Pineda Cruz Fatima - 5QM1 - Sección 2- 14/02/2022

MÉTODOS DE ANÁLISIS
Determinación de proteínas por el método
de Bradford (microensayo)

Paso 1 PREPARACIÓN DE REACTIVOS (Reactivo de Bradford)

100 mg de azul
brillante de
Coomassie G-250

50 mL de
etanol al 96 %

añadir 100 mL de aforar a un litro Filtrar con papel guardar en frasco

H3PO4 al 85 % con agua destilada Whatman No. 1 oscuro a 4°C.

Paso 2 PREPARACIÓN DE REACTIVOS (Solución stock de proteínas)

albúmina bovina 0.2

mg/mL en solución en

en

en
hemoglobina bovina
0.20 mg/mL en solución Na2CO3 al 2 % NaOH 0.1 N

PREPARACIÓN DE REACTIVOS
Paso 3
PREPARACIÓN DE Paso 4 (Solución de trabajo de proteínas)
REACTIVOS (Solución de
alcohol ácido)
pH final de 1.

Aforar a 100 mL con agua aliícuota de 10 mL de la

etanol al 96 % adicionar 2.5 mL de HCl concentrado destilada. solución stock de proteína

Paso 5 Preparación de la curva tipo para determinación de proteínas.

Tubo 1 y 1´
100 μL de
solución de 400 μL de agua 500 μL de
destilada Reactivo de
proteína (20 Bradford
μg/mL)

Adicionar Adicionar
trascurridos
Cubrir el tubo con agitar por inversión 10 minutos
plástico autoadherente

ajustar el
Preparar una serie de tubos repitiendo espectrofotómetro a 0 leer con espectrofotómetro la
el proceso anterior pero con las de absorbancia con el absorbancia del tubo a 595 nm
cantidades que indica la TABLA 1 tubo 6

Paso 6 Análisis estadístico

preparar 10 tubos reposar 10 min

iguales al 3 de la curva
de calibración leer la absorbancia en ajustar el espectrofotómetro a 0 calcule la concentración de
espectrofotómetro a 595 nm de absorbancia con el tubo 6 proteínas (μg/mL) de cada tubo

Paso 7 Efecto de sustancias no proteínicas en el método de Bradford

300 μL de 500 μL de
solución de 100 μL de 100 μL de agua
sustancias de Reactivo de
proteína (20 destilada Bradford
interferencia
μg/mL)

Adicionar Adicionar Adicionar

Adicionar
Cubrir el tubo con
plástico autoadherente agitar por inversión

Sustancias no proteicas.
Fenol al 0.2 %
Detergente comercial al 0.2 %
SDS al 0.2 % reposar
Mercaptoetanol al 0.002 %
EDTA 6 mM 10 minutos
Preparar 5 tubos ajustar el
repitiendo el espectrofotómetro a 0 leer la absorbancia del
Completar la tabla 6 e proceso anterior de absorbancia con el tubo a 595 nm
interpretar los resultados tubo 6