Manual CTV May2009

INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Fecha de Efectividad: 05 de Febrero de 2009

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Manual de Prácticas
De Técnicas de Cultivos Vegetales.
Elaboró: Revisó: Autorizó:

Puesto Docente Docente Jefatura Académica de IBQ
Nombre
y Lic. Leoncio Laiz Trujillo Ing. Aracely Romano García. Ing. Artacely Romano García
Firma
R00/11/04 F-CC-03
Prologo
El cultivo de tejidos vegetales o cultivo in vitro de tejidos vegetales, es una técnica de

reproducción en condiciones totalmente asépticas, en la que a partir de un pequeño segmento
inicial de tejido es posible regenerar en poco tiempo miles o millones de plantas genéticamente
iguales a la planta madre, cuando a este tejido le es aplicado un estímulo por medio de
variables físicas y químicas controladas en un medio de cultivo.
A diferencia de las técnicas tradicionales de cultivo, esta poderosa herramienta permite la

propagación de grandes volúmenes de plantas en menor tiempo; así como el manejo de las
mismas en espacios reducidos. Por otro lado, la técnica es de gran utilidad en la obtención de
plantas libres de patógenos; plantas homocigotas, en la producción de plantas en peligro de
extinción, en estudios de ingeniería genética, etc. El enorme potencial que posee esta
metodología ha propiciado que en los últimos 25 años se haya incrementado el número de
laboratorios de cultivo de tejidos en el país para la producción comercial de plantas
ornamentales y frutales al lo que ha motivado que algunos floricultores la estén utilizando como
una alternativa viable en sus programas de producción.
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Introducción.
Cultivo in vitro de árboles frutales o Multiplicación o reproducción de frutal in vitro
Cultivo in vitro
El cultivo in vitro es un método de propagación de plantas de aplicación profesional, puesto que

se realiza en laboratorio, en unas condiciones estériles y con unas instalaciones especiales.
Un dato para dar una idea comercial es que en España había en 1.990 28 laboratorios
dedicados a la producción de plantas por cultivo in vitro como negocio.
El cultivo in vitro consiste en tomar un trocito de hoja, un embrión, una porción pequeñita de
tallo (de 0,2 a 1 milímetro) o cualquier otra parte de una planta y ponerla a cultivar en un tubo
de ensayo sobre un medio acuoso nutritivo.
Lo fundamental es que se hace en unas condiciones muy controladas y totalmente estériles:

utensilios, cámara de manipulación, etc., todo está desinfectado en autoclave.
El cultivo in vitro es muy caro, entre otras cosas porque no se puede mecanizar. Sólo son
rentables aquellos laboratorios muy grandes y con mucho mercado.
La planta ya desarrollada en el cultivo in vitro necesita una primera aclimatación en el

laboratorio; en el invernadero y después una segunda aclimatación en el campo. Los viveros
grandes realizan ambas operaciones; otros sólo se encargan del primer paso.
Fase de aclimatación en invernadero
Aplicaciones prácticas del cultivo in vitro:
• Propagación vegetativa. Esto es lo más práctico. Dos técnicas: Micropropagación de

estaquillas
• - Organogénesis de callos
• Producción de plantas libres de virus mediante dos técnicas:
2
• Cultivo de meristemos
• - Micro injerto in vitro
• Permite hacer germinar semillas que son muy difícil de hacer en condiciones normales.
Ejemplo: algunas Orquídeas tienen en los campos unos parásitos obligados y en
viveros no se pueden reproducir; se inoculan esos parásitos o in vitro.
• Eliminar la inhibición de germinación de las semillas. El cultivo in vitro es lo más eficaz

porque tiene determinados inhibidores y algunos huesos de frutales no son capaces de
germinar ya que no tiene desarrollado el embrión.
• Prevención del aborto embrionario como resultado de incompatibilidad. Se da en

cruces de interés científico o intergenéticos, sobre todo en plantas herbáceas. Los
cruces incompatibles dan abortos.
• Aplicación en mejora genética para obtener híbridos, para introducir material genético,
etc.
• Acortar los ciclos de mejora genética. No hay que esperar que pase el periodo juvenil
del árbol para ver resultados.
• Producción de haploides. Cruzamientos o cultivo de polen (anteras).
• Ventajas:
• Obtención rápida de homocigotos.
• - Producción de híbridos (frutos puros).
Equipo necesario para el cultivo in vitro
- Autoclave
- Cámara de flujo laminar
- Medio de cultivo
- Planta
- Cámara de cultivo
- Autoclave
Es donde se "esteriliza" todo lo que vamos a utilizar: agua, algunos nutrientes, material, etc. No
se pueden meter proteinas. Es como una olla a presión, pero de mayor tamaño, donde se
controla la presión y la temperatura (hasta 120º).
- Cámara de flujo laminar
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Es donde se realizan todas las manipulaciones con la planta. Es un habitáculo con un operario
en un ambiente estéril. Se usan rayos ultravioletas para esterilizar el aire.
- Medio de cultivo
Agua y nutrientes (hormonas) en un tubo de ensayo, que se tapa con un tapón. Dependiendo
del material que se va a propagar, el tubo se pone vertical o un poco inclinado.
- Planta
El material vegetal de partida puede ser del campo, pero esto conlleva un alto riesgo de
enfermedades y contaminación, aunque se lave mucho y bien. Lo más corriente es utilizar
brotes que crecen en condiciones controlada para que halla menos infecciones.
- Cámara de cultivo
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La cámara de cultivo es una habitación de dimensiones muy variables, en la que se controlan
las condiciones de luz, temperatura, humedad, variación día-noche, etc..
Condiciones del cultivo in vitro
• En la cámara de flujo laminar no puede entrar material contaminado. El problema más

importante en todo el proceso del cultivo in vitro son las contaminaciones.
• En el autoclave no se pueden meter determinadas sustancias, como vitaminas,

antibióticos, ácido giberélico, sacarosa, encimas, extractos vegetales, etc., ni tampoco
recipientes que no soporten altas temperaturas.
• El vidrio ha de ser de muy buena calidad para que no suministre al medio sustancias
contaminantes para la planta. Normalmente se prepara el medio y se filtra
directamente. El problema es que se absorben en el filtro determinadas sustancias.
• Los reguladores de crecimiento (hormonas) son imprescindibles, ya que sin ellos no se

puede hacer el medio de cultivo.
• El pH ideal es 6, pero puede oscilar entre 5,5 y 6,5.
• Se necesita agar y medio sólido 0,6-0,9%.
• El medio de cultivo realmente sólo tiene que llevar agua, fuente de energía (azúcares)
y reguladores de crecimiento.
• El medio de cultivo es secreto, y se pueden tardar dos años en prepararlo.
• En la cámara de cultivo se aplican cantidades variables de luz (16-20 horas). También

existen plantas que se desarrollan en la oscuridad. Las temperaturas también varían.
Lo normal son 22-26ºC, aunque en ocasiones se exigen fríos de 4ºC y también 28-
30ºC para plantas tropicales.
• Igualmente, en el éxito de esta técnica de propagación también influyen determinadas

características de la planta, como el tipo, genética e incluso el tipo de implante, parte
más juvenil o más adulta.
• En cuanto a los recipientes, deben permitir el intercambio de gases, pero evitar la

pérdida de agua, lo que provocaría un aumento de la concentración de sales, y por
tanto la muerte de la planta. De ahí la importancia del cierre.
Subcultivos o replicado
Cuando sembramos microestaquillas en cultivo in vitro, no nos interesa que se emitan raíces ni
hojas, sino que se produzca una proliferación (crecimiento) para obtener nuevas
microestaquillas. Son lo que se denominan subcultivos.
No se pueden hacer infinitamente ya que se agota el material vegetal; tan sólo se hace 8-10
veces.
Ocurre entonces lo siguiente:
- El medio nutritivo se agota y se seca.

- El material vegetal ocupa todo el tubo.
- Se produce un cambio de olor en el medio (sustancias tóxicas).
- El medio se hace líquido.
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Fases del cultivo de meristemos
1. Toma un ápice meristemático (0,2-1 mm).

2. Siembra en el medio del tubo.
3. Fase de proliferación: crecimiento de brotes. Subcultivos.
4. Fase de enraizamiento (cambiar el medio).
5. Primera fase de aclimatación. Es muy importante el que la planta pueda llegar o no al
campo. Invernaderos, bolsas de plástico, bandejas de vidrio, etc..
6. Segunda fase de aclimatación. Siempre en invernadero.
7. Plantación en el campo.
Fases del cultivo de embriones
Se utiliza mucho en manzano.
1. Se desinfecta el fruto en alcohol. Se flamea.

2. Se coge el embrión de la semilla.
3. Se inocula en el tubo.
4. A las 1-2 semanas, la planta está más o menos reconocible.
5. Se deja crecer y se pasa por las fases de aclimatación.
Micropropagación
Se parte de una yema, de bráctea o axilar.
Se empieza a desarrollar en el medio de cultivo.
Entre la fase de proliferación y de enraizamiento hay muchos subcultivos (para obtener más
plantas).
El número de subcultivos depende del material vegetal.
Ejemplo de micropropagación de Kiwi:
- Se parte de un trozo de tallo.

