Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Laboratorio de Bioquímica General
PRÁCTICA No 8 “SEPARACION DE FOSFOLIPIDOS POR CAPA
FINA”
Alumnos: Paredes Mendoza Ángel Gabriel
Vera Reyes Fernando Patricio Grupo: 3FV1

Introducción Resultados
Los lipidos son compuestos organicos que solo se Imagen 1. Perfil de corrimiento en capa fina para fosfolípidos presentes
en la yema de huevo.
encuentran en organismos vivos y que son solubres en
disolventes no polares. Se clasifican en dos generales:
aquellos que son semejantes a las grasas y ceras y los
semejantes al colesterol y otros esteroides.
Las grasas y aceites estan compuestos de
triacilgliceros mezclados, donde el glicerol esta unido
por enlaces ester con diferentes tipos de acidos grasos.
Dentro de estos encontramos a los fosfolipidos que son Tabla I. Factor de corrimiento para los lípidos obtenidos por
cromatografía en capa fina de la yema de huevo.
diesteres del acido fosforico.
Molibdato Yodo Ninhidrina Bismuto
Los fosfolipidos estan compuestos por una molecula
Lípidos
de alcohol, a la que se unen dos acidos grasos y un neutros
0.889
grupo fosfato. Hay de dos tipos: glicerofosfolipidos y Fosfatidil
0.689
esfingomielinas; y tienen una funcion bastante etanolamina
importante para la vida ya que forman parte le la Fosfatidil
0.424
menbrana celular, ayudan en la activacion de enzimas, serina
Fosfatidil
detergente de la bilis, etc. colina
0.378 0.378

Los glicerofosflipidos se basan en el acido fosfatidico, Esfingomielina 0.178 0.178

