (1982). Isoelectric focusing in immobilized pH gradients: principle,

methodology and some applications. J Biochem Biophys Methods 6, 317–339.
2. Desnaturalización de las proteínas. (1997-2022). Library. Recuperado 24 de mayo de 2022,

https://1library.co/article/desnaturalizaci%C3%B3n-de-las-prote%C3%ADnas-revisi%C3%B3n

-bibliogr%C3%A1fica.zpno9xoy

Anexo :

Anexo 1

- Canal Divulgación. (2013). Electroforesis de proteínas (tutorial). Divulgación científica (IQOG-CSIC)

[YouTube Video]. En YouTube.

https://www.youtube.com/watch?v=_8xftsCIwYo&ab_channel=CanalDivulgaci%C3%B3n