- Al cabo de 4 semanas se obtiene una yema y crece un brote.
- En la fase de proliferación intentamos obtener gran cantidad de brotes.
- Sacamos microestaquillas del primer brote, haciendo subcultivos cada 6-8 semanas hasta
llenar el vidrio.
- Al aumentar la concentración de auxinas se obtienen plantas enraizadas.
- Puede hacerse de forma industrial y la fase de enraizamiento se hace en vivo.
Cultivo de callo in vitro
Se parte de un trozo de hoja o de tallo; bien de una planta madre de maceta o de una planta
que viene de cultivo in vitro.
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El medio puede ser sólido o líquido.
Se forma entonces una estructura de callo, de la que parten brotes, o también proembriones,
que al unirse forman una estructura similar al embrión.
A partir de entonces se desarrolla normalmente.
Obtención de plantas haploides
Normalmente se trabaja con la antera en su totalidad, no con granos de polen en particular.
De una yema de flor se coge una antera antes de que se abra y se hace un cultivo; bien por
embriogénesis u organogénesis.
• Embriogénesis: se forman células (poliembriones).
• Organogénesis: se forma una estructura de callo que puede venir o bien de tejidos de
la antera (diploide), o bien del grano de polen (haploide).
No se riega nunca por aspersión (riesgo de patógenos), siempre con regadera.
Problemas en el cultivo in vitro
* Contaminación: es grave.
* Vitrificación: es una reacción de las plantas que las hace adquirir apariencia de vidrio. La
única solución es hacer un subcultivo de material sano, es decir, se saca y se cortan los
trocitos que estén bien.
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Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
1 Identificación de las partes de la planta
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 1 de 2
Objetivo:
Identificación de las partes de la planta que se utilizaran para realizar las técnicas de
cultivos vegetales.
Material y equipo:
Descripción
Cantidad
1 Estuche de disección.
1 Mesa de laboratorio.
1 Hipoclorito de sodio al 5,3,1 %v/v.
1 Solución de jabón al 1%.
1 Cepillo o esponja suave
1 Microscopio.
Procedimiento:
1.- Tomar la planta tratada con el fungicida durante dos a tres semanas anteriores en el
invernadero.
2.- Lavar las plantas con la solución jabonosa.
3.- Limpiar el jabón con agua destilada haciendo varios lavados hasta quitar el exceso de jabón.
4.- Dejar reposar ahora los explantes en una solución de hipoclorito de sodio al 5 % y hacer los
enjuagues pertinentes.
5.- Hacer los cortes a la planta y revisar las partes en el microscopio y anotar tus observaciones.
7.- Colocar los explanes identificados dentro de un tubo con agua destilada estéril.
8.- Dejar reposar los tubos en presencia de luz para observar comportamiento durante tres días.
Nota: en caso de presentar contaminación en la siembra; desechar los tubos con los ex plantes y
volver a tratar con diferentes concentraciones de las soluciones para desinfección.
Buscar otras técnicas en publicaciones con otros métodos de desinfección de la planta. Ya que
recuerda que cada planta tiene su propia colonización de microorganismos.
Reporte de práctica: Selecciones la(s) opciones a solicitar
Introducción.
Marco Teórico.
Desarrollo de la Práctica.
Resultados.
Conclusiones y recomendaciones.
Bibliografía.
Anexos.
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1 Identificación de las partes de la planta
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2 Preparación de las partes de la planta
Objetivo:
Preparación de las partes de la planta que se utilizaran para realizar las técnicas de
cultivos vegetales. (limpieza de la planta).
Material y equipo:
Descripción
Cantidad
1 Hipoclorito de sodio 5, 3, 1 %.
1 Solución de jabón 10%.
1 Cepillo o esponja suave
1 Microscopio.
Procedimiento:
1.- Tomar la planta tratada con el fungicida durante dos a tres semanas anteriores.
2.- Lavar las plantas con la solución jabonosa.
3.- Limpiar el jabón con agua destilada haciendo varios lavados hasta quitar el exceso de jabón.
4.- Deje reposar ahora los explanes en una solución de hipoclorito de sodio al 5 %v/v. y hacer los
enjuagues pertinentes.
5.- Rociar sobre la planta una solución de fenol al 1% para eliminar hongos y deje reposar por un
periodo corto este puede variar de 2 a 10 min. Y enjuague la planta con varios lavados de agua
destilada.
6.- Hacer los cortes a la planta y revisar las partes en el microscopio y anotar tus observaciones.
7.- Colocar los explanes identificados dentro de un tubo con agua destilada estéril.
8.- Dejar reposar los tubos en presencia de luz para observar comportamiento durante tres días.
Parte 2.-Explante libre de Contaminación (Confirmación).

1.- Preparar el medio de cultivo suficiente para bacterias y hongos y esterilice en autoclave durante
un lapso de tiempo de entre 15 y 45 min. dependiendo que tan llana este la autoclave con el
material a utilizar para siembra.
2.- Tomar parte del liquido de los tubos que contienen el explánte y siémbrelos dentro de las cajas
en diferentes medios (el medio puede ser para hongos o para bacterias).
3.- Deje en incubación y revise por dos o tres días.
Nota: En caso de presentar contaminación en la siembra; desechar los tubos con los ex plantes y
volver a tratar con diferentes concentraciones de las soluciones para desinfección.
Buscar otras técnicas en publicaciones con otros métodos de desinfección de la planta. Ya que
recuerda que cada planta tiene su propia colonización de m.o.
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2 Preparación de las partes de la planta
Los antibióticos más utilizados están en el cuadro 1.1 en la siguiente pagina. Cabe
mencionar que probablemente no se cuenten con estos en el laboratorio. Pero se podrían
conseguir en una farmacia o droguería.
Introducción.
Marco Teórico.
Resultados.
Bibliografía.
Anexos.
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3 Medios de cultivo MS o WPM para cultivo de tejidos vegetales
Objetivo:
Preparar los medios de cultivo a utilizar en cultivo de tejidos vegetales.
Material y equipo:
Descripción
Cantidad
1 Matraz de laboratorio
1 Medio MS y sales minerales.
1 Autoclave.
1 Frascos estériles y/o tubos donde se sembrara el explante.
Procedimiento:
1.- Tomar el frasco del medio MS y leer las indicaciones para preparar 500 ml.
2. Disolver los macronutrientes en 100 ml de agua destilada estéril. (Esto puede requerir dos o tres
gotas de HCl 5M.para mejorar o facilitar su dilución)
3. Añadir soluciones madre de nutrientes inorgánicos según indique la formula.
4. Añadir sólidos orgánicos y llevar a 500 ml. con agua destilada.
5.- Agitar para disolver aunado a ello adicione la cantidad de sacarosa aproximadamente 30 g/l.
6. Añadir la solución madre de vitaminas, a continuación, agregue las cantidades de las sustancias
de crecimiento (Hormonas).
Nota: Algunas hormonas no son Autoclave-hables, antes de adicionar las hormonas al medio de
cultivo verificar si estas pueden o no meterse a la autoclave.
7. Ajustar la mezcla a un pH de 6,5 (± 0,3).
8. Añadir de 7.5 a 9 g Agar.
9. Mezclar la solución y hierba hasta que se disuelva el agar.
El contenedor debe ser sellado con papel de aluminio para reducir la evaporación.
10. Añadir vidrio para hacer agua destilada hasta 1 litro.
11. Meter el medio preparado al Autoclave a 15 p.s.i. exactamente 15 minutos.
12. Vuelva el pH. Debe estar en el rango de pH 5,5-6,3.
13.- Esterilizar el material suficiente para hacer la siembra en frascos.
14- Una vez esterilizado el material y el medio en los frascos realizar el
Notas:
El medio es estable durante varias semanas en el refrigerador a bajas temperaturas 2-5º
Guardar el medio asépticamente según sea necesario en contenedores estériles.

Introducción.
Marco Teórico.
Resultados.
Bibliografía.
Anexos.
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4 Medios de cultivo a utilizar en cultivo de tejidos vegetales
Objetivo:
Preparar los medios de cultivo a utilizar en cultivo de tejidos vegetales.
Material y equipo:
Descripción
Cantidad
1 Autoclave.
Procedimiento:
1.- Tomar el frasco del medio MS y leer las indicaciones para preparar 500 ml.
2. Disolver los micronutrientes en 100 ml de agua destilada estéril. (Esto puede requerir dos o tres
gotas de HCl 5M.)
3. Añadir soluciones madre de nutrientes inorgánicos.
4. Añadir sólidos orgánicos y llevar a 500 ml con agua destilada.
5.- Agitar para disolver.
6. Añadir la solución madre de vitaminas, a continuación, agregue las cantidades de las sustancias
de crecimiento (Hormonas).
Nota: Algunas hormonas no son Autoclave-hables.
7. Ajustar la mezcla a un pH de 6,5 (± 0,3).
8. Añadir 7,5-9 g de Agar.
9. Revuelva la mezcla hierba y se disuelva el agar.
El contenedor debe ser sellado con papel de aluminio para reducir la evaporación.
10. Añadir vidrio para hacer agua destilada hasta 1 litro.
11. meter el medio al Autoclave a 15 p.s.i. exactamente 15 minutos.
12. Vuelva el pH. debe estar en el rango de pH 5,5-6,3 ..
13.- Esterilizar el material suficiente para hacer la siembra en frascos.
14- Una vez esterilizado el material y el medio en los frascos realizar la siembra de explantes.
Notas:
Dispensar el medio asépticamente según sea necesario en contenedores esteriles.
En caso de no contar con el medio de cultivo en el laboratorio; preparar las soluciones a

partir de los siguientes cuadros que contienen las formulaciones:
1 - PREPARACIÓN DE LA Murashige y SK00G BASAL MEDIO (EM)

2 - PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN VGA * (VITAMINAS Y ÁCIDO GIBERÉLICO)
3 - PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE VITAMINAS
4 - PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN MADRE DE HORMONAS Ácido giberélico (AG3)
5.- PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES PARA AJUSTAR EL PH
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1.- FORMULACION DEL MURASHIGE Y SK00G BASAL MEDIO (EM)
Preparación de soluciones:
Solución Stock A:
1.- Pesar las siguientes cantidades:
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2.- Disolver en 200 ml de agua destilada
3.- Guardar la solución en un frasco rotulado convenientemente en 400 CC.
4. Pesar 5 mg de los reactivos siguientes: CuSO4.5H2O O CoCL2.6H2
5.- Disolver en 10 ml de agua destilada. A 1 ml de la solución anterior y añadir 200 ml de agua.
6.- Guardar la solución en un frasco rotulado convenientemente a 400.
Solución Stock B MgSO4

