UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS AGRÍCOLAS

CARERA DE INGENIEÍA AGRONÓMICA

CÁTEDRA DE BIOTECNOLOGIA

Nombre: Maholy Rengifo

Curso: 5° “B”

Tema: Resumen

Cultivo de semillas y material de campo

El cultivo in vitro se puede realizar con diversos fines, por ejemplo, obtener

plantas libres de virus, la micro propagación de plantas a gran escala, la conservación de

germoplasma, la recuperación de embriones o la obtención de plantas con nuevas

características.

El primer paso para realizar cultivo in vitro, es la esterilización del material de

partida a utilizar, para ello se emplean distintos compuestos, siendo el hipoclorito de

sodio el más común. Es necesario utilizar jabones a los desinfectantes, posteriormente

de la desinfección siguen lavados con agua esterilizada que eliminen los residuos de los

desinfectantes.

El material vegetal (semillas) es colocado en un malla y es desinfectado en una

solución de hipoclorito de sodio, sumergiéndolo por 10 min, para después trasladarlas a

un frasco con agua esterilizada, en el tercer lavado se deja el material vegetal de 5 a 10

minutos, para posteriormente colocarlo en una caja Petri y distribuirlo en un medio de

cultivo. Finalmente se sella las cajas y son trasladadas a la cámara de cultivo de plantas.
 En el material de campo se escogen los brotes y se introducen en una solución

de hipoclorito de sodio con detergente por 10 min, posteriormente se trasladan los

brotes a una solución de hipoclorito de sodio más concentrada para luego realizar los

lavados con agua esterilizada. Se colocan los brotes en un papel esterilizado para

eliminar la parte basal de los mismos, cada uno de los brotes de introducen en un tubo

de ensayo con medio de cultivo.

Rescate de embriones

Consiste en el aislamiento de los embriones de los óvulos de la planta y su

posterior cultivo en un medio estéril con los nutrientes esenciales que les permita

concluir su desarrollo. Los embriones que se pueden cultivar pueden ser:

1. Inmaduros: si el embrión no ha completado su desarrollo. Estos a

su vez se dividen según su estado de desarrollo:

1.1. Precoces o pro embriones: Estados globular y corazón

1.2. Avanzados: Estados torpedo, bastoncillo y cotiledona

2. Maduros: si provienen de semillas maduras

Se puede utilizar para superar barreras de incompatibilidad, problemas de

desarrollo y/o abscisión precoz y acortar el periodo de latencia que ocurre en algunas

semillas y en los procesos de mejora.

Aislamiento de protoplastos

Los protoplastos son células vegetales rodeadas de su membrana plasmática pero

sin pared celular, cuya eliminación se da a través de procesos mecánicos o enzimáticos.

 Procesos Enzimáticos: Capases de degradar los componentes de

la pared celular, se emplean: celulasas, pectinasas, hemicelulasas.

 Son una herramienta para la investigación en biología fundamental y aplicada,

ya que ayudan en el estudio de procesos de transporte y división celular, morfogénesis,

mutagénesis y selección. Así también pueden aplicarse en: la transformación genética

por introducción, absorción de ADN, hibridación somática, absorción de proteínas o

macromoléculas

En patología vegetal los protoplastos ayudan en: el estudio de la etiología de los

virus, absorción, procesos infectivos y replicación, la especificidad y modo de acción de

hongos patógenos, la evaluación de toxinas y la obtención y selección de clones

resistentes a diversos patógenos y productos fitosanitarios.

 Para la extracción de protoplastos es necesario:

 Materia vegetal

 Preparados comerciales de enzimas líticas

 Solutos osmóticamente activos

 Pinzas, placas de cultivo, microscopio, bisturí, tubos, micro pipetas, porta y

cubre objetos

Se corta el material vegetal en tiras finas y se incuban por una noche con la

solución enzimática. Tras la incubación se agita ligeramente la placa, para dispersar los

protoplastos y se toma toda la solución, en la cual también estarán presentes restos de

material vegetal. Para poder obtener solo protoplastos es necesario filtrar dicha

solución, el filtrado se centrifuga por 10 minutas de 1000 a 1500 rpm y finalmente los

protoplastos pueden ser observados en el microscopio.