MANUAL DE PROCEDIMIENTOS HEMATOLOGICOS

OBJETIVO: Establecer y estandarizar los procedimientos realizados en

el área de hematologia que sirvan de ayuda diagnóstica al clínico.

ALCANCE: Será de utilidad para todos los profesionales y personal

técnico.
 INDICE

SECCION 1: OBTENCION DE MUESTRAS SANGUINEAS

1.1 OBJETIVO
1.2 OBTENCION DE SANGRE VENOSA
1.3 OBTENCION DE SANGRE VENOSA CON TUBOS AL VACIO
1.4 OBTENCION DE SANGRE CAPILAR.

SECCION 2: ANTICOAGULANTES

2.1 CARACTERISTICAS DE ANTICOAGULANTES USADOS EN

HEMATOLOGIA
2.2 ANTICOAGULANTES SOLIDOS
2.3 ANTICOAGULANTES LIQUIDOS.

SECCION 3: REALIZACION Y TINCION DE FROTIS SANGUINEOS

3.1 METODO DE LOS DOS PORTAOBJETOS

3.2 COLORACIONES USADAS
3.3 PREPARACION DE COLORANTES
3.4 TINCION CON COLORANTE WRIGHT

SECCION 4: HEMOGRAMA

4.1 RECUENTO LEUCOCITARIO EN CAMARA

4.2 DETERMINACION DE HEMATOCRITO
4.3 DOSAJE DE HEMOGLOBINA
4.4 FROTIS DE SANGRE PERIFERICA
4.5 FORMULA LEUCOCITARIA
4.6 PREPARACION DE LA SOLUCION DE TURK
SECCION 5: VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR

5.1 METODO DE WINTROBE

SECCION 6: RECUENTO DE RETICULOCITOS

6.1 METODO DE RECUENTO DE RETICULOCITOS

6.2 INDICE DE PRODUCCION MEDULAR (IPM)

SECCION 7: PORCENTAJE DE CELULAS LE

7.1 DEFINICION
7.2 METODO
7.3 INTERPRETACION

SECCION 8: PERFIL DE COAGULACION

8.1 PRINCIPIOS GENERALES
8.2 MECANISMO DE COAGULACION
8.3 EXPLORACION DE LA COAGULACION
8.4 ONTENCION DEL PLASMA
8.5 TIEMPO DE SANGRIA
8.5.1 METODO DE IVY
TIEMPO DE COAGULACION
8.6 TIEMPO DE PROTROMBINA
8.7 TIEMPO DE TROMBINA
8.8 FIBRINOGENO
8.9 RECUENTO DE PLAQUETAS
 OBTENCION DE MUESTRAS SANGUINEAS

OBJETIVO: Establecer y uniformizar criterios en el procedimiento

de obtención de muestras sanguíneas con un adecuado control de
calidad , ya que de ello depende que el resultado del análisis de la
muestra sea el correcto.
Se efectuará en ayunas o no , dependiendo de la prueba a usar.

1.2 OBTENCION DE SANGRE VENOSA

Materiales y Equipos requeridos

• Algodón
• Alcohol al 70%
• Ligadura de 25 a 30 cm. De largo
• Agujas de 20x1
• Tubos con anticoagulante EDTA tripotásico o dipotásico

Fundamento

Constituye el tipo de extracción sanguínea más comúnmente

empleado. El lugar de elección es generalmente la región venosa
antecubital la cual posee piel fina, móvil y venas de un grueso
calibre y relativamente superficiales. Las venas indicadas son la
cefálica, la cefálica mediana y la basílica mediana.

La mejor postura para el paciente es el decúbito dorsal. Si está

sentado, el brazo debe tener un buen apoyo. Las venas deben
inspeccionarse y evaluarse aplicando un torniquete en la parte
superior del brazo, unos cuatro centímetros por encima del lugar de
la puntura. Este debe apretarse sólo lo necesario para impedir la
circulación venosa de retorno.