1.- Pesar de 3,7 g de MgSO4.7H2O y disolver en 100 ml de agua destilada.
2.- Guardar la solución en un frasco rotulado convenientemente a 4 ° C.
Solucion Stock C:
1. Pesar 0,75 g de Na2EDTA.
2.- Disolver en caliente en 20 ml de agua destilada. Deje enfriar la solución.
3.-Pese 0,55 g de FeSO4.7H2O y disuelva en 20 ml de agua destilada
3. Mezclar las dos soluciones y llenar hasta 100 ml por adición de agua destilada Guarde la
solución en un lugar oscuro, convenientemente etiquetados vial a 4 ° C.
Solucion Stock D Vitaminas

1. Pesar los reactivos siguientes:
Thyamine HCI 20mg
Glycine 100mg
25 mg de ácido nicotínico
Piridoxina HCI 25 mg
2.- Disolver en 500 ml de agua destilada.
3.- Revuelva bien y coloque la solución en viales de 20 ml y guardar en 0º.
MS BASAL SOLUTION*
Para 1 litro de medio basal de mezclar:
100 ml de solución madre A

10 ml de solución stock B
5 ml de solución stock C
10 ml de solución stock D
100 mg de lnositol
Completar hasta 1 litro con agua destilada
* Existencias A + B + C + D
2.- PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN VGA * (VITAMINAS Y ÁCIDO GIBERÉLICO)
1.- Para 500 ml de mezcla VGA mesclar lo siguiente:

Thyamine HC! 10mg
Glicina 200 mg
Ácido nicotínico 50mg
Piridoxine HCI 50mg
Ácido giberélico
(Stock 1 000 ppm) en 10 ml
2.- Hacer esta solución hasta 500 ml con agua destilada
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3.- Distribuir esta solución en viales de 20 ml.
Nota: Utilizar 5 MI / I
* Esta solución antes se llamaba de DPM
3.- PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE VITAMINAS
1.- Para preparar 500 ml de solución mezcla:

Thyamine HCI10mg
Glicina 200 mg
Nicotínico acid50mg
Piridoxine HOI50mg
2.- Aforar hasta 500 ml con agua destilada
3.- Distribuir esta solución en viales de 20 ml.
Nota: Utilizar 5 MI / I.
4.- PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN MADRE DE HORMONAS Ácido giberélico (AG3)
La solución madre de ácido giberélico: I, 000 ppm

1. Pesar 1 g de ácido giberélico y disolver bien con algunas gotas de alcohol.
2.- Añadir 200 ml de agua destilada
2. Guardar en un frasco rotulado convenientemente a los 0 ° C.
El ácido giberélico puede ser esterilizados junto con el medio de cultivo: sin embargo, la pérdida de
alguna actividad también es posible.
Nota: Un ml de concentrado de solución (1000 ppm) contiene 1 mg de ácido giberélico.
NAFTALENACETIC ÁCIDO (NAA)

Solución stock de NAA 1.000 ppm
1.- Pesar .2 g de NAA y disolver bien con algunas gotas de NaOH 1N.
2. Añadir 200 ml de agua destilada.
3.- Guárdelo en un frasco rotulado convenientemente a 0 ~ O.
Nota: Un ml de la solución madre (1000 ppm) contiene 1 mg de NAA.
BENCYLAMINOPURINE (BAP]
La solución madre de BAP: 1.000 ppm
1. Pesar 0. 2 g BAP y disolver bien con algunas gotas de NaOH 1N.
2.- Añadir 200 ml de agua destilada.
Nota: La esterilización de BAP puede hacerse junto con el medio de cultivo, sin embargo, la
pérdida de alguna actividad es también posible.
Un ml de la solución madre (1000 ppm) contiene 1 mg de BAP
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INDOLEACETIC ÁCIDO (AIA)

Solución madre de la AIA: 1.000 ppm
1. Pesar 0,2 mg de la AIA y disolver bien con algunas gotas de alcohol.
3. Guárdelo en un frasco rotulado convenientemente a los 0 ° C.
Nota: Esterilización por filtración se recomienda.

Un ml de solución madre (1000 ppm) contiene 1 mg de la AIA.
KINETINE (KIN)
La solución madre de KIN: 1.000 ppm
1. Pesar 0,2 g KIN y disolver bien con algunas gotas de NaOH 1N.
2.-Añadir 200 ml de agua destilada.
Nota:KIN pueden ser esterilizados junto con el medio de cultivo, sin embargo, la pérdida de su
actividad es también posible.
Un ml de la solución madre (1000 ppm) contiene 1 mg de KIN.
2, 4-D
La solución madre de 2,4-D: 1.000 ppm
1. Pesar 0,2 g de 2,4-D y disolver bien con algunas gotas de alcohol.
3.- Mantenga en un vial convenientemente etiquetados a 0 ° C.
Nota: 2,4-0 pueden ser esterilizados junto con el medio de cultivo, sin embargo, una pérdida de su
actividad es también posible.
Un ml de la solución madre (1 000 ppm) contiene 1 mg de 2,4-0.
5.- PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES PARA AJUSTAR EL PH
Solución para reducir el pH - Ácido clorhídrico (HCI) EN

1. Vierta 91,4 ml de agua destilada en un vaso de precipitados (Use una máscara y guantes para
protegerse de los vapores de ácido).
2 Con una pipeta tomar 8,8 ml de ácido clorhídrico (concentrado comercial, 36. 5-38.00 / o].
ADVERTENCIA: No respirar al tomar el ácido. Use una pipeta de goma-bombilla.
3. Homogeneizar y conservar en un frasco de boca amplia, cerrado ya temperatura ambiente.
Solución para el pH básico con hidróxido de potasio (KOH)

1. Introducir 50 ml de agua destilada en un vaso
2. Añadir 5,6 g de KOH y disolver bien.
3. Llevar a 1 00 ml con agua destilada Manténgalo en un circuito cerrado de amplia boca del vial a
temperatura ambiente.
Utilización
Según el pH del medio, agregue la solución gota a gota hasta que el pH se alcanza.
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6 Medios de cultivo para plantas.
Objetivo:
Preparar los medios de cultivo para plantas en cultivo de tejidos vegetales.
Material y equipo:
Descripción
Cantidad
1 Autoclave.
Procedimiento:
Parte 1 Preparar el medio:
• 1 sobre de Murashige y Skoog basal con un mínimo de sales orgánicas medio (MS). Si desea
hacer su propio medio de cultivo, el uso dado a la receta el final de esta hoja de trabajo.
• 1 L de agua destilada
• 6 g de agar
• 1,5 L o 2 L recipiente para preparar el medio de cultivo.
• Tubos de policarbonato con tapas de rosca o en su defecto frascos de Gerber.
Parte 1 Preparación de tubos esterilizados de medio de cultivo

Esto hará que un 1 L de medio de cultivo, que es suficiente para preparar unos 100 tubos de
cultivo.
1.- MS disolver la mezcla en unos 800 ml de agua destilada, agitando el agua continuamente.
2.- Pesar 6 g de agar y añadirlo a la solución MS.
3.- Calentar la solución suavemente mientras revolviendo hasta que todo el agar se haya disuelto.
4.- Añadir más agua destilada para que el total de volumen de hasta 1 L.
5.- Verter en caliente el medio en tubos o frascos de policarbonato a una profundidad de unos 15
mm.
4. Colocar los tubos (con tapas sentado en los tubos, pero no reforzado) en una olla a presión
y esterilizar durante 20 minutos. Enfriar la olla a presión, a continuación, quite los tubos y apretar
las tapas.
Parte 2 Siembra de esquejes.
Su material vegetal debe ser esterilizado para eliminar cualquier bacteria o esporas de hongos.
El proceso de esterilización se hace para matar a todos los microorganismos, pero que no afectará
negativamente a la materia vegetal.
1. Cortar la planta o parte de la planta en pequeños tramos de 1 cm de diámetro. Si se utiliza una

hoja hacer cortes de la hoja , cortar los brotes de .5-.7 cm de longitud.
Nota: En caso de que la planta ya haya sido tratada asépticamente antes, omita el paso 2.
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6 Medios de cultivo para plantas leñosas
2. Lavar el material vegetal en detergente mezclado con agua durante unos 20 minutos.
Nota: Si en material vegetal es peludo, como tallos de plantas de matorral, con un cepillo suave
limpie para ayudar a eliminar los hongos etc detergente ayudará a humedecer el material y
eliminar las burbujas de aire que pueden ser atrapados entre los diminutos pelos de una planta.
3.- Transferir la planta de lavado de material a la solución de esterilización.

4.- Agitar la mezcla durante 1 minuto y dejar en remojo durante 20 minutos
5.- Colocar en el recipiente de esterilización el material vegetal, los contenedores de agua estéril,
las pinzas y cuchillas esterilizadas, toalla de papel para uso como limpieza de superficie.
6.- Colocar el material vegetal en un recipiente de agua esterilizada y lavar a fondo. Repita
el proceso de lavado en otro recipiente de agua estéril (en sugerir algunos métodos menos 3
lavados con agua estéril).
7.- Tener preparado una sección de material vegetal en lugar estéril y pinzas en el medio en el
tubo de policarbonato.
8.- Sembrar las piezas deben estar parcialmente sumergidas en el medio, botón floral mirando
hacia arriba.
9.- Colocar la tapa herméticamente en el tubo.
10.- Colocar la planta de tubos que contienen las secciones en un área de luz del aula, lejos de
la luz directa del sol, por ejemplo, bajo una luz fluorescente. Nuevos brotes deben desarrollar
dentro de 2 semanas, y debe estar muy avanzada en 3-4 semanas.
Nota: Las raíces pueden aparecer dentro de 6 semanas en la coliflor. Rosas y otras plantas pueden
haber crecido con éxito utilizando técnicas de cultivo de tejidos. Sin embargo, una vez que los
brotes han desarrollados tendrán que ser colocados en la base del brote en una solución con
hormonas para estimular el crecimiento y el desarrollo de la raíz.
R00/02/08 F-SA-67
19
R00/02/08 F-SA-67
20
Nota:
Mantener el medio asépticamente según sea necesario en contenedores esteriles.
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21
Lloyd and McCown (WPM)
Inorganic Salt Formulation
Macronutrients (mg/l) Micronutrients (mg/l)
Ammonium nitrate (NH4NO3) 400mg/l Boric Acid (H3BO3) 6.2mg/l
Calcium chloride (CaCl2*2H2O) 96mg/l Na2EDTA*2H2Oa 37.2mg/lb
Magnesium sulfate (MgSO4*7H2O) 370mg/l Cupric Sulfate (CuSO4*5H2O) 0.25mg/l
Potassium sulfate (K2SO4) 990mg/l Ferrous sulfate (FeSO4*7H2O) 27.8mg/l
Potassium phospate (KH2PO4) 170mg/l Manganese sulfate(MnSO4*4H2O)c 22.3mg/l
Calcium nitrate (Ca(NO3)2*4H2O 556mg/l Zinc Sulfate (ZnSO4*7H2O) 8.6mg/l
Sodium molybdate (Na2MoO4*2H2O) 0.25mg/l
Lloyd and McCown (WPM)

