Análisis Hematológico

Tema 1 

RECOGIDA Y PROCESADO DE LAS MUESTRAS  

● Extracción de sangre
● Aditivos para recoger sangre
● Fraccionamiento de la sangre
● Conservación de las muestra

Sangre: tejido utilizado para diagnosticar, evolución patología, respuesta terapéutica...

Características 

Composición de la sangre 

La sangre consta de dos grandes componentes

● Plasma sanguíneo (componente líquido). Está compuesto principalmente por agua,

en la cual se encuentran disueltas
○ Proteínas plasmáticas → albúminas, globulinas y fibrinógeno
○ Iones diversos → Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Cl-, HCO3-, PO4H2-, etc
○ Nutrientes → aminoácidos, glucosa, ácidos grasos
○ Metabolitos (productos de desecho) → urea, creatinina, ácido úrico, CO2...
○ Hormonas
● Elementos formes (componente celular)
○ Trombocitos
○ Leucocitos: granulocitos y agranulocitos

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○ Eritrocitos/hematíes
 

Macro-hematocrito 

1. Obtener 3-5 ml de sangre venosa. Llenar un tubo de ensayo con anticoagulante.

Mezclar invirtiendolo 60 veces.
2. Se llena un tubo de Wintrobe hasta la marca de 0-10, utilizando una pipeta Pasteur
de tallo largo, introduciendola hasta el fondo y dejando salir lentamente la sangre a
medida que se va sacando la pipera, asegurándose de que la columna de sangre
sea continua, sin burbujas de aire (puede producir
hemólisis).
3. Centrifugar el tubo de Wintrobe a 3000 rpm durante
30 minutos.
4. La altura de la columna de eritrocitos sedimentados
(sin contar la capa blanca de leucocitos por encima
de ella) leída en centímetros se multiplica por 10
para ver el valor hematocrito expresado como
porcentaje, es decir, el volumen de células
centrifugadas de sangre. 

Micro-hematocrito 

1. Con la sangre que ya tenemos, llenamos el tubo capilar hasta las ¾ partes de su
longitud.
2. El extremo seco del tubo se sella con un poco de plastilina, o con ayuda del
mechero, girando el tubo para evitar derrames.
3. Centrifugamos el tubo 10000 rpm - 12 rpm, durante 5 minutos asegurándonos de
que el extremo cerrado de los tubos quede hacia afuera.
4. Sacamos los tubos de la microcentrífuga y se mide la columna de los hematíes,
realizando una regla de 3, los resultados se multiplican por 10 para dar la cifra del
hematocrito expresado en tanto por ciento

Es el método más ventajoso porque se necesita menos cantidad de muestra.

El suero sanguíneo es, principalmente, agua con sustancias disueltas tales como proteínas,
hormonas, minerales o dióxido de carbono. El plasma es la parte de la sangre que contiene
el suero y los factores de coagulación.

Si no se añade anticoagulante, se forman coágulos (formados por agregados plaquetarios,

red de fibrina…), se va retrayendo y va soltando líquido. Este líquido que queda después de
la coagulación sanguínea se denomina suero sanguíneo. El suero, a diferencia del plasma,
no contiene factores de coagulación.
En analítica, se utiliza más el plasma porque es más rápido y se separa muy bien. Para
obtener suero, se tarda más ya que se tiene que formar el coágulo y puede ser muy
irregular, lo que dificulta la obtención y extracción del suero. 

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Resultados 

Microhematocrito
● Regla (escuadra 1)
Macrohematocrito → 42% ○ 5,5 ------ 100%
○ 2,3 ------ 41,8%
● Regleta 2 → 42%

Punciones cutáneas/capilares 

● En recién nacidos, niños menores, pacientes con quemaduras severas y en

pacientes geriátricos con venas frágiles.
● La sangre capilar es una mezcla de sangre venosa, arterial y liquido tisular
● Las muestras pueden generar resultados ligeramente diferentes
● Los recuentos de GB se elevan a un 15-20% en comparación con la sangre venosa
● La glucosa se encuentra alta (glucómetros)

Se puede utilizar una lanceta para obtener sangre del dedo de la mano. En el talón, debe
obtenerse solo de ciertos puntos, en general en las zonas exteriores.

