MANUAL DE PROCEDIMIENTOS HEMATOLOGICOS

OBJETIVO: Establecer y estandarizar los procedimientos realizados en el área de hematologia que sirvan de ayuda diagnóstica al clínico. ALCANCE: Será de utilidad para todos los profesionales y personal técnico.

4 OBJETIVO OBTENCION DE SANGRE VENOSA OBTENCION DE SANGRE VENOSA CON TUBOS AL VACIO OBTENCION DE SANGRE CAPILAR.2 2.1 2.INDICE SECCION 1: OBTENCION DE MUESTRAS SANGUINEAS 1.3 CARACTERISTICAS DE ANTICOAGULANTES USADOS EN HEMATOLOGIA ANTICOAGULANTES SOLIDOS ANTICOAGULANTES LIQUIDOS.1 1.2 4.6 RECUENTO LEUCOCITARIO EN CAMARA DETERMINACION DE HEMATOCRITO DOSAJE DE HEMOGLOBINA FROTIS DE SANGRE PERIFERICA FORMULA LEUCOCITARIA PREPARACION DE LA SOLUCION DE TURK .2 1.5 4.2 3.3 1.3 3. SECCION 3: REALIZACION Y TINCION DE FROTIS SANGUINEOS 3.1 4.3 4. SECCION 2: ANTICOAGULANTES 2.4 4.1 3.4 METODO DE LOS DOS PORTAOBJETOS COLORACIONES USADAS PREPARACION DE COLORANTES TINCION CON COLORANTE WRIGHT SECCION 4: HEMOGRAMA 4.

5 TIEMPO DE SANGRIA 8.9 RECUENTO DE PLAQUETAS .2 MECANISMO DE COAGULACION 8.4 ONTENCION DEL PLASMA 8.7 TIEMPO DE TROMBINA 8.1 METODO DE IVY TIEMPO DE COAGULACION 8.3 EXPLORACION DE LA COAGULACION 8.SECCION 5: VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR 5.1 METODO DE WINTROBE SECCION 6: RECUENTO DE RETICULOCITOS 6.1 PRINCIPIOS GENERALES 8.8 FIBRINOGENO 8.3 INTERPRETACION SECCION 8: PERFIL DE COAGULACION 8.1 DEFINICION 7.2 INDICE DE PRODUCCION MEDULAR (IPM) SECCION 7: PORCENTAJE DE CELULAS LE 7.2 METODO 7.6 TIEMPO DE PROTROMBINA 8.5.1 METODO DE RECUENTO DE RETICULOCITOS 6.

Las venas deben inspeccionarse y evaluarse aplicando un torniquete en la parte superior del brazo. Se efectuará en ayunas o no . Las venas indicadas son la cefálica. De largo • Agujas de 20x1 • Tubos con anticoagulante EDTA tripotásico o dipotásico Fundamento Constituye el tipo de extracción sanguínea más comúnmente empleado. móvil y venas de un grueso calibre y relativamente superficiales. la cefálica mediana y la basílica mediana. La mejor postura para el paciente es el decúbito dorsal. ya que de ello depende que el resultado del análisis de la muestra sea el correcto. Si está sentado. unos cuatro centímetros por encima del lugar de . el brazo debe tener un buen apoyo.2 OBTENCION DE SANGRE VENOSA Materiales y Equipos requeridos • Algodón • Alcohol al 70% • Ligadura de 25 a 30 cm. dependiendo de la prueba a usar. El lugar de elección es generalmente la región venosa antecubital la cual posee piel fina. 1.OBTENCION DE MUESTRAS SANGUINEAS OBJETIVO: Establecer y uniformizar criterios en el procedimiento de obtención de muestras sanguíneas con un adecuado control de calidad .

se perfora la piel haciendo avanzar la aguja 0. luego se perfora la vena • Retirar el torniquete e indicar al paciente que deje de hacer puño.5 -1 cm en el tejido subcutáneo . Este debe apretarse sólo lo necesario para impedir la circulación venosa de retorno. . Se coloca el algodón seco encima de la punción y se retira la aguja. Cuatro dedos por encima de la flexión del codo. esto ayudará a visualizar las venas superficiales. • Tapar y agitar el tubo por inmersión para homogenizar la muestra con el anticoagulante. • Se retira el estuche protector de la aguja • Se coloca la aguja en dirección paralela a la vena. • Limpiar la zona con Alcohol de 70% o alcohol yodado.la puntura. en un área de 2 pulgadas. • El paciente deberá abrir y cerrar la mano durante unos segundos y después la mantendrá cerrada. Procedimiento • Verificar que los elementos por utilizar estén listos. y que el paciente se sienta cómodo • Aplicar el torniquete aprox.

„ Proceder a la técnica de la extracción .3 OBTENCION DE SANGRE VENOSA AL VACIO Materiales y equipos requeridos • Algodón • Alcohol al 70% • Ligadura • Tubos al vacío con anticoagulante EDTA • Agujas con dispositivo para extracción de sangre al vacío.TOMA DE MU SANGRE VEN „ Tranquilizar al paciente „ Distraerlo „ Colocarle cómodamente 1.