Common Organic Additives
myo-Inositol 100mg/l Nicotinic Acid 0.5mg/l
Pyridoxine*HCl 0.5mg/l Thiamine *HCl 1.0mg/l
Glycine 2.0mg/l Agar 6.0g/l
Sucrose 20g/l
a= Originally printed as Na2EDTA
b= Originally printed as 37.3 mg/l anhydrous form
c= Originally printed as MnSO4*H2O
Lloyd, G. and McCown,B. 1980 Combined Proceedings of the International Plant Propagators Society.
30:421-427.
Owen H.R. and Miller A.R. 1992. An examination and correction of plant tissue culture basal medium
formulations.
Plant Cell, Tissue and Organ Culture 28: 147-150.
Media Recipe Database | Plant Tissue Culture Network | Media Information Page
Introducción.
Marco Teórico.
Resultados.
Bibliografía.
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22
7 Micro propagación de plantas
Objetivo:
Micro propagación de plantas in vitro
Micropropagación
Plántulas in vitro, que son libres de patógenos, se utilizan como material inicial para la patata y
programas de semillas de camote. Los métodos utilizados en estos programas, principalmente
micropropagación dependerá de su volumen de producción y la infraestructura disponible. En el
caso de la patata micropropagación, los métodos han sido ya descritos (Dodds, 1985; Espinoza et
al. 1992). Que se han verificado en muchas instituciones y que se basan en el rápido crecimiento
de cada nodo de recortes, con múltiples tallos o esquejes de nodo. Después, la base
se describen los métodos de micropropagación.
Nodo A. micropropagación
Este método se basa en el principio de que el nodo de una in vitro de plántulas en un
medio de cultivo induce el desarrollo de las yemas axilares, lo que resulta en un nuevo in vitro de
plántulas.
Este tipo de propagación promueve el desarrollo de una preexistente estructura morfológica.
La condición nutricional y hormonal del medio rompe la latencia de las yemas axilares
y promueve su desarrollo rápido (Lizárraga et al. 1989).
Formación de callo y regeneración de plantas se debe evitar porque tienden a afectar a la genética
estabilidad del genotipo.
En virtud de la sala de condiciones controladas micropropagación es rápida. Cada nodo plantado
en una propagación producirá un medio de plántulas que ocupará toda la longitud del tubo de
ensayo, después de aproximadamente cuatro semanas para la patata, y de seis semanas de
camote. El resultado in vitro plántulas pueden ser trasplantadas a condiciones in vitro en pequeñas
macetas en el invernadero.
B. Micropropagación por esquejes de nodo en un medio líquido
Esta técnica se aplica tanto con la papa y el camote para producir un gran número de nodos
rápidamente. Tallo con 5 a 8 nodos son preparados por la eliminación de ambos y el ápice de la
raíz in vitro de plantas para ser reproducido. Los tallos son colocados en los correspondientes
propagación líquido medio (Espinoza et al., 1992: Lizárraga et al. 1989). También es posible utilizar
los ganglios aislados: los nodos y las nuevas plántulas germinadas se desarrollarán durante un
período de 3 a 4 semanas.
Material y equipo:
Descripción
Cantidad
1 Autoclave.
R00/02/08 F-SA-67
23
7 Micro propagación de plantas
Procedimiento:
1. Esterilizar placas de Petri (colocados en bolsas de papel) y preparar la cámara de flujo laminar
por la desinfección de las superficies internas con el alcohol.
2.- Esterilizar los instrumentos con un instrumento esterilizador y colóquelos en un recipiente
estéril.
3. Abrir el tubo, quitar la de plántulas y colóquelo sobre una placa de Petri con la ayuda de fórceps.
4. Quitar las hojas y cortar los nudos.
5. Abrir un tubo estéril que contiene frescos de mediano y lugar dentro de un nodo, tratando de
hundir ligeramente en el medio con el botón arriba.
Cerrar el tubo.
6. Sellar el tubo con un gas permeable cinta de plástico (o parafilm Saram recapitulación) y
etiquetar correctamente.
Nota:
Se recomienda colocar dos explantes en 16 x 125 mm tubos, tres en 18 x 150 mm tubos, cinco
en 25 x 150 mm tubos, magenta y 20-30 en los buques.
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24
8 Método para aislar protoplastos
Objetivo: Utilizar un método para aislar un gran número de metabólicamente competente de
protoplastos hojas de monocotiledóneas (gramíneas), dicotiledóneas (como la espinaca y la
girasol), o de hipocotilo tejido (por ejemplo, Brassica napus).
Material y equipo:
Descripción
Cantidad
1 Autoclave.
Procedimiento:
1. Corte rodajas de hojas de monocotiledóneas y dicotiledóneas con las hojas de corte o con una
cuchilla afilada en segmentos 0,5-1 mm de tamaño. En el caso de las dicotiledóneas, la epidermis
se puede raspar fuera antes de cortar por el roce con una multa carborúndum polvo o con un pincel
fino de nylon.
2. Suspender en 50 mL de sulucion de digestión (de 10-15 g de tejido vegetal), de acuerdo
a la receta de solución A.
3. Incubar la hoja rodajas o en trozos de 19 cm de diámetro que contiene el plato digestión medio
durante 3 horas a 25 ° C, cubierta con una película plástica. Es posible ser ventajoso para sustituir
a la digestión medio a intervalos de 1 hora, como las enzimas pueden ser inactivadas por
sustancias liberadas de roto células.
4. Después de la terminación de la digestión de incubación medio es cuidadosamente se extrae y
se desecha. Por lo general, contiene muy pocos protoplastos. El tejido de la planta se lavan 3
veces agitando suavemente con 20 ml de lavado medio (Solución B).
5. Después de cada lavado, el tejido es recogida por colada a través de un colador de té (0,5-a 1-
mm de tamaño de poro) y la combinación de lavados luego se filtra a través de malla de nylon
(100-200 mm de tamaño de poro) para eliminar tejido vascular y sin digerir el material.
6. Los protoplastos son recogidos por centrifugación durante 3 minutos a 500-1000 rpm y el
sobrenadante es aspirado y puede desecharse.
7. Este crudo protoplasto preparación también contiene algunas células y cloroplastos y es
importante purificar la protoplastos para eliminar estos contaminantes. Esto puede hacerse con
soluciones de sacarosa y sorbitol de diferentes densidades.
8. El protoplasto es suavemente precipitado resuspendido en 40 ml de solución C, y esta
suspensión se divide entre los dos 100-ml tubos de centrífuga.
9. Para cada tubo, agregue lentamente 5 ml de solución D y, a continuación, esta superposición
con 5 ml de medio de lavado (Solución B) para hacer un 3-paso gradiente.
10. Centrifugar a 3000 rpm durante 5 minutos.
11. Los protoplastos ahora recoger como una banda en la interfaz entre el 2 arriba capas. Retirar
cuidadosamente con una pipeta Pasteur.
12. Losl protoplastos deben ser examinados con un microscopio de luz para asegurar que la
reparación es libre de células y cloroplastos.
13. Cuando una gran parte de protoplastos este en este sacarosa / sorbitol gradiente, la densidad
R00/02/08 F-SA-67
25
8 Método para aislar Protoplastos
de las 2 capas se puede aumentar mediante la adición de 5% -10% Dextrano (15000-20000
Señor) o el 10% -20% Ficoll para aumentar el porcentaje de protoplastos flotante.
14. Los Protoplastos purificados puede ser concentrarse al diluir con 10 mL de Solución B, y
centrifugar a 1000 rpm por 3 minutos y luego la resuspenda el precipitado en una pequeña
cantidad de medio agitando suavemente los tubos.
15. Los protoplastos son estables durante un máximo de 24 horas cuando se almacena en hielo.
La actividad Fotosintética de los protoplastos puede ser determinada mediante la medición con un
electrodo de oxígeno, siempre revolviendo rápido se evita el daño a los protoplatos, ya que de no
hacerse asi se llega a romper algunos de los protoplastos. Un medio adecuado para aparece
como Solución E.
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26
8 Método para aislar protoplastos
R00/02/08 F-SA-67
27
Bibliografía
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Eleventh Workshop/Conference of the Association for Biology Laboratory
Education (ABLE), 195 pages.
S. Harisha.(2007) Biotechnology Procedures and Experiments Handbook. (2007)ISBN:

978-1-934015-11-7; Printed in Canada.
Tonny Storr (2002); Plant Tissue Culture Sharnbrook upper School, Bedfor in
association with uniliver PLC, Colworth House, Bebfroshire.SCSST 1985.
28
Anexos:
29
1
O ur Plant Tissue Culture Tested basal salts and media

have been formulated according to the references
cited in their respective product listings. These basal salts
are provided in the Technical Information Section of this
catalog and on our web site: www.phytotechlab.com.
and media are then manufactured and packaged in en-

vironmentally controlled facilities. Our biological testing
ensures that each lot produces culture growth consistent
B asal Salt vs Medium... our definition
A “Basal Salt Mixture” contains macro- and micronutri-
ents, but no vitamins, carbohydrates, or growth regulators.
with prior lots.
A “Basal Medium” contains the macro- and micronutrients,
On the following pages are many popular basal salt and but is incomplete as it typically lacks an organic compo-
media formulas followed by Murashige and Skoog-based nent: vitamins, carbohydrates, or growth regulators. A
formulations. Vitamin listings and formulations complete “Medium” typically is complete and requires no additional
this section. Please contact us with inquiries about larger components (except gelling agent, if desired). A “Modified”
package sizes or custom formulations. Basal Salt, Basal Medium, or Medium indicates that one
or more of the components varies in concentration or form
Instructions for basal salt, media, and vitamin preparation from that originally published.
Plant Tissue Culture Basal Salts and Media

