PROBLEMAS TIPO DE CÁLCULO DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA.

1. Se desea conocer la actividad específica de una solución de invertasa. Se mezclan 850 mL

de sacarosa con 0.15 mL de dilución de enzima 1:20. A los 5 minutos de reacción se liberan
368 mmol de azúcares reductores. La solución original de enzima contiene 0.15 g/L de
proteína.

A) Colocar datos en términos de U. (Si no se define U se usa la definición de EC).

B) Aplicar factores de dilución.
C) Actividad específica (U/mgp), no siempre se pide este paso.

I. Usando volumen de mezcla de reacción (850+150 microlitros o 0.85+0.15 mililitros).

368000 μmol μmol U
A) =7.36 × 104 =7.36 ×10 4 Actividad en la mezcla de reacción.
( 5 min ) ( 1 mL ) min mL mL

150 μL E 1
B) FD1=20; FD2: =0.15 ∴ FD 2= =6.67
8 50 μLS + 150 μL E 0.15

U U
Act=7.36 × 104 × 20× 6.67=9.82× 106 Actividad en la solución original de enzima.
mL mL

II. Usando volumen de enzima en A).

368000 μmol μmol U
A) =7.36 ×104 =4.91× 105 Actividad en la dilución de enzima.
( 5 min )( 0.15 mL ) min mL mL

B) FD1= 20; FD2 ya se aplicó al usar volumen de enzima en lugar del de reacción.
U U
Act=4.91× 105 ×20=9.8 1 ×106 Actividad en la solución original de enzima.
mL mL

C) [P]=150mg/L=0.15 mg/mL
U
9.81 ×10 6
mL U
Act Esp = =6.54 ×10 7
0.15 mg p /mL m gp

2. Se desea reducir en 95% el contenido de lactosa (50 g/L) de 500 L de leche pasteurizada.
Determinar la cantidad de enzima necesaria para llevar a cabo el proceso en 3 horas.

Cantidad a convertir =( 500 L ) ×(0.95) ×((50 g / L)/(342 g/mol))=69.44 mol

6.944 ×107 μmol 105 μmol 5
Actividad necesaria= =3 . 85 × =3.85× 10 U
180 min min

ADICIÓN AL PROBLEMA: Se cuenta con una enzima que contiene 8.5x10 6 U/L.
 8.5x106 U1L
3.85x105 Ux
x= 0.045L=45 mL

3. Para determinar la actividad proteolítica de harina de soya, se hace una solución con 1 g
de harina en 10 mL de regulador. Se mezclan 900 mL de caseína 2% con 600 mL de solución
enzimática, y a los 120 min de reacción, se liberaron 378 mM de tirosina. Si U= mmol/h,
¿cuál es la actividad proteolítica en la harina?

4. Se produce Taq Polimerasa mediante un cultivo de Escherichia coli recombinante. Se

emplea en el medio inicial 50 g/L de glucosa y 0.5 g/L de biomasa, sin actividad detectable.
Tras 8 horas de fermentación, restan 14 g/L de sustrato, hay 8.3 g/L de E coli y la dilución
1:200 del caldo integra 485 mmol de DNTP´s a material precipitable. Para la determinación
de actividad se mezclan 750 mL de mezcla maestra de PCR con 0.25 mL de la dilución del
caldo y se deja transcurrir la reacción durante 10 min. Si U=nm/min, calcular los
rendimientos de la fermentación.

ETAPA 1: Cálculos de actividad inicial y final.

DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD: Aplican para actividades inicial y final.

ACTIVIDAD INICIAL:0
ACTIVIDAD FINAL: FD= 200; 485 mmol
485000 nm U U
A) =194000 nm/min ml ¿=194000 =1.94 × 108 ¿
(10 min ⁡) (0.25 ml) mL L
8 U U
B) 1.94 ×10 ( 200 ) =3.88 ×1010
L L

ETAPA 2: Cálculos de rendimiento (con la actividad).

So= 50 g/L
Xo= 0.5 g/L
Po= Actividad inicial = 0

Sf= 14 g/L
Xf= 8.3 g/L
Pf= Actividad final =3.88x1010 U/L

8.3 g / L−0.5 g/ L 7.8 g x /L g

Y x/ s= = =0.2166 x
50 g /L−14 g/ L 36 gs / L gs

U U
3.88× 1010 −0 3.88 ×1010
L L U
Y p / s= = =1.07 ×109
50 g / L−14 g/ L 36 g s / L gs
 U U
3.88 ×1010 −0 3.88 ×1010
L L U
Y p / x= = =4.97 ×109
8.3 g /L−0.5 g / L 7.8 g x / L gx