INFORME NO 2: IDENTIFICACIÓN DE BIOMOLÉCULAS

NOMBRES: Diego Camilo Noguera, Diego Alejandro Muñoz

GRUPO: 1.3

RESUMEN
En el desarrollo de esta práctica, en la que se realizaron las pruebas de reconocimiento
cualitativas (pruebas que se detectan por medio de productos coloreados y de fácil
reconocimiento) para el reconocimiento de biomoléculas (las cuales son las constituyentes
de todos los seres vivos) que se encontraban en los diferentes patrones que se encontraban
a nuestra disposición, para los cuales, se realizaron las pruebas de Molish (Reactivo de
reconocimiento para carbohidratos), Biuret (Reactivo de reconocimiento para proteínas),
Difenilamina (Reactivo de reconocimiento para Ácidos nucleicos), lieberman-Buchard
(Reactivo de reconocimiento para lípidos insaponificables) y la reacción de saponificación
(Reacción de reconocimiento de lípidos saponificables), se hicieron con el objetivo de
identificar las diferentes biomoléculas (como lípidos, carbohidratos, ácidos nucleicos y
proteínas) de los diversos patrones que se emplearon en la práctica de laboratorio y
además, poder determinar así su posible función biológica, sus propiedades, naturaleza
química, usos y aplicaciones que estos componentes tengan.

Palabras clave: Molish, biuret, lieberman-buchard, difenilamina, ácidos nucleicos, proteínas,

biomoléculas, reacción de Saponificación.

ABSTRACT
In the development of this practice, in which the qualitative recognition tests (tests that are
detected by means of colored products and of easy recognition) were realized for the
recognition of biomolecules (which are the constituents of all living beings) that Were found
in the different patterns that were available to us, for which Molish tests (Carbohydrate
Recognition Reagent), Biuret (Protein Recognition Reagent), Diphenylamine (Recognition
Reagent for Nucleic Acids), Lieberman-Buchard and the saponification reaction were used
to identify the different biomolecules (such as lipids, carbohydrates, nucleic acids and
proteins) of the various patterns Which were used in laboratory practice and in addition, to
be able to determine its possible biological function, its properties, chemical nature, uses
and applications that these components have.

Key words: molish, biuret, lieberman-Buchard, diphenylamine, nucleic acids, proteins,

biomolecules, saponification reaction.
INTRODUCCIÓN:
Aunque hay gran diversidad de organismos vivos, la composición química y reacciones
metabólicas de los organismos parecen ser similares. La composición de los tejidos vivos y
no vivos también parecen ser similares en el análisis cualitativo. Varios análisis revelan
que la abundancia relativa de carbono, hidrógeno y oxígeno es más alta en los sistemas
vivos.

Todas las formas de vida se componen de sólo biomoléculas. Las biomoléculas son las
moléculas orgánicas, especialmente macromoléculas como las proteínas, los hidratos de
carbono en los organismos vivos. Todas las formas de vida, sean bacterias, algas, plantas o
animales están hechos de macromoléculas similares que son responsables de la vida. Todos
los compuestos de carbono que obtenemos de los tejidos vivos pueden ser llamados
biomoléculas. (Slabaugh & Seager, 2007).

1. Los hidratos de carbono:

Los carbohidratos son las moléculas orgánicas más abundantes en la naturaleza.
Están compuestos principalmente de los elementos carbono, hidrógeno y
oxígeno. Los hidratos de carbono pueden definirse como aldehídos o cetonas
polihidroxialquilaminas o compuestos que los producen en la hidrólisis. El término
"azúcar" se aplica a los carbohidratos solubles en agua y dulces al gusto.

Funciones de hidratos de carbono:

1. Son la fuente dietética más abundante de energía para todos los organismos.
2. Los carbohidratos son precursores para muchos compuestos orgánicos
(grasas, aminoácidos).
3. Los hidratos de carbono (como glicoproteínas y glicolípidos) participan en la
estructura de la membrana celular y las funciones celulares tales como el
crecimiento celular, la adhesión y la fertilización.
4. Los carbohidratos también sirven como la forma de almacenamiento de
energía (glucógeno) para satisfacer las demandas energéticas inmediatas del
cuerpo.
 Ilustración 1, Ejemplo de carbohidratos (Biology Discussion, 2016)
2. Lípidos:
Los lípidos son de gran importancia para el cuerpo como la principal forma
concentrada de almacenamiento de energía, además de su función estructural
celular y varias otras funciones bioquímicas. Como tal, los lípidos son un grupo
heterogéneo de compuestos.