Product Package
Product Description Product Notes
Number Size
A267 ANDERSON BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients as described by Anderson (1978, 1980). Soluble In Water 10 L
Plant Tissue Culture Tested 50 L
B144 BANANA AGS BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients, vitamins, and plant growth regulators required Soluble In Water 10 L
to culture bananas. 50 L
Plant Tissue Culture Tested
M462 Musa (Banana) Medium: See MS-Based Plant Specific Medium Section
C206 CAPE SUNDEW/ VENUS FLY TRAP Storage Temp 2-6° C 1L
MULTIPLICATION BASAL MEDIUM Soluble In Water 10 L
Contains the macro- and micronutrients, vitamins, and plant growth regulators required 50 L
for the multiplication of carnivorous plants.
C216 CAPE SUNDEW/ VENUS FLY TRAP Storage Temp 2-6° C 1L
PRETRANSPLANT BASAL MEDIUM Soluble In Water 10 L
Contains the macro- and micronutrients, vitamins, and plant growth regulators required 50 L
for the growth of carnivorous plants.
C212 CARROT CALLUS INITIATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
to initiate carrot callus from pith tissue. 50 L
C222 CARROT SHOOT DEVELOPMENT BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
to initiate shoots from carrot callus. 50 L
C287 CHEE & POOL C2d VITIS BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients as described by Chee & Pool (1987). Soluble In Water 10 L
C167 CHU N6 BASAL MEDIUM w/ VITAMINS Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Chu (1975). Soluble In Water 10 L
C416 CHU N6 BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients as described by Chu (1975). Soluble In Water 10 L
C149 CHU N6 VITAMIN SOLUTION (1000x)
See Vitamin Section (following the MS-based media section)
D146 DCR BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains macro- and micronutrients as described by Gupta & Durzan (1985). Soluble In Water 10 L
30
2
Cape Sundew/ Venus Fly Trap

Cape Sundew/Venus Fly Trap
Anderson Basal Salt Mixture
Carrot Callus Initiation Basal

Pretransplant Basal Medium
Banana AGS Basal Medium
Carrot Shoot Development
Chu N6 Basal Salt Mixture
DCR Basal Salt Mixture

Chu N6 Basal Medium
Chee & Pool C2d Vitis
Multip. Basal Medium
Basal Medium
Basal Medium
w/ Vitamins
All components expressed in
Medium
mg/L
COMPONENT A267 B144 C206 C216 C212 C222 C287 C167 C416 D146
Aluminum Chloride•6H2O
Ammonium Nitrate 400 1650 400 825 1650 400
Ammonium Phosphate, Monobasic
Ammonium Sulfate 134 134 463 463
Boric Acid 6.2 6.2 6.2 3.1 3 3 6.2 1.6 1.6 6.2
Calcium Chloride, Anhydrous 332.2 333 332.2 166.5 113.24 113.24 125.33 125.33 64.14
Calcium Nitrate 492.3 386.31
Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.0125 0.025 0.025 0.025 0.025
Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.0125 0.025 0.025 0.025 0.25
Na2EDTA•2H2O 74.5 74.5 37.26 37.26 37.3 37.25 37.25 37.3
Ferric Chloride
Ferric Sodium EDTA 36.7 18.35
Ferrous Sulfate•7H2O 55.7 55.7 27.8 27.8 27.8 27.85 27.85 27.8
Magnesium Sulfate, Anhydrous 180.7 181 180.7 90.5 122.09 122.09 180.6 90.37 90.37 180.7
Manganese Chloride•4H2O
Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 8.45 10 10 0.845 3.3 3.3 22.3
Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.125 0.25 0.25 0.25 0.25
Molybdenum Trioxide
Nickel Chloride•6H2O 0.025
Nickel Sulfate•6H2O
Potassium Chloride
Potassium Iodide 0.3 0.83 0.415 0.75 0.75 0.8 0.8 0.83
Potassium Nitrate 480 1900 480 950 2500 2500 1900 2830 2830 340
Potassium Phosphate, Dibasic
Potassium Phosphate, Monobasic 170 85 170 400 400 170
Potassium Sulfate
Sodium Nitrate
Sodium Phosphate Monobasic 330.6 295 380 150 150
Sodium Sulfate
Zinc Nitrate•6H2O
Zinc Sulfate•7H2O 8.6 8.6 8.6 4.3 2 2 8.6 1.5 1.5 8.6
Adenine Hemisulfate 80
Glycine (Free Base) 2
2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid 1
6-γ,γ-Dimethylallylaminopurine (2iP) 10 1
Indole-3-acetic Acid 1
Kinetin 0.2
L(-)Malic Acid
myo-Inositol 100 100 50 100 100 10
Nicotinic Acid (Free Acid) 1 1 1 0.5
Pyridoxine•HCI 1 1 1 0.5
Thiamine•HCI 0.4 0.4 0.2 10 10 1 1
Grams of powder to prepare 1 liter 1.89 4.71 2.12 2.20 3.21 3.21 4.49 3.99 3.98 1.64
pH±0.5 at RT 3.7 5.7 3.5 4.3 3.0 4.0 4.0 4.0 4.1 4.0
NS = No Specification Established rev 11/2005
31
3
Plant Tissue Culture Basal Salts and Media (continued)

Product Package
Number Size
D190 DKW BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients as described by Driver & Kuniyuki (1984) and Soluble In Water 10 L
McGranahan, et al (1987). 50 L
D191 DKW BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains 10 g/L Sucrose; without Vitamins Soluble In Water 10 L
Contains macro- and micronutrients as described by Driver & Kuniyuki (1984) and 50 L
McGranahan, et al. (1987).
D189 DKW BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains 30 g/L Sucrose; without vitamins Soluble In Water 10 L
Contains macro- and micronutrients as described by Driver & Kuniyuki (1984) and 50 L
McGranahan, et al. (1987).
E330 ERIKSSON VITAMIN SOLUTION (1000x)
G768 GAMBORG BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients as described by Gamborg, et al. (1968). Soluble In Water 10 L
G398 GAMBORG B-5 BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Gamborg, et al. Soluble In Water 10 L
(1968). 50 L
G359 GAMBORG (PRL-4-DM) LONG BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Gamborg, et al. Soluble In Water 10 L
(1966). 50 L
G249 GAMBORG VITAMIN POWDER (1000x)
G219 GAMBORG VITAMIN SOLUTION (1000x)
G371 GRESSHOFF & DOY BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients as described by Gresshoff & Doy (1974). Soluble In Water 10 L
H393 HELLER BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients as described by Heller (1953). Soluble In Water 10 L
H396 HELLER/ WHITE MODIFIED BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients as described by Heller (1953) and White Soluble In Water 10 L
(1963). Without Molybdenum Trioxide 50 L
H353 HOAGLAND MODIFIED BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains Ferrous Sulfate Soluble In Water 10 L
Contains the macro- and micronutrients as described by Hoagland and Arnon (1938). 50 L
HOSTA Media
See MS-Based Plant-Specific Media (following this section)
K413 KAO & MICHAYLUK BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients as described by Kao & Michayluk (1975). Soluble In Water 10 L
K427 KAO & MICHAYLUK MODIFIED BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients, vitamins, and organic acids as described by Soluble In Water 10 L
Kao & Michayluk (1975). 50 L
K421 KAO & MICHAYLUK VITAMIN SOLUTION (100x)
32
4
Hoagland Modified
Medium w/ 30 g/L
Basal Salt Mixture
Basal Salt Mixture