el cual contiene un esqueleto de glicerol unido por
enlaces ester a dos acidos graso y a un acido fosforico.
Las esfingomielinas tienen esfingosina o una
dihidroxiamina relacionada como su esqueleto y son
particularmente abundantes en el cerebro y en el tejido
nervioso.
Objetivo general
Conocer los fosfolipidos presentes en la yema de
huevo de una pata y gallina.
Objetivos particulares
• Analizar el proedimiento utilizado.
• Calcular los Rf del cromatograma para cada
fosfolipido obtenido.
• Analizar las manchas obtenidas en cada
cromatograma.
• Estudiar la importancia de los fosfolipidos.
Isolecitina 0.044 0.044
Discusión
Primero empezamos con la extracción de los lípidos de
la yema de huevo, en donde la mezclaremos con 15 mL
de cloroformo-metanol, la que nos sirve como medio
líquido para los lípidos, dado a que estos se
caracterizan por su alta solubilidad en solventes
orgánicos poco polares. Se realizo una agitación de la
mezcla en un baño de hielo, para bajar la temperatura
y así evitar que nuestra mezcla de cloroformo y
metanol se evapore, lo separaremos mediante una
filtración y al filtrado le agregaremos 5 mL de cloruro
de potasio 0.1 M, con el fin de separar y retirar
aquellos compuestos que tengan cargas, para así
purificar la solución. Se dejará reposar un tiempo en
donde veremos la separación de las fases, orgánica y
acuosa, desecharemos esta ultima y nos quedaremos
con la fase orgánica para la separación en
cromatografía.
En 4 placas cromatográficas, aplicaremos 2µL del
crudo de lípidos obtenido de 2 huevos diferentes (por
ejemplo, pata y gallina), se colocarán en la cámara
cromatográfica y se sumergirá el extremo inferior de
las 4 placas en la fase móvil, la que es una mezcla de
mezcla de cloroformo-metanol-ácido acético-agua
(68:25:8:4 v/v/v/v), se utilizó esta mezcla de
compuestos por la polaridad que tienen, dado a que
unos de los lípidos se verán más atraídos por los
compuestos polares que otros, es por esto que los
lípidos neutros llegan más alto en el cromatograma. Al
sumergir el cromatograma en la fase móvil se observa
el desplazamiento de la fase móvil en la placa
cromatográfica por capilaridad, al casi llegar al otro
extremo retiraremos las 4 placas y se marcara el
avance de corrimiento y dejaremos secar.
Para el revelado de las placas se utilizo un reactivo
diferente para cada una; molibdato, bismuto,
ninhidrina y cristales de yodo.
En la placa rociada con molibdato (Tabla I) se
mineraliza el fosforo orgánico contenido en la cabeza
polar de los fosfolípidos mediante una hidrólisis ácida,
de acuerdo con el método de Hess y Derr. El fosforo
inorgánico se hace reaccionar con molibdato de
amonio en medio acido formando un complejo de
fosfomolibdato. El reactivo como reacciona con un
grupo fosfato, la prueba nos identifica fosfolípidos en
general, revelándolos con manchas azules. En base a
las manchas generadas y el valor Rf obtenido podemos
deducir que hay la presencia de fosfatidiletanolamina,
fosfatidilserina, fosfatidilcolina, esfingomielina e
isolecitina.
La placa rociada con ninhidrina se sometió a un
calentamiento en el horno durante 2-3 minutos a una
temperatura de 100°C, para que ocurriera la reacción
de la ninhidrina con los grupos amino libres de los
fosfolipidos, en este primero el grupo amino se oxida
y se convierte en amonio, en el cual se descarboxila y
se libera amoniaco, mientras que una molécula de
ninhidrina se reduce a hidrindantina. En el segundo
paso de la reacción la hidrindantina formada reacciona
con el amoniaco formando un complejo de color
purpura. Son estas manchas de color purpura que nos
indican fosfolípidos con grupos amino libres;
fosfatidiletanolamina y fosfatildilserina, que al
compararlo con la bibliografía nos damos cuenta de
que son los únicos que cuentan con un grupo amino
libre.
La placa revelada con bismuto, se nos muestran
aquellos fosfolípidos que en su estructura contengan
colina, en la placa se generaron 3 manchas de color
amarillo-naranja, por lo que al comparar su valor de Rf
con los obtenidos en la placa de molibdato, notamos
que los únicos fosfolípidos que cuentan con esta
característica son 3 fosfatidilcolina, esfingomielina y
lisofosfatidil colina.
La ultima placa revelada con los cristales de yodo, al
retirar el cromatograma debemos marcar rápidamente
las manchas generadas, ya que el yodo de las manchas
se sublimará, desapareciendo. Esta prueba lo que nos
identifica son aquellos lípidos que en su estructura
contengan dobles enlaces, generando manchas de
color café, identifica lípidos que en su estructura
contengan dobles enlaces. Al calcular y comparar los
valores de Rf obtenidos con la placa de molibdato, nos
damos cuenta de que son las mismas manchas de
fosfolípidos (fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina,
fosfatidilcolina, esfingomielina, isolecitina) y otra
mancha, que corresponde a los lípidos neutros en la
yema de los huevos.
Conclusiones
• Los fosfolípidos que podemos encontrar en la
yema de huevo de una pata y una gallina son
los mismos
• La Isolecitina es un fosfolípido que contiene
colina y presenta dobles enlaces en su
estructura.
• La esfingomielina posee grupos fosfato,
contiene colina y presenta dobles enlaces en su
estructura
• La fosfatidilcolina es un fosfolípido que
contiene colina y presenta insaturaciones.
• La fosfatidilserina es un fosfolípido que
contiene grupos amino y presenta dobles
enlaces.
• La fosfatidiletanol-amina posee en su
estructura grupos fosfato, un grupo amino y
presenta insaturaciones.
• Los lípidos neutros en las yemas de huevo no
poseen grupo fosfato, pero si presentan dobles
enlaces en su estructura.
Referencias
1. Carey, F. A. & Giuliano, R. M. Química
orgánica. México: McGraw education, novena
edición; pp. 1162-1163.
2. McMurry, J. (2012). Química orgánica.
México: CENAGE Learning, octava edición;
pp. 1088-1089; 1094-1096.
 3. Nelson, D. Cox, M. “Lehninger: principios de Imagen 3. Estructura química de Fosfatidilcolina.
la bioquímica”. Quinta edición. Editorial
omega. Pp 349-352. (2009)
4. Mathew.C, van Holde.K, Ahern.G,
“Bioquímica” TERCERA EDICIÓN. Editorial
Adisson Wesley.
Anexo
Tabla II. Ventajas y desventajas de un
cromatograma pequeño y uno grande
Ventajas Desventajas
Cromatograma Los resultados se Los resultados Imagen 4. Estructura química de Fosfatidiletanolamina.
(capa fina) obtienen en un en no se mantienen
una menor cantidad con el tiempo, ya
de tiempo. que comienzan a
La separación es mas despintarse.
precisa. En las
Pueden usarse aplicaciones de
reveladores la muestra, debe
corrosivos, que sobre tenerse cuidado
papel destruirían el de no maltratar
cromatograma la silica de gel
Cromatograma Los resultados, El tiempo para
(en papel) aunque tenues se obtener los
pueden mantener por resultados desde Imagen 5. Estructura química de grasas neutras o triacilglicéridos.
mucho más tiempo el secado hasta
Al ser la fase el revelado de
estacionaria una hoja las muestras es
de papel de celulosa mucho mayor a
con una capa de la capa fina.
agua, no se corre el Al tener como
riesgo de dañar los fase estacionaria
resultados al celulosa, deben
manipular el evitarse usar
cromatograma. reveladores
corrosivos. Imagen 6. Estructura química de Esfingomielina.

Imagen 2. Estructura química de Fosfatidilserina.

Imagen 7. Estructura quimica de Lisofasfatidil colina.