• Evitar éxtasis venosa producida por el torniquete. pacientes obesos y pacientes en schock. • Se debe evitar la hemólisis pues se puede obtener una disminución en el recuento de eritrocitos.5 y 1 cm.se perfora la piel haciendo avanzar la aguja entre 0. • Mezclar por inmersión suave la sangre con el anticoagulante. VENTAJAS DE LA EXTRACCION DE SANGRE VENOSA • Pueden hacerse repetidos exámenes con la misma muestra • Parte de la muestra puede congelarse para referencia futura.PROCEDIMIENTO • Repetir los pasos 1 al 4 • Se retira el estuche protector de la aguja y éste se enrosca al dispositivo para la extracción de sangre al vacío • Se coloca la aguja en dirección paralela a la vena . En el tejido subcutáneo. Sacar la aguja con un movimiento rápido y depositarla en un descartador de agujas. • Pedir al paciente que presione firmemente el algodón durante 3 minutos. se inserta el tubo al vacío por la aprte posterior y no preocuparse por la cantidad de sangre extraída ya que el mismo sonido del vacío avisará que la extracción de sangre terminó. pues puede producir hemólisis y otros cambios que ponen la sangre en un estado inadecuado . DESVENTAJAS DE EXTRACCION DE SANGRE VENOSA • La punción es técnicamente difícil en niños. • Retirar la ligadura • Colocar un pedazo de algodón seco sobre la parte donde se encuentra oculta la aguja.

debe recurrirse a la punción capilar. .1. • Desinfectar la zona zona con alcohol al 70%. Ventajas • Puede obtenerse con facilidad • Preferible para extensiones de sangre periférica Desventajas • Sólo se puede obtener pequeñas cantidades de sangre • La sangre en capilares frecuentemente se hemoliza • Los resultados no pueden ser comparados con los resultados de pruebas venosas • El recuento de eritrocitos y leucocitos así como el recuento de plaquetas y reticulocitos no debe realizarse en sangre capilar debido a la difícil estandarización del flujo sanguineo capilar. Materiales Requeridos • Algodón • Alcohol al 70% • Lancetas desechables Procedimiento • La sangre capilar se obtiene de la cara lateral del dedo medio o anular en los adultos y del dedo gordo del pie o talón en niños. secar con algodón estéril • Punzar la piel con una lanceta estéril desechable • Desechar la primera gota y recoger las siguientes en tubos capilares.5 OBTENCION DE SANGRE CAPILAR Fundamento: Cuando la cantidad de sangre que se precisa es muy pequeña o cuando por diferente motivos no pueda practicarse una punción venosa.

Muestra capilar .

ANTICOAGULANTES OBJETIVO: Mantener la sangre extraída incoagulable mediante la adición de un anticoagulante. Ventajas: • Respeta morfología eritrocitaria y leucocitaria • Asegura la conservación de los elementos formes sanguíneos • Al inhibir la aglutinación de las plaquetas. • 2. DEFINICION: Sustancias que inhiben la formación del coágulo mediante diversos mecanismos. facilita su recuento o su expresión semicuantitativa a través del frotis. Realizan su acción a través de un efecto quelante sobre el calcio.2 ANTICOAGULANTES SOLIDOS • EDTA: Es la sal disódica o tripotásica del ácido etilendiaminotetra acético. al fijarlo impiden su activación y por ende la coagulación sanguínea. 2. • La concentración recomendada es de 1. .1 CARACTERISTICAS DE ANTICOAGULANTES No alterar el tamaño de los hematíes • No producir hemólisis • Evitar al máximo la agregación plaquetaria • No alterar la morfología de los leucocitos.5mg/ml de sangre.

a los cuales les produce encogimiento y cambios en su forma.5 de anticoagulante para 4.5ml de sangre total) .La concentración para las pruebas de hemostasia es en proporción de 1:9 (0.Desventajas • Usado en exceso afecta a los eritrocitos y a los leucocitos.Actúa a través de la precipitación del calcio.3 ANTICOAGULANTE LIQUIDO • CITRATO DE SODIO: Es ideal para las pruebas de hemostasia . 2. por ello debe cuidarse de agregar la cantidad correcta de sangre al anticoagulante.

REALIZACION Y TINCION DE FROTIS SANGUINEO Fundamento: Consiste en la extensión de una gota de sangre sobre un portaobjetos empleando el canto biselado de otro portaobjeto de igual dimensión. • • • • Microscopio Portas y cubre-objetos Soporte de preparaciones Cubeta • • • • Lanceta Alcohol Metanol Giemsa .