Medium w/ 10 g/L
(PRL-4-DM) Long
Kao & Michayluk
Kao & Michayluk

Heller Basal Salt
Gresshoff & Doy
DKW Basal Salt
Gamborg Basal
Modified Basal
Modified Basal
Basal Medium
Basal Medium
Basal Medium
Gamborg B-5
Heller/ White
Salt Mixture
Salt Mixture
DKW Basal
DKW Basal
Gamborg
All components
Sucrose
Sucrose
Medium
Mixture
Mixture
expressed in mg/L
COMPONENT D190 D191 D189 G768 G398 G359 G371 H393 H396 H353 K413 K427
Aluminum Chloride•6H2O 0.0543 0.03
Ammonium Nitrate 1416 1416 1416 1000 600 600
Ammonium Phosphate, 115.03
Monobasic
Ammonium Sulfate 134 134 200
Boric Acid 4.8 4.8 4.8 3 3 3 0.3 1 1.24 2.86 3 3
Calcium Chloride, Anhydrous 112.5 112.5 112.5 113.24 113.24 113.24 56.7 453 453
Calcium Nitrate 1367 1367 1367 241.2 300 656.4
Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.25 0.025 0.025 0.025
Cupric Sulfate•5H2O 0.25 0.25 0.25 0.025 0.025 0.25 0.025 0.03 0.03 0.08 0.025 0.025
Na2EDTA•2H2O 45.4 45.4 45.4 37.26 37.26 186.0 37.25 3.35 37.26 37.26
Ferric Chloride 1
Ferrous Sulfate•7H2O 33.8 33.8 33.8 27.8 27.8 139.0 27.85 25 2.5 27.85 27.85
Magnesium Sulfate, Anhydrous 361.49 361.49 361.49 122.09 122.09 122.09 17.099 122.1 351.63 240.76 146.55 146.55
Manganese Chloride•4H2O 1.81
Manganese Sulfate•H2O 33.5 33.5 33.5 10 10 132.0 1 0.0758 0.01 10 10
Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.39 0.39 0.39 0.25 0.25 0.25 0.025 0.25 0.25
Molybdenum Trioxide 0.016
Nickel Chloride 0.03 0.03
Nickel Sulfate•6H2O 0.005 0.005 0.005
Potassium Chloride 300 65 750 65 300 300
Potassium Iodide 0.75 0.75 0.75 0.8 0.01 0.01 0.75 0.75
Potassium Nitrate 2500 2500 1000 1000 80 606.6 1900 1900
Potassium Sulfate 1559 1559 1559
Sodium Nitrate 600
Sodium Phosphate Monobasic 150 150 90.0 108.75 16.5
Sodium Sulfate 200
Zinc Nitrate•6H2O 17 17 17
Zinc Sulfate•7H2O 2 2 3 0.3 1 1 0.22 2 2
p-Aminobenzoic Acid 0.2 0.02
L-Arginine (Free Base) 40
L-Ascorbic Acid 0.4 2
Asparagine 40
D-Biotin 0.00025 0.2 0.01
D-Calcium Pantothenate 0.4 1
Choline Chloride 0.2 1
Citric Acid (Free Acid) Anhydrous 40
Cyancobalamin, Vit B12 0.02
Folic Acid 0.015 0.4
Fumaric Acid 40
L-Glutamine 60
Glycine (Free Base) 20 4
L(-)-Maleic Acid 40
L-Methionine 30.0
myo-Inositol 100 100 10 100
Nicotinamide 1
Nicotinic Acid (Free Acid) 1 0.5 0.1
L-Phenylalanine 20
Pyridoxine•HCI 1 0.5 0.1 1
Pyruvic Acid 20
Riboflavin 0.015 0.2
Sucrose 10,000 30,000
Thiamine•HCI 10 0.5 1 1
L-Tryptophan 40
Vitamin A 0.01
Vitamin D3 0.01
Grams of powder to prepare 1 liter 5.22 15.22 35.22 3.10 3.21 3.64 2.71 1.64 1.04 1.63 3.65 3.9
pH±0.5 at RT 4.3 4.0 4.1 4.0 33
4.0 NS 3.9 4.9 4.7 4.5 4.0 4.4
NS = No Specification Established
rev 11/2005
5
Product Package
Number Size
L689 LINSMAIER & SKOOG BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
This medium may be sold as Murashige & Skoog Medium with Minimal Organics Soluble In Water 10 L
(MSMO) by some media suppliers. 50 L
Contains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Linsmaier &
Skoog (1965).
L477 LINSMAIER & SKOOG MODIFIED BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
pH Adjusted and Buffered Soluble In Water 10 L
This medium may be sold as Murashige & Skoog Medium with Minimal Organics 50 L
(MSMO) by some media suppliers.
Skoog (1965).
L467 LINSMAIER & SKOOG BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
w/ 30 g/L SUCROSE & 7 g/L AGAR Soluble In Water 10 L
Contains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Linsmaier & 50 L
Skoog (1965).
L452 LINSMAIER & SKOOG MODIFIED BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
w/ 30 g/L SUCROSE & 7 g/L AGAR Soluble In Water 10 L
pH Adjusted and Buffered 50 L
Skoog (1965).
L154 LLOYD & McCOWN WOODY PLANT BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the WPM macro- and micronutrients as described by Lloyd & McCown Soluble In Water 10 L
(1981). 50 L
L449 LLOYD & McCOWN WOODY PLANT BASAL MEDIUM w/ VITAMINS Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the WPM macro- and micronutrients, and vitamins as described by Lloyd & Soluble In Water 10 L
McCown (1981). 50 L
L444 LLOYD & McCOWN WOODY PLANT MICRONUTRIENT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the WPM micronutrients described by Lloyd & McCown (1981). Soluble In Water 10 L
M419 MG BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Modified Murashige & Skoog/ Gamborg Basal Salt Mixture Soluble In Water 10 L
MURASHIGE & SKOOG BASAL SALTS & MEDIA
See Murashige & Skoog-Based Basal Salts & Media Section (following this section)
N492 NB BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Modified Chu/ Gamborg Basal Medium Soluble In Water 10 L
Contains the macronutrients as described by Chu (1975) and the micronutrients as 50 L
described by Gamborg, et al. (1968).
N613 NITSCH & NITSCH BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients as described by Nitsch & Nitsch (1969). Soluble In Water 10 L
N616 NITSCH & NITSCH BASAL MEDIUM w/ VITAMINS Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Nitsch & Nitsch Soluble In Water 10 L
(1969). 50 L
N608 NITSCH & NITSCH VITAMIN POWDER (1000x)
N603 NITSCH & NITSCH VITAMIN SOLUTION (1000x)
34
6
Plant Micronutrient Mixture
Nitsch & Nitsch Basal Salt

Linsmaier & Skoog Basal
Lloyd & McCown Woody

Modified Basal Medium,
Plant Basal Salt Mixture

Modified Basal Medium
Buffered & pH Adjusted
(Modified MS/Gamborg
MG Basal Salt Mixture
Nitsch & Nitsch Basal

Plant Basal Medium
Linsmaier & Skoog
Linsmaier & Skoog
Linsmaier & Skoog
Basal Salt Mixture)
NB Basal Medium
Basal Medium
(MSMO)
(MSMO)
All components
Medium
Medium
Mixture
expressed in mg/L
COMPONENT L689 L477 L467 L452 L154 L449 L444 M419 N492 N613 N616
Ammonium Nitrate 1650 1650 1650 1650 400 400 720 720
Ammonium Sulfate 33.5 463
Boric Acid 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 2.3 3 10 10
Calcium Chloride, Anhydrous 332.2 332.2 332.2 332.2 72.5 72.5 72.5 111.36 125.33 166 166
Calcium Nitrate 386 386
Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.0125 0.025
Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.25 0.25 0.25 0.0125 0.025 0.025 0.025
Na2EDTA•2H2O 37.26 37.26 37.26 37.26 37.3 37.3 37.3 18.64 37.26 37.26 37.26
Ferrous Sulfate•7H2O 27.8 27.8 27.8 27.8 27.85 27.85 27.85 13.9 27.8 27.8 27.8
Magnesium Sulfate, Anhydrous 180.7 180.7 180.7 180.7 180.7 180.7 180.7 75.7 90.37 90.372 90.372
Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 16.9 22.3 22.3 22.3 6.7 10 18.9 18.9
Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.125 0.25 0.25 0.25
Potassium Hydroxide 100 100
Potassium Iodide 0.83 0.83 0.83 0.83 0.4 0.75
Potassium Nitrate 1900 1900 1900 1900 1100 2830 950 950
Potassium Phosphate, Monobasic 170 170 170 170 170 170 170 42.5 400 68 68
Potassium Sulfate 990 990
Sodium Nitrate 437.8
Sodium Phosphate Monobasic 32.6
Zinc Sulfate•7H2O 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 2.7 2 10 10
Agar 7000 7000
D-Biotin 0.05
Folic Acid 0.5
Glycine (Free Base) 2 2
MES (Free Acid) 1000 1000
myo-Inositol 100 100 100 100 100 100 100
Nicotinic Acid (Free Acid) 0.5 1 5
Pyridoxine•HCI 0.5 1 0.5
Sucrose 30,000 30,000
Thiamine•HCI 0.4 0.4 0.4 0.4 1 10 0.5
Grams of powder to prepare 1 liter 4.43 5.53 41.43 42.53 2.30 2.41 0.53 1.88 4.10 2.10 2.21
pH±0.5 at RT NS 6.2 NS NS NS NS 4.3 4.0 3.8 NS
35
7

Product Package
Number Size
N479 NLN BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients, and organic constituents as described by Soluble In Water 10 L
Lichter (1982); without sucrose. 50 L
P713 PARKER THOMPSON BASIC C FERN BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients as described by Hickok, et al. (1995). Soluble In Water 10 L
Formulated for the growth of Ceratopteris richardii. 50 L
Q673 QUOIRIN & LEPOIVRE BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients as described by Quoirin & Lepoivre (1977) and Soluble In Water 10 L
Quoirin, et al. (1977). 50 L
R756 ROSE MODIFIED INITIATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Stage I Soluble In Water 10 L
Contains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA 50 L
R757 ROSE MODIFIED MULTIPLICATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Stage II Soluble In Water 10 L
R758 ROSE MODIFIED ROOTING BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Stage III Soluble In Water 10 L
S816 SCHENK & HILDEBRANDT BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients as described by Schenk and Hildebrandt Soluble In Water 10 L
(1972). 50 L
S811 SCHENK & HILDEBRANDT MODIFIED BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains 10 g/L Sucrose; Without Vitamins Soluble In Water 10 L
Contains 10 g/L sucrose, 1⁄2x vitamins, 1⁄2x micro- and 1⁄2x macronutrients. Soluble In Water 10 L
S806 SCHENK & HILDEBRANDT MODIFIED BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Without Calcium Soluble In Water 10 L
Contains vitamins and 10g/L sucrose. Soluble In Water 10 L
S826 SCHENK & HILDEBRANDT VITAMIN POWDER (100x)
36
8
Parker-Thompson Basic C
Quoirin & Lepoivre Basal

