Al completar la unidad de aprendizaje el alumno será capaz obtener explanes de diferentes

tejidos celulares de platas para realizar cultivos invito.

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA

Objetivo general
Obtener explanes de tejidos celulares para desarrollar técnicas de cultivo invito de manera
adecuada.

Objetivos específicos

 Obtención de explanes de plantas de interés para su micro propagación.

 Esterilización de explanes y pretratamientos.

FUNDAMENTO TEÓRICO

Explantes

Tejido vivo separado de su órgano propio y transferido a un medio artificial de crecimiento.

(Figura 1)

La selección del explante es un aspecto clave para tener éxito en el Cultivo de Tejidos, ya
que depende de:
 Su ubicación en la planta
 El tipo de tejido que contiene
 Su edad cronológica y fisiológica
 Su contenido endógeno de hormonas, entre otros.
 Figura 1.Tejido vivo separado de su órgano propio y transferido a un medio artificial de
crecimiento.

Naturaleza de los explantes

Los explantes son de diversa naturaleza, pueden ser porciones de tejido, células sueltas,
protoplastos, esporas, granos de polen o semillas. Con excepción de los óvulos y el polen,
los explantes están constituidos por tejidos y/o células somáticas.
Otros explantes como las yemas adventicias son más bien genéticamente inestables y
producen un alto grado de variabilidad en los clones, este procedimiento no es útil para la
producción de plántulas con una determinada característica de cultivo, pero si lo es para el
fitomejoramiento, ya que mediante esta variación semi–natural, es posible obtener nuevas
líneas de cultivo. (Figura 2)

Figura2.Se observan las partes de la planta de las cuales se puede obtener un

Elección del Explante en el Cultivo de explante.
Tejidos Vegetales
Para la elección del explante apropiado se debe tener en cuenta los siguientes aspectos:
 Objetivo del cultivo
 Posibilidad de contaminación con microorganismos
 Edad fisiológica
 Tamaño
 Época del año.

Objetivo del cultivo

 Si lo único que se quiere lograr es un sistema de callos para estudiar algún proceso
fisiológico, se puede cultivar cualquier órgano, tejido o célula viva.
 Si lo único que se busca es la inducción de callos– lo ideal es cultivar explantes
jóvenes, derivados de semillas en germinación, donde se obtienen respuestas
rápidas y, en general, hay menores problemas de contaminación con
microorganismos.
 Obtención de plantas con sanidad controlada, es muy común la utilización del cultivo
de tejidos, el explante ideal para ello es el meristema (dependiendo de la especie,
de 0,2-0,5mm de longitud) consistente del domo y de un par de primordios foliares.

Posibilidad de contaminación con microorganismos

De ser posible, se deben cultivar explantes de plantas donantes que crecen en condiciones
de invernadero, con ello se reduce sustancialmente las tasas de contaminación.

Por otra parte, es recomendable evitar el uso de explantes sucios (raíces, rizomas) que
provienen de plantas crecidas en macetas o en el campo, dado que en la mayoría de los
casos no es posible conseguir una buena desinfección de los mismos.

Edad fisiológica

Este es un aspecto de gran influencia en la morfogénesis. Como regla general se puede

decir que cuando más joven e indiferenciado se encuentre el explante a cultivar, mejor será
su respuesta in vitro.

En el caso de la micropropagación de plantas leñosas, la edad del explante es un factor

crítico. Si los tejidos son jóvenes, la micropropagación tiene mayores posibilidades de ser
exitosa que con tejidos maduros. Este hecho genera la necesidad de realizar tratamientos
de rejuvenecimiento de las plantas donantes de explantes.

Tamaño

En general, cuanto más grande sea el explante mayores serán las posibilidades de inducir
la proliferación de callos o la regeneración directa de órganos. Sin embargo, a mayor
tamaño de explante también son mayores las probabilidades de que los cultivos se
contaminen con microorganismos.

Ilustración3 Técnica para la obtención de un Explante

También es necesario tener en cuenta que existe un tamaño mínimo del explante, que
depende de la especie y del material vegetal, por debajo del cual no es fácil lograr el
establecimiento de los cultivos. Los explantes muy pequeños suelen requerir del empleo de
medios más complejos o de los denominados medios acondicionados.

Época del año

Es un factor que suelen tener mucha importancia en la micropropagación y que

generalmente está asociado al grado de dormición que presentan ciertos explantes (yemas,
por ejemplo) y también con la posibilidad de mayor o menor proliferación de
microorganismos.

RESULTADOS Y ANÁLISIS
 En la presente práctica se realizó la siembra in vitro de tres tipos de planta diferentes, así
como sus respectivos explantes. Después de llevar a cabo el procedimiento de siembra de
acuerdo al manual de prácticas de laboratorio, se procedió a dejar en la incubadora durante
una semana, las cajas petri. Regresando después de este tiempo a revisar las cajas,
observamos que en ninguna de ellas hubo crecimiento.
Los factores que pudieron influir para evitar el crecimiento de los explantes son la asepsia,
tanto del material, como de los alumnos, la preparación adecuada de los medios de cultivo
y la temperatura a la que se dejó incubando, posiblemente la incubadora no servía o dejo
de mantener la temperatura constante. Debido a esto, se hacen algunas recomendaciones
para garantizar el éxito de prácticas posteriores.

Recomendaciones:
- revisar que la incubadora se encuentre a la temperatura correcta

- Todo el material a utilizar debe esterilizarse y estar cubierto con papel o aluminio para evitar
que este se contamine.

- Se recomienda que solo se encuentren dos personas: uno para que se encargue de sembrar
el material in vitro y el otro para que lo apoye pasándole el material esto para evitar que se
infecten los medios de cultivo.

CONCLUSIONES

La biotecnología vegetal permite la transferencia selectiva de una mayor variedad de

información genética de una forma precisa y controlada mediante la utilización de técnicas
que permiten desarrollar variedades con caracteres específicos deseables y sin incorporar
los que no lo son.
En el cultivo de tejidos las separaciones de explante y las operaciones relacionadas con su
incubación in vitro, depende en gran medida del tipo de explante y del sistema de cultivo
empleada; por lo cual las técnicas que se empleen, no son exactamente las mismas
para meristemos. Los cultivos en vitro requieren técnicas heterogéneas donde
los explante requieren condiciones contraladas y asépticas.
Se concluye que si la siembra de material in vitro se realiza de forma aséptica: esterilizando
el material a utilizar, desinfectándose las manos con alcohol, los resultados son favorables,
es decir el material cultivado no se infecta de hongos o bacterias; también se concluye que
probablemente el manejo y uso del material no fue correcto y debido a esto no hubo
crecimiento de nuestros explantes en el medio de cultivo.

REFERENCIAS

ECURED. (22 de Marzo de 2018). Obtenido de

https://www.ecured.cu/Explantes_(Biotecnolog%C3%ADa_Vegetal)
Levitus, G. E. (12 de Noviembre de 2012). Blogspot. Obtenido de
http://fisiolvegetal.blogspot.mx/2012/11/cultivo-de-tejidos-vegetales.html
Medina, I. O. (2010). Manual de Cultivo de Tejidos Vegetales para Ingenieros
Biotecnólogos.