Procedimiento

• Verificar que los elementos por utilizar estén listos, y que el

paciente se sienta cómodo
• Aplicar el torniquete aprox. Cuatro dedos por encima de la
flexión del codo.
• Limpiar la zona con Alcohol de 70% o alcohol yodado, en un
área de 2 pulgadas.
• El paciente deberá abrir y cerrar la mano durante unos
segundos y después la mantendrá cerrada, esto ayudará a
visualizar las venas superficiales.
• Se retira el estuche protector de la aguja
• Se coloca la aguja en dirección paralela a la vena, se perfora
la piel haciendo avanzar la aguja 0,5 -1 cm en el tejido
subcutáneo , luego se perfora la vena
• Retirar el torniquete e indicar al paciente que deje de hacer
puño. Se coloca el algodón seco encima de la punción y se
retira la aguja.
• Tapar y agitar el tubo por inmersión para homogenizar la
muestra con el anticoagulante.
 TOMA DE MU
SANGRE VEN

❚ Tranquilizar al
paciente
1.3 OBTENCION DE SANGRE VENOSA AL VACIO

❚ Distraerlo
Materiales y equipos requeridos
• Algodón
• Alcohol al 70%
• Ligadura

❚ Colocarle
• Tubos al vacío con anticoagulante EDTA
• Agujas con dispositivo para extracción de sangre al vacío.

cómodamente
❚ Proceder a la técnica
de la extracción
PROCEDIMIENTO

• Repetir los pasos 1 al 4

• Se retira el estuche protector de la aguja y éste se enrosca al
dispositivo para la extracción de sangre al vacío
• Se coloca la aguja en dirección paralela a la vena ,se perfora
la piel haciendo avanzar la aguja entre 0,5 y 1 cm. En el tejido
subcutáneo, se inserta el tubo al vacío por la aprte posterior y
no preocuparse por la cantidad de sangre extraída ya que el
mismo sonido del vacío avisará que la extracción de sangre
terminó.
• Retirar la ligadura
• Colocar un pedazo de algodón seco sobre la parte donde se
encuentra oculta la aguja. Sacar la aguja con un movimiento
rápido y depositarla en un descartador de agujas.
• Pedir al paciente que presione firmemente el algodón durante
3 minutos.
• Mezclar por inmersión suave la sangre con el anticoagulante.

VENTAJAS DE LA EXTRACCION DE SANGRE VENOSA

• Pueden hacerse repetidos exámenes con la misma muestra

• Parte de la muestra puede congelarse para referencia futura.

DESVENTAJAS DE EXTRACCION DE SANGRE VENOSA

• La punción es técnicamente difícil en niños, pacientes obesos

y pacientes en schock.
• Se debe evitar la hemólisis pues se puede obtener una
disminución en el recuento de eritrocitos.
• Evitar éxtasis venosa producida por el torniquete, pues puede
producir hemólisis y otros cambios que ponen la sangre en un
estado inadecuado
1.5 OBTENCION DE SANGRE CAPILAR

Fundamento: Cuando la cantidad de sangre que se precisa es muy

pequeña o cuando por diferente motivos no pueda practicarse una
punción venosa, debe recurrirse a la punción capilar.

Materiales Requeridos
• Algodón
• Alcohol al 70%
• Lancetas desechables

Procedimiento

• La sangre capilar se obtiene de la cara lateral del dedo medio

o anular en los adultos y del dedo gordo del pie o talón en
niños.
• Desinfectar la zona zona con alcohol al 70%, secar con
algodón estéril
• Punzar la piel con una lanceta estéril desechable
• Desechar la primera gota y recoger las siguientes en tubos
capilares.

Ventajas

• Puede obtenerse con facilidad

• Preferible para extensiones de sangre periférica

Desventajas

• Sólo se puede obtener pequeñas cantidades de sangre

• La sangre en capilares frecuentemente se hemoliza
• Los resultados no pueden ser comparados con los resultados
de pruebas venosas
• El recuento de eritrocitos y leucocitos así como el recuento de
plaquetas y reticulocitos no debe realizarse en sangre capilar
debido a la difícil estandarización del flujo sanguineo capilar.
Muestra capilar
 ANTICOAGULANTES

OBJETIVO: Mantener la sangre extraída incoagulable mediante la

adición de un anticoagulante.