Fern Basal Salt Mixture
Rose Modified Initiation

Rose Modified Rooting
Schenk & Hildebrandt

NLN Basal Medium
Multiplication Basal
Modified Basal Salt

Basal Salt Mixture
Rose Modified
Basal Medium
Basal Medium
Salt Mixture
All components
Medium
Mixture
expressed in mg/L
COMPONENT N479 P713 Q673 R756 R757 R758 S816 S811 S808 S806 S813
Ammonium Molybdate 0.037
Ammonium Nitrate 125 400 1650 1650 412.5
Ammonium Phosphate, 300 300 150 300 300
Monobasic
Boric Acid 10 1.86 6.2 6.2 6.2 1.55 5.0 5.0 2.5 5.0 5.0
Calcium Chloride, Anhydrous 19.628 333 333 83.25 151 151 75.5 151
Calcium Nitrate 347 833.77
Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.006 0.1 0.1 0.05 0.1 0.1
Na2EDTA•2H2O 37.3 37.3 20 20 10 20 20
Ferric Sodium EDTA 36.7 36.7 36.7 9.175
Ferrous Sulfate•7H2O 27.8 27.8 15 15 7.5 15 15
Magnesium Sulfate, Anhydrous 61 58.565 175.79 181 181 45.25 195.4 195.4 97.7 195.4 195.4
Manganese Sulfate•H2O 18.95 0.25 0.76 16.9 16.9 4.225 10 10 5 10 10
Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 0.063 0.1 0.1 0.05 0.1 0.1
Potassium Iodide 0.08 0.83 0.83 0.208 1.0 1.0 0.5 1.0 1.0
Potassium Phosphate, Monobasic 125 500 270 170 170 42.5
Zinc Sulfate•7H2O 10 0.52 8.6 8.6 8.6 2.15 1.0 1.0 0.5 1.0 1.0
L-Ascorbic Acid 50 50
6-Benzylaminopurine (BA) 2.0 3.0
D-Biotin 0.05
Citric Acid (Free Acid) Anhydrous 50 50
Folic Acid 0.5
L-Glutamine 800
Glutathion 30
Glycine (Free Base) 2.0 2.0 2.0 2.0
Indole-3-acetic Acid 0.30 0.30
myo-Inositol 100 100 100 100 500 1000
α-Naphthaleneacetic Acid 0.03
Nicotinic Acid (Free Acid) 5.0 0.5 0.5 0.5 2.5 5.0
Pyridoxine•HCI 0.5 0.5 0.5 0.5 0.25 0.5
L-Serine 100
Sucrose 10000 10000 10000
Thiamine•HCI 0.5 0.4 0.4 0.4 2.5 5.0
pH±0.5 at RT 4.5 3.8 3.9 3.5 3.5 5.0 4.2 4.3 4.5 4.3 4.3
NS = No Specification Established
rev 11/2005
37
9

Product Package
Number Size
T853 TM4G BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Soluble In Water 10 L
T868 TM4G BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Soluble In Water 10 L
T856 TOBACCO MODIFIED CALLUS INITIATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA Soluble In Water 10 L
T864 TOBACCO MODIFIED SHOOT MULTIPLICATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
T867 TOBACCO MODIFIED SHOOT & ROOT BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
T861 TOBACCO MODIFIED ROOT INITIATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
W863 WESTVACO WV3 BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Coke (1996b). Soluble In Water 10 L
W865 WESTVACO WV5 BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L

Contains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Coke (1996a). Soluble In Water 10 L
W898 WHITE BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L

Contains the macro- and micronutrients as described by White (1963). Soluble In Water 10 L
Murashige & Skoog Basal Salts and Media following this section.
38
10
Tobacco Modified Shoot &

TM4G Basal Salt Mixture
White Basal Salt Mixture

Tobacco Modified Callus
Tobacco Modified Shoot

Initiation Basal Medium
Initiation Basal Medium

Tobacco Modified Root
Westvaco WV3 Basal
Westvaco WV5 Basal

TM4G Basal Medium
Root Basal Medium

Multiplication Basal
Medium
Medium
Medium
All components expressed
in mg/L
COMPONENT T853 T868 T856 T864 T867 T861 W863 W865 W898
Ammonium Nitrate 320 320 1650 1650 1650 1650 700
Ammonium Phosphate, Monobasic 230 230
Ammonium Sulfate 130 130
Boric Acid 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 31.0 31.0 1.5
Calcium Chloride, Anhydrous 113.25 113.25 333 333 333 333 452.88 452.88
Calcium Nitrate 208.5
Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025
Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.25 0.25 0.001
Na2EDTA•2H2O 18.65 18.65
Ferric Sodium EDTA 36.7 36.7 36.7 36.7 36.7 36.71
Ferric Sulfate 2.5
Ferrous Sulfate 13.9 13.9
Magnesium Sulfate, Anhydrous 122.12 122.12 181 181 181 181 903.79 903.79 351.62
Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 15.16 15.16 5.31
Molybdenum Trioxide 0.001
Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25
Potassium Chloride 656.79 718.67 65.0
Potassium Iodide 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.75
Potassium Nitrate 1900 1900 1900 1900 1900 1900 910.06 1084.06 80.0
Sodium Phosphate Monobasic 16.5
Sodium Sulfate 200
Zinc Sulfate•7H2O 9.2 9.2 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 3.0
D-Biotin 0.05
Casein, Enzymatic Hydrolysate 1000 1000 1000 1000
Folic Acid 0.5
Glycine (Free Base) 2.5 2.0 2.0 2.0 2.0
Indole-3-acetic Acid 2.0 0.03 3.0
Kinetin 0.2 1.0 1.0
myo-Inositol 100 100 100 100 100 1000 1000
Nicotinic Acid (Free Acid) 5.0 0.5 0.5 0.5 0.5
Pyridoxine•HCI 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Thiamine•HCI 0.5 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
Grams of powder to prepare 1 liter 2.88 2.99 5.41 5.41 5.41 5.41 5.22 0.934
pH±0.5 at RT NS NS 5.5 4.3 NS 5.0 NS NS 4.7
39
11
Murashige & Skoog-Based Basal Salts
Product Package
Number Size
M524 MURASHIGE & SKOOG BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). Soluble In Water 10 L
See Product No. M519 for Murashige & Skoog Basal Medium w/ Vitamins
M499 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains FeNa–EDTA Soluble In Water 10 L
M502 MURASHIGE & SKOOG MACRONUTRIENT SALT BASE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). Soluble In Water 10 L
M654 MURASHIGE & SKOOG MACRONUTRIENT STOCK SOLUTION (10x) Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). Soluble In Water 10 L
M554 MURASHIGE & SKOOG MICRONUTRIENT SALT BASE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). Soluble In Water 10 L
M529 MURASHIGE & SKOOG MICRONUTRIENT STOCK SOLUTION (10x) Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). Soluble In Water 10 L
Contains 1⁄2x macro- and 1⁄2x micronutrients as described by Murashige & Skoog Soluble In Water 10 L
(1962). 50 L
Contains 1⁄2x Ammonium Nitrate and 1⁄2x Potassium Nitrate, with the remaining macro- Soluble In Water 10 L
and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). 50 L
Contains 1⁄2x Ammonium Nitrate, 1⁄2x Potassium Nitrate, and 1⁄2x Calcium Chloride, with Soluble In Water 10 L
the remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). 50 L
Without Ammonium Nitrate. Contains the remaining macro- and micronutrients as Soluble In Water 10 L
described by Murashige & Skoog (1962). 50 L
Without Nitrogen. Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige Soluble In Water 10 L
& Skoog (1962), modified by eliminating NH4NO3 and KNO3. 50 L
Without Nitrogen, Phosphorous, and Potassium Soluble In Water 10 L
Contains the remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog 50 L
(1962).
40
12
MS Macronutrient Salt Base
MS Micronutrient Salt Base

Murashige & Skoog (MS)
MS Macronutrient Stock
MS Modified Basal Salt
MS Micronutrient Stock

(1/2x Micros & Macros)
Mixture (No N, P, or K)
Mixture w/ FeNaEDTA
Mixture (1/2x Nitrates)
Mixture (No Nitrogen)

Mixture (No NH4NO3)
Basal Salt Mixture
Solution (10x)
Solution (10x)
All components
Mixture
Mixture
expressed in mg/L
COMPONENT M524 M499 M502 M654 M554 M529 M153 M561 M290 M571 M531 M407
Ammonium Nitrate 1650 1650 1650 16500 825 825 825
Boric Acid 6.2 6.2 6.2 62 3.1 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2
Calcium Chloride, Anhydrous 332.2 333 332.2 3322 166.1 332.2 166.1 332.2 332.2 332.2
Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.25 0.0125 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025
Na2EDTA•2H2O 37.26 37.26 373 18.63 37.26 37.26 37.26 37.26 37.26
Ferric Sodium EDTA 36.7
Ferrous Sulfate•7H2O 27.8 27.8 278 13.9 27.8 27.8 27.8 27.8 27.8
Magnesium Sulfate, Anhydrous 180.7 181 180.7 1810 90.35 180.7 180.7 180.7 180.7 180.7
Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 169 8.45 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9
Molybdic Acid (Sodium
0.25 0.25 0.25 2.5 0.125 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25
Salt)•2H2O
Potassium Iodide 0.83 0.83 0.83 8.30 0.415 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83
Potassium Nitrate 1900 1900 1900 19000 950 950 950 1900
Potassium Phosphate,
170 170 170 1700 85 170 170 170 170
Monobasic
Zinc Sulfate•7H2O 8.6 8.6 8.6 86 4.3 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6
Grams of powder to prepare
4.33 4.30 4.23 N/A 0.10 NA 2.17 2.56 2.39 2.68 0.78 0.61
1 liter
pH±0.5 at RT 3.9 NS NS 4.3 4.3 3.2 NS 4.3 NS NS 4.3 4.3
NS = No Specification Established Rev. 11/2005
41
13
Murashige & Skoog-Based Media
Product Package
Number Size
M519 MURASHIGE & SKOOG BASAL MEDIUM w/ VITAMINS Storage Temp 2-6° C 1L
With the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Murashige & Skoog Soluble In Water 10 L
(1962). 50 L
Contains the basal salts of Product No. M524
M541 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Without Potassium Phosphate; contains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Soluble In Water 10 L
Disodium EDTA. Contains the remaining macro- and micronutrients, and modified vitamins 50 L
as described by Murashige & Skoog (1962). Also contains (mg/L): 300 Sodium Phosphate
Monobasic, 150 Adenine Hemisulfate, and 1000 Casein Hydrolysate.
M404 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL MEDIUM w/ GAMBORG VITAMINS Storage Temp 2-6° C 1L
With the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962), and Soluble In Water 10 L
vitamins as described by Gamborg, et al. (1966). 50 L
M401 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962); Soluble In Water 10 L
modified with the addition of (mg/L): 1.0 BA and 0.1 NAA 50 L
This medium was formerly listed as M506. Soluble In Water 10 L
This medium may be sold as Murashige Begonia Multiplication Medium by some media 50 L
suppliers. Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog
(1962); modified with the addition of (mg/L): 10 2iP and 30 Adenine Hemisulfate.
Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962); Soluble In Water 10 L
modified with the addition of (mg/L): 30 2iP and 80 Adenine Hemisulfate, and 0.3 IAA 50 L
Without Nicotinic Acid, Pyridoxine•HCl, and Glycine Soluble In Water 10 L
Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962); 50 L
modified with the addition of (mg/L) 0.4 Thiamine•HCl, 100 myo-Inositol, and 80 Adenine
Hemisulfate.
MURASHIGE MEDIUM WITH MINIMAL ORGANICS (MSMO)
See L689 & L477 Linsmaier & Skoog Basal Medium
M536 MURASHIGE MODIFIED MULTIPLICATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Murashige & Skoog Soluble In Water 10 L
(1962); modified with the addition of (mg/L): 2.0 2iP, 80 Adenine Hemisulfate, and 170 50 L
Sodium Phosphate.
M555 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED MULTIPLICATION MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
This medium may be sold as Murashige & Skoog Shoot Multiplication Medium C by some Soluble In Water 10 L
media suppliers. Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & 50 L
Skoog (1962); modified with the addition of (mg/L): 1.0 Kinetin, 80 Adenine Hemisulfate,
and 148 Sodium Phosphate Monobasic.
M527 MURASHIGE MODIFIED MULTIPLICATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
This medium is sold as Murashige Shoot Tip Rooting Medium by some media suppliers. Soluble In Water 10 L
Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962) and 50 L
vitamins as described by Linsmaier & Skoog (1965); modified with the addition of (mg/L):
0.3 IAA, 1.0 Kinetin, and FeNaEDTA.
M491 MURASHIGE MODIFIED SHOOT MULTIPLICATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
This medium is sold as MS Shoot Multiplication Medium A by some media suppliers. Soluble In Water 10 L
Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962) and 50 L
vitamins as described by Linsmaier & Skoog (1965); modified with the addition of (mg/L):
170 Sodium Phosphate Monobasic, 80 Adenine Hemisulfate, 30 2iP, and 0.3 IAA.
MURASHIGE & SKOOG VITAMIN POWDERS & SOLUTIONS
42
See Vitamin Section (following this section)
14
Multiplication Basal Medium