Los lípidos pueden ser considerados como sustancias orgánicas relativamente

insolubles en agua, soluble en disolventes orgánicos apolares (alcohol, etc.
éter), potencialmente relacionados con ácidos grasos y utilizados por las células. A
diferencia de los polisacáridos, proteínas y ácidos nucleicos, los lípidos no son los
polímeros. Son moléculas en su mayoría pequeños.

Ilustración 2, Ejemplo de lípidos. (Biology Discussion, 2016)

3. proteínas:
Las proteínas son las moléculas orgánicas más abundantes del sistema viviente. Se
producen en cada parte de la célula y constituyen aproximadamente el 50% del peso
seco celular. Las proteínas forman la base fundamental de la estructura y función de
la vida.

Funciones de las proteínas: Las proteínas desempeñan una gran variedad de

funciones especializadas y esenciales en las células vivas. Estas funciones pueden ser
ampliamente agrupadas como estática (estructural) y dinámica.

funciones estructurales:
Ciertas proteínas realizan 'ladrillo y mortero' papeles y son los principales
responsables de la estructura y la fuerza del cuerpo. Estos incluyen colágeno y
elastina encuentran en la matriz ósea, sistema vascular y en otros órganos y a-
queratina presente en los tejidos de la epidermis.
Funciones dinámicas:
Las funciones dinámicas de las proteínas están más diversificadas en la naturaleza.
Estos incluyen proteínas que actúan como enzimas, hormonas, factores de
coagulación de la sangre, de inmunoglobulina, receptores de membrana, proteínas
 de almacenamiento, además de su función en el control genético, la contracción
muscular, la respiración, etc. Las proteínas que realizan funciones dinámicas se
consideran apropiadamente como los caballos de trabajo "de la célula.
4. Ácidos Nucleicos:
Los ácidos nucleicos, representados por el ADN (ácido desoxirribonucleico) y por el
ARN (ácido ribonucleico), son macromoléculas formadas por la unión de moléculas
más pequeñas llamadas nucleótidos. Son moléculas compuestas por grupos fosfato,
un monosacárido de cinco carbonos (pentosa) y una base nitrogenada.
(Biology Discussion, 2016)

Metodología:
1. Reconocimiento de Carbohidratos:

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

2ml negativo 2ml Rafinosa 2ml H. de trigo

2 gotas de Molish

Mezclar

1ml Á. Sulfúrico

Observar

Comparar

2. Reconocimiento de Proteínas:

Tubo 1 Tubo 1 Tubo 1

3ml negativo 3ml Gelatina 3ml Caseína

2ml de Molish

Agitar

Observar

Comparar

z
3. Reconocimiento de Lípidos Saponificables

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

1ml Extracto
1ml negativo 1ml Yema Huevo
de papa

3ml de NaOH
Perla ebullición

Baño María
3ml Agua destilada

Agitar Fuerte

Observar

4. Reconocimiento de Lípidos Insaponificables

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

2ml negativo 2ml Hígado en 2ml Colesterol

en Cloroformo Cloroformo en Cloroformo

1ml Anhídrido Acético

Agitar
3 gotas Á. Sulfúrico

Observar

5. Reconocimiento de ADN:

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

1ml negativo 1ml ADN 1ml Extracto

de cebolla

1ml Agua Destilada

Suspender
Baño Hielo Por 10
Minutos 1ml Difenilamina
Baño María 10 minutos
sin ebullición

Observar
ANÁLISIS DE RESULTADOS:

1. Carbohidratos
Reconocimiento de Carbohidratos
Muestra Reactivo Resultado Observación
se logró ver un anillo
de color violeta en la
Rafinosa +++
interfase del
compuesto
se logró ver un anillo
Molish de color violeta en la
Harina de trigo +++
interfase del
compuesto
no se logró ver ningún
Control Negativo - tipo de coloración, o
formación de un anillo
Al agregar 2 gotas del reactivo de molish a 2 ml de Rafinosa y harina de trigo, y
posteriormente agregar cuidadosamente 1 ml de ácido sulfúrico, se observó la formación
de un anillo violeta en la interfase por lo que se concluye que la prueba es positiva para
carbohidratos. Esto se debe esto se debe a que estos compuestos que son la leche, que
contiene lactosa, y la rafinosa, presentará numerosas y rápidas reacciones de
deshidratación provocadas por el H2SO4 del reactivo, formando hidroximetilfurfural, que, a
su vez, tiene una reacción por condensación con el alfa-naftol contenido en el reactivo,
liberando el color púrpura en el tubo de ensayo. (Herrera, Bolaños, & Lutz, 2003)
En el pre informe se determinó que las pruebas de rafinosa y harina de trigo iban a
reaccionar con el reactivo formando un anillo de color púrpura en la interfase, esto se
comprobó durante la práctica de laboratorio.

