UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

QUÍMICA FARMACÉUTICO BIOLOGICA.

SEPARACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE
PROTEÍNAS PLASMÁTICAS.

GRUPO: 1453 EQUIPO 1. INTEGRANTES:

 ROJAS VAZQUEZ JOSÉ MARÍA

 TORRES MARTÍNEZ ANAYANCI

PROFESOR:

FERNANDO FRANCISCO HERNÁNDEZ CLEMENTE.

SEPARACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS PLASMÁTICAS.

 OBJETIVOS

 Separar albúmina y globulina a partir de una muestra de sangre.

 Determinar cuantitativamente por medio de una curva estándar la
concentración de proteínas totales, albúmina y globulinas presentes en el
plasma por el método de Biuret.
 Separar las proteínas del plasma o suero sanguíneo, mediante la técnica de
electroforesis vertical en poliacrilamida (PAGE-SDS).
 Analizar las bandas obtenidas en el gel identificando a que tipo de proteína
corresponde
 Considerar la importancia que tiene la electroforesis de proteínas y sus
aplicaciones clínicas y de investigación.

DIAGRAMA DE FLUJO

Obtención de Material para Identificar la

Limpieza del área
muestra de venipunción: vena a
de punción con
sangre equipo Vacutainer puncionar
alcohol 70 %

Depositar agujas Vigilar el estado de mi

Inactivar El bisel de la aguja
en recipiente para donador Antes durante y
material de debe quedar hacia
punzocortantes después de venopunción
vidrio arriba
conteniendo

sangre/plasma en
solución de
hipoclorito diluido
1:20 x 30 min
 Separación y cuantificación de proteínas plasmáticas
Después de
Colocar 0.25 ml de centrifugar tomar 1 Agregar 1.5 mL
Centrifugar el tubo a
plasma en un vaso mL de la suspensión de éter etílico al
300 rpm durante 5
Adicionar 4.75 ml de y colocarlo en un resto, tapar yb
minutos y separar con
sulfato de sodio al tubo, etiquetar mezclar
cuidado el plasma
23% p/v como proteínas
totales

Centrifugar a
Después del centrifugado
Cuantificación de 2000 rpm durante
tomar 1 mlL de la capa
hemoglobina y 10 minutos
interior y colocarlos en un
curva estándar
tubo, etiquetar como
albuminas

RESULTADOS
Usar un color para los datos/cálculos del patrón y otro diferente para los de las muestras
problema. Con los datos de la imagen:

1) Calcular los mg de proteína en los tubos 3 al 7 considerando la solución patrón se

preparó con 0.700 g de albúmina en 200ml de NaOH 0.1 N.
Solución patrón.
0.700 g de albúmina 700 mg de albúmina mg
= =3.5
200 ml de NaOH 200 ml de NaOH ml
 ( 3.5mg
Tubo 3. ( 0.1ml solución albúmina )
1 ml solución )
albúmina
=0.35mg proteínas

Tubo 4.( 0.2ml solución albúmina) (

1 ml solución )
3.5 mg albúmina
=0.7 mg proteínas

Tubo 5.(0.3 ml solución albúmina) (

1ml solución )
3.5 mg albúmina
=1.05 mg proteínas

Tubo 6.(0.4 ml solución albúmina )(

1 ml solución )
3.5 mg albúmina
=1.4 mg proteínas

Tubo 7.(0.5 ml solución albúmina) (

1ml solución )
3.5 mg albúmina
=1.75 mg proteínas

2) Hacer la curva estándar con los datos anteriores y de absorbancia en la imagen.

Tabla 1. Datos para curva estándar.

Tubo Sol. Patrón (ml) Concentración (mg) Absorbancia

3 0.1 0.35 0.094
4 0.2 0.7 0.15
5 0.3 1.05 0.271
6 0.4 1.4 0.382
7 0.5 1.75 0.432

Curva estándar.

Curva estándar de proteínas totales, albúmina y

globulinas presentes en el plasma por el método
de Biuret
0.5
0.45 tubo 7; [VALOR DE Y]

0.4 tubo 6; [VALOR DE Y]

0.35
0.3 tubo 5; [VALOR DE Y]
Absorbancia

0.25
0.2
tubo 4; [VALOR DE Y]
0.15
tubo 3; [VALOR DE Y]
0.1
0.05
0
0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2
Concentración (mg)
 −3 2
y=mx+b y=0.2594285714 x−6.6∗10 r =0.98

3) Interpolar los datos de absorbancia de las muestras problema (tubos 1 y 2) en la

curva estándar y obtener los mg de proteínas en estos tubos con muestras problema.

4) Hacer las correcciones necesarias para obtener la concentración (mg/ml) de

Proteínas Totales y Albúmina en la muestra original (para la dilución considerar que se
mezcló un volumen de 0.50 ml de plasma con 9.5 ml de sulfato de sodio al 23%).
0.5 ml de plasma+ 9.5 ml de sulfato de sodio 23 %=10 ml
10 ml
por lo tanto la dilución es= =20 o , 1:20.
0.5 ml
Los datos de mg de las muestras problema(tubo 1 y 2) se dividen entre el volumen de alícuota que

se toma antes de la adición delreactivo en este caso es 0.5 ml y 1 ml .