DEFINICION: Sustancias que inhiben la formación del coágulo

mediante diversos mecanismos.

2.1 CARACTERISTICAS DE ANTICOAGULANTES

• No alterar el tamaño de los hematíes

• No producir hemólisis
• Evitar al máximo la agregación plaquetaria
• No alterar la morfología de los leucocitos.

2.2 ANTICOAGULANTES SOLIDOS

• EDTA: Es la sal disódica o tripotásica del ácido

etilendiaminotetra acético. Realizan su acción a través de un
efecto quelante sobre el calcio, al fijarlo impiden su activación
y por ende la coagulación sanguínea.

Ventajas:

• Respeta morfología eritrocitaria y leucocitaria

• Asegura la conservación de los elementos formes sanguíneos
• Al inhibir la aglutinación de las plaquetas, facilita su recuento o
su expresión semicuantitativa a través del frotis.
• La concentración recomendada es de 1,5mg/ml de sangre.
 Desventajas

• Usado en exceso afecta a los eritrocitos y a los leucocitos, a

los cuales les produce encogimiento y cambios en su forma,
por ello debe cuidarse de agregar la cantidad correcta de
sangre al anticoagulante.

2.3 ANTICOAGULANTE LIQUIDO

• CITRATO DE SODIO: Es ideal para las pruebas de
hemostasia .Actúa a través de la precipitación del calcio.La
concentración para las pruebas de hemostasia es en
proporción de 1:9 (0.5 de anticoagulante para 4.5ml de sangre
total)
 REALIZACION Y TINCION DE FROTIS SANGUINEO

Fundamento: Consiste en la extensión de una gota de sangre

sobre un portaobjetos empleando el canto biselado de otro
portaobjeto de igual dimensión.

• Microscopio • Lanceta
• Portas y cubre-objetos • Alcohol
• Soporte de preparaciones • Metanol

• Cubeta • Giemsa
Sangre obtenida por un pinchazo en el pulpejo del dedo

1. limpiar el pulpejo del dedo con una gota de alcohol, hacer una punción
para conseguir una gota de sangre.
2. Depositar la gota de sangre, en un lado y en el centro de un porta
bien limpio.
3. Seguidamente, con el empleo de un porta de borde esmerilado se
hace un frotis o extensión de sangre.

El porta con el que se hace la extensión debe deslizarse bien colocado y

lo más perfectamente aplicado en su borde contra el otro porta sobre el
que se hace la extensión. Sólo debe pasarse una vez, de forma continua e
ininterrumpida.

4. Es conveniente realizar dos o tres extensiones, con el fin de

seleccionar para la tinción la mejor lograda.
Las extensiones o frotis deben secarse al aire lo más rápidamente
posible. La desecación se facilita con movimiento en forma de
abanico, nunca soplando o por calor. La rápida desecación evita la
deformación de los glóbulos sanguíneos.
PARTES DE UN FROTIS SANGUINEO

Zona excesivamente gruesa: Se halla en la región inmediata al

punto de partida de la extensión (cabeza). En ella se aprecia
siempre un aumento de linfocitos.

Zona excesivamente fina: Corresponde al final de la extensión y

termina en un área donde las células adoptan una posición
acartonada (barbas).En esta región existe un exceso de
granulocitos y monocitos.

Zona ideal: Corresponde a la región intermedia del frotis y en ella

existe un reparto equilibrado de células.

TINCION DEL FROTIS SANGUINEO

El frotis, una vez seco, se fija y se tiñe mediante colorantes adecuados. Generalmente,
en los laboratorios hematológicos se emplean colorantes basados en la tinción de
Romanowsky, basado en una combinación de eosina y azul de metileno.