La rápida desecación evita la deformación de los glóbulos sanguíneos. con el empleo de un porta de borde esmerilado se hace un frotis o extensión de sangre. 2. Es conveniente realizar dos o tres extensiones. . 4. nunca soplando o por calor. con el fin de seleccionar para la tinción la mejor lograda. Sólo debe pasarse una vez. hacer una punción para conseguir una gota de sangre. 3. Seguidamente. limpiar el pulpejo del dedo con una gota de alcohol. en un lado y en el centro de un porta bien limpio. El porta con el que se hace la extensión debe deslizarse bien colocado y lo más perfectamente aplicado en su borde contra el otro porta sobre el que se hace la extensión. Depositar la gota de sangre. La desecación se facilita con movimiento en forma de abanico. Las extensiones o frotis deben secarse al aire lo más rápidamente posible.Sangre obtenida por un pinchazo en el pulpejo del dedo 1. de forma continua e ininterrumpida.

4. En ella se aprecia siempre un aumento de linfocitos...Lavar con abundante agua y dejar secar antes de observar al microscopio. Zona ideal: Corresponde a la región intermedia del frotis y en ella existe un reparto equilibrado de células. una vez seco. dimensión y contorno de los hematíes (de color rosa pálido). Zona excesivamente fina: Corresponde al final de la extensión y termina en un área donde las células adoptan una posición acartonada (barbas).El núcleo: de color púrpura 3.La forma.. basado en una combinación de eosina y azul de metileno. anaranajadas (eosinófilos) y azul oscuro (basófilos).Fijar con alcohol absoluto durante 3 minutos.. TINCION DEL FROTIS SANGUINEO El frotis. Aunque cada laboratorio emplea su receta. . Con la tinción de los elementos formes de la sangre se pueden distinguir los siguientes aspectos morfológicos de las células: 1.Sumergir en solución de Giemsa (1 volumen de colorante y 9 de PBS) durante 10 minutos.Secar el frotis. 3.En esta región existe un exceso de granulocitos y monocitos. 4.Granulaciones: mezcla de colores pardos (neutrófilos).. 2. 2. los colorantes y los métodos de tinción más empleados son los siguientes Tinción de Giemsa: 1.El citoplasma: de color azulado o gris en los linfocitos y monocitos.. leucocitos (células nucleadas) y plaquetas (pequeños corpúsculos). se fija y se tiñe mediante colorantes adecuados..PARTES DE UN FROTIS SANGUINEO Zona excesivamente gruesa: Se halla en la región inmediata al punto de partida de la extensión (cabeza).. Generalmente. en los laboratorios hematológicos se emplean colorantes basados en la tinción de Romanowsky.

el frotis se observa después de haberse secado después de la extensión y tinción.Teñir con colorante de Wright durante 1 minuto. sin colocar un cubreobjetos sobre el portaobjetos.Teñir con una mezcla de colorante en 2 ó 3 volúmenes de tampón (PBS) durante 10 minutos.Tinción de Wright: 1. Si ésto se realiza después de observar el frotis con aceite de inmersión. hay que aplicar algunas procedimientos adicionales. Pero si deseamos conservar las extensiones hay que colocar un cubreobjetos tras depositar sobre el portaobjetos una substancia adherente. .Secar el frotis.. si éstas desean ser conservadas. 4. Generalmente. 2. 3..Lavar en abundante agua y dejar secar antes de observar al microscopio.. hay que limpiar la extensión con xilol para eliminar todo resto de aceite.. Conservación de las extensiones de sangre periférica: Para evitar que las extensiones se deterioren con el paso del tiempo.

Basófilos: cromatina púrpura oscuro. . Eosinófilos: cromatina púrpura oscuro.8g 1 lt 15ml Disolver en un mortero el colorante con la glicerina Una vez disuelto se adiciona el metanol trasvasando a un frasco oscuro . Linfocitos: cromatina púrpura oscuro. Agitar. citoplasma azul cielo. gránulos azul oscuro. hialómero azul claro. Filtrar antes de usar Observaciones Una tinción satisfactoria debe dar los siguientes resultados: Glóbulos Rojos: rojo amarillento. Monocitos: cromatina púrpura medio. citoplasma rosa pálido y gránulos lila.PREPARACION DEL COLORANTE WRIGHT REACTIVOS: • Colorante wright • Metanol • Glicerina PROCEDIMEINTO 3. Neutrófilos: cromatina púrpura oscuro. citoplasma azul grisáceo y gránulos lila Plaquetas: centrómero violeta o púrpura. citoplasma azul pálido y gránulos rojo brillante.

Puede evitarse mediante filtración del colorante antes de su empleo. Extensión delgada. Presencia de precipitados. ya que pueden aparecer alteraciones morfológicas imprevisibles de las células sanguíneas. Exceso de buffer. Lavado insuficiente. Cuando el frotis se realiza con sangre recolectada con EDTA. Una extensión excesivamente azul (basófila). Tiempo tinción excesivamente prolongado. . es muy importante no esperar más de 2 horas de la extracción. Extensión gruesa. Empleo de colorante excesivamente alcalino Una coloración excesivamente rosada (acidófila). Empleo de colorante excesivamente ácido.Causas de error en la tinción del frotis sanguíneo. Apreciación de artefactos morfológicos debido al anticoagulante.

HEMOGRAMA El Hemograma de Shilling constituye uno de los exámenes de laboratorio más usados en el campo de la hematología comprende las siguientes pruebas: RECUENTO LEUCOCITARIO .

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