 1.25 mg
Tubo 1. =2.5 mg /ml
0.5 ml

0.95 mg
Tubo 2. =0.95 mg/ml
1 ml

Los datos obtenidos en el punto anterior se multiplican por el factor de dilución de la

muestra problema, en este caso es 1:20 o, 20.

1.25 mg mg mg
Tubo 1. =2.5 (20 )=50 proteínas totales
0.5 ml ml ml

0.95 mg mg mg
Tubo 2. =0.95 ( 20 )=19 albúminas
1 ml ml ml

5) Calcular la concentración (mg/ml) aproximada de globulinas.

Globulinas : proteínastotales−albúmina

mg mg mg globulinas
Globulinas :50 −19 =31
ml ml ml

mg mg mg
Proteínas totales=50 Globulinas=31 Albúmina :19
ml ml ml

6) Convertir las 3 concentraciones anteriores a g/dL.

¿ 1 50 ( mg
ml )( 1000mg
1g
)( 1001 dLml )=5 dLg
(
¿ 2 19
mg
ml )( 1000mg
1g
)( 1001 dLml )=1.9 dLg
(
¿ 3 31
mg
ml )( 10001 gmg )( 1001 dLml )=3.1 dLg
7) COMPARAR LOS RESULTADOS OBTENIDOS CON LO ESPERADO Y HACER LA
DISCUSIÓN RESPECTIVA, INCLUYENDO LO YA MENCIONADO EN RELACIÓN CON
CONTROL DE CALIDAD EN EL DOCUMENTO DE CURVA ESTÁNDAR DEL
CLASSROOM.
Control de calidad.

 El coeficiente de correlación r 2 es mayor a 0.96 lo que indica que los valores son
confiables.
 Realizar lo indicado en control de calidad, correr al mismo tiempo muestras de
concentración conocida y si los resultados no varían más de 2 o 3 desviaciones
estándar, los resultados son correctos.
 Repetir la medición para las muestras con valores anormales, para descartar
errores. Comparar con el valor teórico, es posible que no concuerde y no significa
que el resultado sea incorrecto o no real.
CONCLUSIÓN
En conclusión al observar una adecuada linealidad de la curva estándar se llega a la
conclusión que los valores obtenidos son fiables y cercanos a los esperados lo cual hace
suponer que se ha realizado un trabajo de calculo correcto, viendo asi como el método es
eficaz para conocer la cantidad de proteínas plasmáticas de relevancia clínica en este
sentido establecemos una innegable relación simbiótica entre la química clínica y la
medicina para llegar a un diagnostico mucho mas certero que permita dar el mejor
tratamiento posible a los cuadros clínicos.

REFERENCIAS
- Aguilar-Santelises L, García-del Valle A, Corona-Ortega MT, Rangel-
Corona R, Cruz-Millán M. Antología del laboratorio de Bioquímica
Celular y de los Tejidos I (complemento). Material en CD e impreso.
México: FES Zaragoza; 2008.
- Harper HA, et al.Bioquímica de Harper. 28a ed. México: Mc Graw-Hill
Interamericana; 2010.
- Morán L. Obtención de muestras sanguíneas de calidad analítica. 1a ed.
México: Panamericana; 2001.

ANEXO:
a) Describan un caso del área clínica en que la determinación de Proteínas
Plasmáticas tenga importancia en el diagnóstico.
Cuando el organismo sufre alguna agresión (infección, traumatismo, intervención
quirúrgica, etc.) se inicia un proceso de reacción para hacerle frente. En el hígado
comienzan a sintetizarse las proteínas reactantes que cumplirán con una función
 protectora del organismo al limitar la agresión y contribuir la reparación. Durante este
proceso de reacción, la proporción de albúminas y globulinas cambia y se alteran las
propiedades fisicoquímicas del plasma. En caso de enfermedad, la concentración
total y la de distintas fracciones pueden verse alteradas, la determinación de las
proteínas totales sirve para el diagnóstico de distintas afecciones.
b) Incluyan una imagen de electroforesis No desnaturalizante de proteínas plasmáticas
donde se observe alguna anomalía clínica.

c) Revisen el documento Curva estándar 2 del classroom y digan cuáles son las
diferencias principales del procedimiento descrito respecto del procedimiento del
manual.
d) Revisen el documento Curva estándar 3 del classroom y expliquen a que se refiere
"diluciones seriadas".
R. En muchos casos se necesita preparar disoluciones con concentraciones
extremadamente bajas de un soluto, hasta tal punto en donde es imposible en la
práctica medir la cantidad necesaria de producto sólido o, el volumen de solución
madre. En estas situaciones resulta necesario preparar una solución de mayor
concentración (solución de stock o solución madre) y, hacer diluciones sucesivas a partir
de ésta hasta alcanzar la concentración deseada.