Obtención de la muestra 

Se suele obtener de una arteria cuando se quieren determinar gases. Para el resto de los
parámetros, se prefiere la sangre venosa porque es más fácil de localizar y son más
superficiales.
La vena cubital es la que se utiliza con más frecuencia en la punción venosa, es la más
grande, está cercana a la piel y es la menos dolorosa.
En pacientes con venas difíciles, maltratadas por haber sufrido extracciones frecuentes y
tratamientos intravenosos, obesos o en niños, se utilizan otras venas de la parte posterior
del brazo, las muñecas, las manos, el cuello, los tobillos o los pies.

Procedimiento 

1. Volante de solicitud e identificación del paciente y preguntar cualquier dato

necesario.
2. Verificar la disponibilidad de todo el material necesario.
3. Seleccionar la zona de inserción de la aguja por palpación con el dedo índice.
4. Aplicar el torniquete entre 7,5 y 10 cm por encima del punto de punción.
5. Colocar el brazo extendido
6. Desinfectar el área con isopropanol u otro antiséptico.
7. Realizar la venopunción fijando la vena con el dedo pulgar por debajo del sitio e
insertar la aguja, con el bisel hacia arriba.
8. Recoger las muestras en los tubos e invertir de inmediato cada tubo. El orden de
recogida aconsejado es: tubos estériles para hemocultivo, tubos sin aditivos y
finalmente los tubos con aditivos.
9. Liberar el torniquete.

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10. Una vez rellenado todos los tubos retirar la aguja y presionar con un algodón sobre
el punto de punción
11. Desechar el material de extracción en un contenedor apropiado

➢ No sondear. Es doloroso para el paciente y puede provocar un hematoma. Si no se

pudiese extraer la sangre, se retiraría el torniquete y la aguja
➢ No pinchar dos veces en el mismo sitio.
➢ No volver a pinchar a un paciente si no es capaz de localizar de nuevo la vena.
➢ No pinchar a un enfermo más de dos veces. Si el segundo intento no tuviera éxito,
que otro flebotomista obtenga la muestra de sangre.
➢ No verter sangre de un tubo a otro, se podría contaminar la muestra

Si la sangre dejara de fluir:

❏ La vena podría haberse colapsado, por lo que hay que asegurar el torniquete para
aumentar la repleción venosa. Si esta maniobra no tiene éxito, retirar la jeringuilla,
fijarse en el sitio de la punción, y volver a introducir la jeringuilla.
❏ El ensamblaje de la aguja/adaptador/tubo podría no estar bien hecho y cada vez que
se cambie de tubo la jeringuilla se saldría de la vena.

Tubo de analítica 

❏ Plástico o vidrio
❏ Con o sin aditivos
❏ Distintos colores del tapón
❏ Con vacío

Tubo tapa roja

❖ Uso: Química, inmunología, banco de sangre, derivados.
❖ Aditivo: Ninguno.
Tubo tapa amarilla
❖ Uso: Hormonas, niveles plasmáticos, marcadores tumorales.
❖ Aditivo: Gel – Separador.
Tubo tapa lila
❖ Uso: Hematología, biología molecular, líquidos biológicos, hemoglobina glicosilada.
❖ Aditivo: Anticoagulante EDTA.
Tubo tapa celeste
❖ Uso: Pruebas de Coagulación.
❖ Aditivo: Anticoagulante Citrato de sodio 3.2%.
Tubo tapa negra
❖ Uso: VHS.
❖ Aditivo: Anticoagulante Citrato de sodio 3.8%.
Tubo tapa gris
❖ Uso: Glicemia.
❖ Aditivo: Anticoagulante Fluoruro de sódio.
Tubos tapa verde
❖ Uso: Pruebas Bioquímicas, Electrolitos Plasmáticos, marcadores virales.
❖ Aditivo: Heparina de Litio.

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ANTICOAGULANTES  

Sustancias que evitan la coagulación de la sangre. La heparina impide la conversión de

protrombina en trombina mientras que el citrato, el oxalato y el EDTA fijan iones Calcio.
La sangre sin coagular es empleada en casi todo trabajo hematológico y algunos análisis
bioquímicos.

Mecanismo de acción
❖ Impedir que el calcio intervenga en la coagulación
➢ Precipitandolo: oxalatos
➢ Fijandolo en forma ionizada: citratos y EDTA
❖ Neutralización de la trombina (agentes antitrombínicos): heparina
❖ Remover la fibrina que se forma (sangre desfibrinada). La fibrina es una proteína
que contribuye a la formación de coágulo sanguíneo.