Con la tinción de los elementos formes de la sangre se pueden distinguir los siguientes
aspectos morfológicos de las células:
1.- La forma, dimensión y contorno de los hematíes (de color rosa pálido), leucocitos
(células nucleadas) y plaquetas (pequeños corpúsculos).
2.- El núcleo: de color púrpura
3.- El citoplasma: de color azulado o gris en los linfocitos y monocitos.
4.- Granulaciones: mezcla de colores pardos (neutrófilos), anaranajadas (eosinófilos) y
azul oscuro (basófilos).

Aunque cada laboratorio emplea su receta, los colorantes y los métodos de tinción más
empleados son los siguientes

Tinción de Giemsa:
1.- Secar el frotis.
2.- Fijar con alcohol absoluto durante 3 minutos.
3.- Sumergir en solución de Giemsa (1 volumen de colorante y 9 de PBS) durante 10
minutos.
4.- Lavar con abundante agua y dejar secar antes de observar al microscopio.
Tinción de Wright:
1.- Secar el frotis.
2.- Teñir con colorante de Wright durante 1 minuto.
3.- Teñir con una mezcla de colorante en 2 ó 3 volúmenes de tampón (PBS) durante 10
minutos.
4.- Lavar en abundante agua y dejar secar antes de observar al microscopio.

Conservación de las extensiones de sangre periférica:

Para evitar que las extensiones se deterioren con el paso del tiempo, si éstas desean ser
conservadas, hay que aplicar algunas procedimientos adicionales. Generalmente, el
frotis se observa después de haberse secado después de la extensión y tinción, sin
colocar un cubreobjetos sobre el portaobjetos. Pero si deseamos conservar las
extensiones hay que colocar un cubreobjetos tras depositar sobre el portaobjetos una
substancia adherente. Si ésto se realiza después de observar el frotis con aceite de
inmersión, hay que limpiar la extensión con xilol para eliminar todo resto de aceite.
 PREPARACION DEL COLORANTE WRIGHT

REACTIVOS:
• Colorante wright 3.8g
• Metanol 1 lt
• Glicerina 15ml

PROCEDIMEINTO

Disolver en un mortero el colorante con la glicerina

Una vez disuelto se adiciona el metanol trasvasando a un frasco
oscuro .
Agitar.
Filtrar antes de usar

Observaciones

Una tinción satisfactoria debe dar los siguientes resultados:

Glóbulos Rojos: rojo amarillento.
Neutrófilos: cromatina púrpura oscuro, citoplasma rosa pálido y
gránulos lila.
Eosinófilos: cromatina púrpura oscuro, citoplasma azul pálido y
gránulos rojo brillante.
Basófilos: cromatina púrpura oscuro, gránulos azul oscuro.
Linfocitos: cromatina púrpura oscuro, citoplasma azul cielo.
Monocitos: cromatina púrpura medio, citoplasma azul grisáceo y
gránulos lila Plaquetas: centrómero violeta o púrpura, hialómero
azul claro.
Causas de error en la tinción del frotis sanguíneo.

Una extensión excesivamente azul (basófila).

Extensión gruesa.
Lavado insuficiente.
Tiempo tinción excesivamente prolongado.
Empleo de colorante excesivamente alcalino

Una coloración excesivamente rosada (acidófila).

Extensión delgada.
Exceso de buffer.
Empleo de colorante excesivamente ácido.

Presencia de precipitados. Puede evitarse mediante filtración del

colorante antes de su empleo.

Apreciación de artefactos morfológicos debido al

anticoagulante. Cuando el frotis se realiza con sangre recolectada
con EDTA, es muy importante no esperar más de 2 horas de la
extracción, ya que pueden aparecer alteraciones morfológicas
imprevisibles de las células sanguíneas.
 HEMOGRAMA

El Hemograma de Shilling constituye uno de los exámenes de

laboratorio más usados en el campo de la hematología comprende
las siguientes pruebas:

RECUENTO LEUCOCITARIO