Nombre: Cardozo Román Rebeca Damaris

Grupo: 5_03

Vale 50/100
1. Con los datos de lo llevado a cabo en la práctica 2, y asumiendo que el valor
calculado de ACTIVIDAD ENZIMÁTICA = V0.
¿Cuál sería el valor de Km si Vmax = 2 V0?
Para determinar la actividad enzimática es necesario calcular la concentración de
glucosa.
Con la ecuación de la recta de la glucosa y = 2.8978x + 0.0188 despejamos la letra
x:
x= (0.192 - 0.0188)/ 2.8978 = 0.05976 mg/mL
Convertimos a gramos y después a moles
Vol de reacción (mL)= 1.5 PM Glucosa (g/mol)= 180.15
0.05976 mg 1g 1mol −7
⌈ 1.5 mL × × ⌉ =4.9758 x 10 mol
mL 1000 mg 180.15 g

Si multiplicamos x1000000 obtenemos:

0.49758 µmol
La serie 3 fue incubada por 10 minutos antes de agregar el DNS, por lo que
dividiremos para obtener la actividad enzimática.
µmol
0.49758 µmol ÷10 min=0.049758
min
Esto se realizó con cada tiempo de incubación. La mayor actividad enzimática fue
con un tiempo de incubación de 20 minutos.
µmol
Resultando una actividad enzimática = V0 de 0.157345
min

Actividad enzimática(µmol/min)
0.180000
0.160000
0.140000
0.120000 f(x) = 0.273483490729927 x + 0.0308011331013303
R² = 0.627545282721942
0.100000
0.080000
0.060000
0.040000
0.020000
0.000000
0.000000.050000.100000.150000.200000.250000.300000.350000.40000
 La figura 1. Gráfica de concentración de glucosa vs actividad enzimática.
Sabemos que Vmax = 2 V0
µ mol µ mol mol
Vmax = 0.157345 x 2 = 0. 31469 x E-6 = 3.1469 x 10 -7
min min min
Si la KM corresponde a la concentración de sustrato a la cual la velocidad de la
reacción es la mitad de la Vmax. Entonces:
Vmax [ S]
Km= −[S ]
V0
[S] = 0.025M
3.1469 x 10 - 7 M /min [0.025 M ]
Km= −[ 0.025 M ] =0. 0 25 M
1. 57345 x 10 - 7 M /min

Por lo tanto, Km = 0.025 M

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2. Representa mediante un dibujo/esquema/gráfico la proporcionalidad* que
guardan la actividad específica de una preparación enzimática (extracto
crudo enzimático) y su cantidad total de proteína antes y después de uno o
más pasos de purificación

*La proporcionalidad por supuesto no tiene que ser exacta pues representará
solo un ejemplo.
Figura 2. Pasos de purificación y AE.

La figura 2. Muestra una comparación entre la Actividad Específica sin purificar (en
color rojo), y la Actividad Específica de una enzima después de ciertos pasos de
purificación (en color azul).
La actividad específica, está dada por la actividad enzimática y la cantidad total de
proteína presente en una muestra. Las proteínas con actividad especifica describen
a las proteínas en las cuales se encuentran ligadas las enzimas de interés.
En el extracto crudo enzimático se encuentran restos de organelos tras la ruptura,
así como proteínas complementarias y de más impurezas o material que no resulta
útil en el proceso. Estas impurezas disminuyen de manera paulatina tras la
aplicación de métodos de purificación. Mientras más métodos sean aplicados
tendremos en mayor cantidad la proteína con Actividad Especifica, pero una menor
cantidad total de proteínas.