Oxalatos de amonio y de potasio

● 0,1ml/ml de sangre
● Ventajas
○ Precio
○ Fácil de preparar
○ Suministra muestras sanguíneas adecuadas para medir el hematocrito,
la hemoglobina y recuentos de glóbulos blancos y rojos.
○ hto, Hb, Gb, G.R.
● Desventajas
○ El frotis no es bueno ya que el oxalato produce una degeneración nuclear de
leucocitos y plasmolisis de los glóbulos rojos.

Un ​frotis de sangre es una técnica científica que consiste en la extensión de una

gota de s​ angre sobre la superficie de un ​portaobjetos,​ con el fin de analizarla
​ icroscopio.​
posteriormente al m

Citratos: sales disódicas

● Solución al 3,8%
● 1 parte de citrato por cada 9 partes de sangre
● Ideal para la coagulación

EDTA: Sequestrene
● Sal dipotásica o disódica
● 2 mg/ml de sangre
● Ideal para biometria hemática
● Ventajas
○ Permite recuentos celulares (glóbulos rojos, glóbulos blancos, plaquetas…)
○ Pueden preparase buenos frotis con morfología satisfactoria de leucocitos y
eritrocitos.

Heparina
● Ventaja

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○ Provoca una mínima hemólisis, lo que resulta apropiado para medir

electrolitos y estudiar la fragilidad de eritrocitos.
● Desventaja
○ No es conveniente para frotis debido a que produce una coloración azul
difusa.

Fluoruros
● 10mg/ml de sangre
● Se combina con calcio y actúa como veneno enzimático
● No solo anticoagulantes, sino también conservador
● Ideal para
○ Medir glucosa en sangre y LCR → Curva de tolerancia a la glucosa
○ Enviar sangre por correo
 
Desfibrinación. Técnica manual

La sangre desfibrinada es aquella desprovista de los factores de la coagulación.

● Para su obtención, ​se coloca la muestra de sangre por las paredes del matraz que
contiene las perlas de vidrio. El número de perlas de vidrio en el matraz será el
mismo que ml ​de sangre se vayan a desfibrinar.
● La sangre que está en el matraz se agita 10 minutos. A medida que transcurre este
tiempo, el ruido que hacían las perlas al chocar contra las paredes del matraz dejará
de oírse. Esto se debe a que, la fibrina que se va formando en el proceso de
coagulación, se deposita sobre ellas, atrapandolas.
● El resultado final es la fibrina pegada a las perlas.
● A partir de la sangre desfibrinada, se puede obtener suero por centrifugación.
● Ideal para morfología de glóbulos rojos y blancos → mayor cantidad de suero.

ADITIVOS DE LOS TUBOS DE RECOGIDA 

❖ Anticoagulantes
➢ Citrato sódico, EDTA, Heparina, Oxalato
❖ Procoagulantes
➢ Apropiados para ensayos donde se analice suero.
➢ El interior del tubo está recubierto de silicona y contiene minúsculas
partículas de sílice que aceleran la coagulación de la sangre. Las partículas
forman una película en la superficie interior para activar la coagulación
cuando los tubos se mezclan 5-8 veces por inversión.
❖ Gel separador
➢ Aumenta el rendimiento, pero puede intervenir en el análisis.
➢ Es un polímero inerte que forma una barrera entre el suero y el coagulo en la
centrifugación facilitando su extracción.
➢ Los tubos contienen una barrera de gel en la parte inferior. La densidad de
este material hace que se mueva hacia arriba durante la centrifugación,
donde forma una barrera que separa el suero del coágulo.

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Orden de obtención de muestras 

Para evitar posibles errores en los resultados debido a la contaminación cruzada de los
aditivos del tubo:

1) Tubo para cultivo de sangre

2) Tubos para suero sin aditivos
3) Tubos para coagulación
4) Tubos para suero con activador de coágulo, con o sin gel.
5) Tubos de Heparina con o sin gel separador de plasma.
6) Tubos con EDTA
7) Tubos para Glucosa
8) Otros

Los tubos con gel separador con

activadores de coágulo o
anticoagulantes son clasificados
como tubos con aditivos. Estos tubos
deben tomarse después del tubo de
coagulación (tapa azul) y antes de
otros tubos con aditivos (tapa verde,
lila, gris). Todos los tubos con
aditivos deben llenarse
completamente hasta el límite
dispuesto en el tubo.