2. Proteínas:
Reconocimiento de Proteínas
Muestra Reactivo Resultado Observación
se logró observar una
Caseína Biuret +++ coloración morada -
violeta
 se logró observar una
Gelatina +++ coloración morada -
violeta
No se observó ningún
Control Negativo -
tipo de cambio.

Al agregar 2 ml del reactivo de biuret a 3 ml de caseína y gelatina, luego se agitó y se observó

una coloración morada lo que indica que la prueba es positiva para reconocimiento de
proteínas. Esto se debe a que los pares de electrones solitarios de 4 átomos de nitrógeno
en el enlace peptídico coordinan un ion de cobre (II) para formar el complejo de quelato.
El complejo quelato absorbe la luz a 540nm por lo que aparece violeta. Por lo tanto, un
cambio de color de azul a violeta indica que las proteínas están presentes.
Cuanto mayor es la concentración de enlaces peptídicos, mayor es la intensidad del color.
Si la concentración de enlaces peptídicos es baja -como cuando están presentes péptidos
de cadena corta- el cambio de color es de azul a rosa. (Brilliant Biology Student, 2016).
En el pre informe se predijo que la caseína y la gelatina reaccionan con el reactivo de biuret
arrojando una coloración entre azul y morada, lo cual, es verídico, debido a que esto se
pudo comprobar durante el experimento en el laboratorio.

3. Lípidos Saponificables
Reconocimiento de lípidos saponificables
Muestra Reactivo Resultado Observación
Se obtiene la
Yema de huevo +++ formación de un jabón
y una coloración café
NaOH No se generó ningún
Extracto de papa -
tipo de cambio
No se generó ningún
Control Negativo -
tipo de cambio

Al agregar 3 ml de NaOH al 15% con una perla de ebullición, a un 1 ml de yema de huevo y

colocar 20 minutos al baño maría, y posteriormente agregar 3 ml de agua destilada y agitar,
se observó una coloración café , lo que indica que la reacción es positiva para lípidos
saponificables, esto se debe a que estos lípidos reaccionan ante el hidróxido de sodio,
provocando una reacción saponificable en donde, por esta base, el lípido se somete a un
proceso de hidrólisis alcalina, en donde se obtiene glicerol y sales de metales alcalinos de
ácidos grasos, que se conocen como jabones, formando una interface, lo que indica la
presencia de lípidos saponificables. (Herrera, Bolaños, & Lutz, 2003)
Por lo contrario, el extracto de papa al no contener lípidos insaponificables (porque esta se
compone básicamente de polisacáridos como el almidón y vitaminas, que son derivadas de
ésteres), no podrá reaccionar con el hidróxido de sodio y no habrá ningún cambio en
prueba, por lo que la prueba será negativa para lípidos saponificables.
En el pre informe se determinó que solo la yema de huevo, al contener lípidos
saponificables, reaccionaría con el NaOH, formando una interface de color café, esto es
correcto debido a que se pudo comprobar durante la práctica de laboratorio.

4. Lípidos Insaponificables
Reconocimiento de lípidos insaponificables
Muestra Reactivo Resultado Observación
Se observó un color
café rojizo, dividido en
Hígado ++
3 capas, como en
degradé.
Lieberman - Se observó una
Buchard coloración verde
Colesterol +++
oscura, llegando casi a
la tonalidad negra
No se generó ningún
Control Negativo -
tipo de cambio

Al agregar 3 ml de cloroformo a 1 ml de extracto hígado y colesterol, mezclarlos y luego

agregar 1 ml de anhídrido acético de manera cuidadosa, y finalmente, agregar 3 gotas de
ácido sulfúrico, se observó cambio de coloración de las pruebas lo que indica la presencia
de lípidos insaponificables en las muestras, Este color comienza como un color purpúreo,
rosado y progresa a través a una luz verde entonces color verde muy oscuro. El color se
debe a que el grupo hidroxilo (-OH) del colesterol reacciona con los reactivos y aumenta la
conjugación de la de saturación en el anillo fusionado adyacente (Wikipedia, 2014)
En el pre informe se determinó que tanto el colesterol como el extracto de hígado de pollo
iban a poder reaccionar con el reactivo de Lieberman - Bouchard liberando una coloración
entre verde y negra, lo cual es correcto, debido a que se comprobó durante la práctica de
laboratorio.
 5. ADN:

Reconocimiento de ADN
Muestra Reactivo Resultado Observación
Se observó una
ADN +++ coloración azul
grisácea.
Difenilamina Se observó una
Extracto de cebolla +++
coloración grisácea.
No se generó ningún
Control Negativo -
tipo de cambio

Al agregar 1 ml de agua destilada a 1 ml del extracto de ácido nucleico y a 1 ml de extracto

de cebolla, luego al agregarles a estos 1 ml de difenilamina, mezclar y calentar por diez
minutos a baño maría, para finalmente, enfriar en baño con hielo, se notó un cambio de
color por parte de la cebolla a gris , y por parte del extracto de ácido nucleico a azul, lo que
indica que es positivo para la presencia de ADN; Esto se debe a que cuando el reactivo se
calienta con los ácidos nucleicos se rompen los enlaces fosfodiéster y se hidrolizan los
enlaces glucosídicos entre el azúcar y los purines. La 2-desoxi ribosa se somete a una
reacción de deshidratación para formar un hidroxi-aldehído, que reacciona con
Difenilamina para producir un color azul, lo que indica que la prueba es positiva (Rodriguez,
2017)

En el pre informe se determinó que tanto la cebolla y el extracto de ácido nucleico pueden
reaccionar con la difenilamina dando una coloración de gris a azul, esto es correcto ya que
se pudo comprobar durante la práctica de laboratorio.

Conclusiones:

Con el reactivo de molish, se pudo determinar la presencia de carbohidratos en las

muestras de rafinosa y en el extracto de harina de trigo, donde se pudo determinar
que su principal componente estructural es almidón, que es un gran polisacárido.
 También se pudo determinar que esta prueba reacciona con cualquier carbohidrato
en general, bien sea un monosacárido, oligosacárido o polisacárido.
Con el reactivo de biuret, se determinó que las pruebas de reconocimiento de
proteínas de la gelatina (que es una proteína compleja) y la caseína (proteína que se
encuentra en la leche), reaccionan con el reactivo permitiendo descubrir que estos
compuestos contienen proteínas en su estructura
Se pudo determinar con la reacción de saponificación que la muestra de yema de
huevo contenía un gran porcentaje de lípidos saponificables, en los que estos se
convierten en jabones y formar una. coloración café. Esto al igual que el extracto de
papa (que contiene vitaminas y almidón mayoritariamente) se determinó que este no
contiene lípidos saponificables.
Se tiene que con la prueba del reactivo de Lieberman - Bouchard, se pudo determinar
la presencia de lípidos insaponificables como los esteroides en el colesterol
(esteroide) y el extracto de hígado de pollo (que contiene un porcentaje de colesterol)
, reaccionó con el reactivo y se pudo determinar la presencia de estos lípidos en las
pruebas.
Con la prueba de reconocimiento de ADN con difenilamina, se determinó que el
extracto de ácido nucleico y el extracto de cebolla, contienen en su estructura ADN,
por lo que estos pudieron reaccionar con el reactivo y así se comprobó la existencia
de estos compuestos en sus respectivas estructuras.

Bibliografía
Biology Discussion. (2016). Biomolecules. Recuperado el 5 de Marzo de 2017, de
BiologyDiscussion.com: http://www.biologydiscussion.com/biomolecules/biomolecules-
top-4-classes-of-biomolecules/11169

Brilliant Biology Student. (2016). Biuret Test For Protein. Recuperado el 5 de Marzo de 2017, de
Brilliant Biology Student: http://brilliantbiologystudent.weebly.com/biuret-test-for-
protein.html

Glúcido. (s.f.). Recuperado el 8 de 3 de 2017, de Wikipedia, la enciclopedia libre:

http://es.wikipedia.org/wiki/Glúcido

Herrera, C., Bolaños, N., & Lutz, G. (2003). Quimica de alimentos: Manual de laboratorio. Costa
Rica: Rodrigo Facio. Recuperado el 5 de Marzo de 2017

Rodriguez, G. (2017). Ensayo Difenilamina. Recuperado el 5 de Marzo de 2017, de Scribd.com:

https://es.scribd.com/doc/64317825/Ensayo-de-difenilamina

Slabaugh, M., & Seager, S. (2007). Organic and Biochemistry for to day. USA: Pacific Groove: Books
Cole. Recuperado el 5 de Marzo de 2017