Causas de rechazo de muestras para procesar 

➔ Muestra y petición con datos no coincidentes

➔ Petición sin identificar con código de barras
➔ Muestra con volumen incorrecto
➔ Muestra coagulada
➔ Muestra hemolizada

Errores más comunes 

➔ Muestras no etiquetadas
➔ Muestras con nombre del paciente errónea
➔ Anticoagulante inadecuado
➔ Muestras diluidas / hemoconcentradas
➔ Muestra coagulada
➔ Muestra hemolizada
➔ Muestra insuficiente 

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FRACCIONAMIENTO Y CONSERVACIÓN DE LA SANGRE  

Recipiente original tapado, si es posible, trabajar en tubo original.

Banco de sangre

La función de los anticoagulantes es mantener la integridad de la sangre

● Asegurar la supervivencia componentes

● Preservar la inalterabilidad de la membrana.
● Velar que los globulos blancos y plaquetas conserven su función por mayor tiempo.
● Conservar los factores de coagulación evitando la desnaturalización.
● Prevenir desarrollo microbiano.

Tipos de anticoagulantes 

I. ACD
○ Acido-citrato-dextrosa (21 días). Actualmente poco usado
II. CPD
○ Citrato-fosfato-dextrosa (28 días) estabiliza pH, mantiene reservas de ATP,
conserva niveles altos de 2,3-DGP
III. CPDA1
○ Citrato-fosfato-dextrosa-adenina (35 días) adenina para reservas de
nucleótidos de GR que estabilizan su membrana
IV. CPDA2
○ CPDA1 con mayor concentración de adenina y glucosa. (42 días)

Separación de componentes  

● Se mejora la supervivencia de cada uno de ellos, pues, permite almacenarlos a la

temperatura y condiciones requeridas para mantener su nivel óptimo de
funcionalidad.
● Se mejora la práctica transfusional, al hacerla más específica, y acorde con las
necesidades del receptor.
● Se permite la racionalización de los inventarios de los bancos de sangre

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Conservación hasta fraccionamiento

➔ temperatura ambiente 6h
➔ refrigeradas 8h

Fraccionamiento de la sangre  

La posibilidad de separar los componentes de la sangre permite optimizar una sola

donación. El paciente recibe solo el componente que necesita.

En la unidad de fraccionamiento del Centro de Transfusión de Galicia se lleva a cabo el

proceso de separación (CS) a partir de la donación de sangre, obteniendo dos productos
finales, concentrado de hematíes y plasma; y un producto intermedio buffy coat (BC) o capa
leucoplaquetar, de la que se consiguen plaquetas.

Todos los CS son filtrados, siendo el contenido residual de leucocitos inferior al millón por
unidad, para así minimizar y/o evitar posibles reacciones transfusionales febriles no
hemolíticas. A veces es preciso realizar algún tratamiento adicional en los CS, para
minimizar algún tipo de reacción o para aumentar la seguridad transfusional.

El almacenamiento de los diferentes CS se hace en las condiciones y a la temperatura que

especifica la normativa para cada componente:

​ n solución aditiva se mantienen a temperatura entre 2

❖ Los preparados de ​hematíes e
y 6o C, por un periodo máximo de 42 días.
❖ Los preparados de ​plaquetas ​se conservan entre 20 y 24o C durante 7 días, ya que
se emplean métodos de reducción de potenciales patógenos.
❖ Los componentes de ​plasma ​se almacenan congelados y su tiempo máximo de
almacenamiento es de 24 meses.

La sangre es un producto perecedero:

➢ Los glóbulos rojos se conservan a

+4oC y duran hasta 42 días.
➢ Las plaquetas se conservan en
agitación constante a temperatura
ambiente (+20-+22 oC) y tan solo
duran 5 días.
➢ El plasma se congela a-40oCy dura
hasta 2 años 

 
 
 
 
 
 
 
 
 

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Aféresis 

La aféresis es la técnica mediante la cual se separan los componentes de la sangre, siendo

seleccionados los necesarios y devueltos al torrente sanguíneo el resto de componentes.

La finalidad es la extracción de un componente sanguíneo destinado a la transfusión o al

tratamiento de algunas enfermedades que precisen la eliminación de un componente
patológico de la sangre.

Consiste en conectar por vía venosa al donante o al paciente a una máquina separadora de
células, se selecciona el producto a recolectar y el resto de la sangre es devuelta al
paciente o al donante.

Según el tipo de máquina y el producto que se pretende obtener, la aféresis puede durar
entre 30 minutos y dos horas.

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