MS Modified Medium w/ 2iP

MS Modified Medium w/ BA
MS Modified Basal Medium
Murashige Modified Shoot

MS Modified Multiplication
Murashige & Skoog Basal
w/ Gamborg Vitamins
Murashige Modified
Murashige Modified
Medium w/ Kinetin
(w/out KH2PO4)
w/ Kinetin & IAA

All components
Medium
& NAA
w/ 2iP
w/ 2iP
& IAA
expressed in mg/L
COMPONENT M519 M541 M404 M401 M701 M702 M535 M536 M555 M527 M491
Ammonium Nitrate 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650
Boric Acid 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2
Calcium Chloride, Anhydrous 332.2 332.2 332.2 332.2 333 332.2 332.2 332.2 332.2 333 333
Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025
Na2EDTA•2H2O 37.26 37.26 37.26 37.26 37.26 37.26 37.26
Ferrous Sulfate•7H2O 27.8 27.8 27.8 27.8 27.8 27.8 27.8
Magnesium Sulfate, Anhydrous 180.7 180.7 180.7 180.7 181 180.7 180.7 180.7 180.7 181 181
Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9
Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25
Potassium Iodide 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83
Potassium Nitrate 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900
Potassium Phosphate, Monobasic 170 170 170 170 170 170 170 170 170 170
Sodium Phosphate Monobasic 300 148 170 148 170
Zinc Sulfate•7H2O 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6
Adenine Hemisulfate 150 30 80 80 80 80 80
6-Benzylaminopurine (BA) 1
Casein, Enzymatic Hydrolysate 1000
Glycine (Free Base) 2 2 2 2.0
6-γ,γ-Dimethylallylaminopurine (2iP) 10 30 30
Indole-3-acetic Acid 1 0.3 0.3 0.3
Indole-3-butyric Acid
Kinetin 1 1
myo-Inositol 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
α-Naphthaleneacetic Acid 0.1 0.1
Nicotinic Acid (Free Acid) 0.5 5 1 0.5 0.5
Pyridoxine•HCI 0.5 1 1 0.5 0.5
Sucrose 30000 30000 30000
Thiamine•HCI 0.1 0.5 10 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
pH±0.5 at RT 3.9 4.0 4.0 4.0 3.9 3.8 4.0 3.5 4.4 NS NS
NS = No Specification Established Rev 11/2005
43
15
MS-Based Plant-Specific Media
Product Package
Number Size
M517 MURASHIGE MODIFIED AFRICAN VIOLET/ GLOXINIA Storage Temp 2-6° C 1L
MULTIPLICATION BASAL MEDIUM Soluble In Water 10 L
Contains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the 50 L
remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).
M518 MURASHIGE MODIFIED AFRICAN VIOLET/ GLOXINIA Storage Temp 2-6° C 1L
PRETRANSPLANT BASAL MEDIUM Soluble In Water 10 L
Contains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the 50 L
remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).
Arabidopsis Culture Medium Soluble In Water 10 L
Modified with the addition of (mg/L): 2.0 2,4-D, and 0.05 Kinetin 50 L
M506 MURASHIGE BEGONIA MULTIPLICATION MEDIUM
See Product No. M701 Murashige & Skoog Modified Medium (same formulation)
M508 MURASHIGE MODIFIED FERN MULTIPLICATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the Soluble In Water 10 L
remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). 50 L
M509 MURASHIGE MODIFIED GERBERA MULTIPLICATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
M510 MURASHIGE MODIFIED GERBERA PRETRANSPLANT BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
H435 HOSTA INITIATION/ MULTIPLICATION MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Stage I/II Medium Soluble In Water 10 L
Modified Murashige & Skoog (1962) with (mg/L): 2.0 BA, 160 Adenine Hemisulfate, 500 50 L
Casein Hydrolysate, and 0.5 NAA
H436 HOSTA MULTIPLICATION MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Stage II Medium Soluble In Water 10 L
Modified Murashige & Skoog (1962) with (mg/L): 0.1 BA, 160 Adenine Hemisulfate, 500 50 L
Casein Hydrolysate, and 0.5 NAA
H437 HOSTA ROOTING MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Stage III Medium Soluble In Water 10 L
Modified Murashige & Skoog (1962) with (mg/L): 0.1 BA, 500 Casein Hydrolysate, and 0.5 50 L
NAA
44
16
Gloxinia Pretransplant Basal Medium

Gloxinia Multiplication Basal Medium
Murashige Modified African Violet /
Murashige & Skoog Basal Medium

Murashige Modified African Violet/
(Published Formula Reference)

Hosta Initiation/ Multiplication
Murashige Modified Gerbera
Murashige Modified Gerbera

Pretransplant Basal Medium
Hosta Multiplication Medium


Murashige Modified Fern
Hosta Rooting Medium

MS Modified Medium
(Arabidopsis)
All components
Medium
expressed in mg/L
COMPONENT M517 M518 M550 M508 M509 M510 H435 H436 H437 M519
Ammonium Nitrate 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650
Boric Acid 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2
Calcium Chloride, Anhydrous 333 333 332.2 333 333 333 332.2 332.2 332.2 332.2
Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025
Na2EDTA•2H2O 37.26 37.26 37.26 37.26 37.26
Ferric Sodium EDTA 36.7 36.7 36.7 36.7 36.7
Ferrous Sulfate•7H2O 27.8 27.8 27.8 27.8 27.8
Magnesium Sulfate, Anhydrous 181 181 180.7 181 181 181 180.7 180.7 180.7 180.7
Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9
Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25
Potassium Iodide 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83
Potassium Phosphate, Monobasic 170 170 170 170 170 170 300 300 300 170
Sodium Phosphate Monobasic 170 255 85 85 170 170 170
Zinc Sulfate•7H2O 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6
Adenine Hemisulfate 80 80 160 160
Agar 8000 8000 8000
6-Benzylaminopurine (BA) 2.0 0.1 0.1
Casein, Enzymatic Hydrolysate 500 500 500
Glycine (Free Base) 2.0 2.0 2.0
2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid 2.0
Indole-3-acetic Acid 2.0 1.0 0.5 10
Indole-3-butyric Acid
Kinetin 2.0 0.05 2.0 10
MES (Free Acid)
myo-Inositol 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
a-Naphthaleneacetic Acid 0.1 0.5 0.5 0.5
Nicotinic Acid (Free Acid) 1.0 10 10 0.5
Peptone from Meat
Pyridoxine•HCI 1.0 1.0 1.0 0.5
Sucrose 20000 30000 30000 30000
Thiamine•HCI 0.4 0.4 10 0.4 30 30 0.4 0.4 0.4 0.1
L-Tyrosine 100 100
Grams of powder to prepare 1 liter 4.66 4.4 24.44 4.66 4.72 4.64 43.40 43.39 43.23 4.43
pH±0.5 at RT 4.0 4.8 4.0 4.5 NS 5.9 4.3 4.3 4.3 3.9
NS = No Specification Established Rev 11/2005
45
17
MS-Based Plant-Specific Media (continued)
Product Package
Number Size
M511 MURASHIGE MODIFIED KALANCHOE MULTIPLICATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
M512 MURASHIGE MODIFIED KALANCHOE PRETRANSPLANT BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
M513 MURASHIGE MODIFIED LILY MULTIPLICATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
M462 MUSA (BANANA) MULTIPLICATION MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
IITA Formulation as described by Vuylsteke (1998). Soluble In Water 10 L
M516 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BC POTATO BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Kalanchoe
Kalanchoe
Murashige
Murashige
Murashige
BC Potato
transplant
Lily Multi-
(Banana)
Modified
Modified
Modified
Modified
All components
plication
plication
plication
Medium
Medium
Medium
Medium
Medium
Basal
Basal
Basal
Basal
Musa
Multi-
Mult-
Pre-
MS
expressed in mg/L
COMPONENT M511 M512 M513 M462 M516
Ammonium Nitrate 1650 1650 1650 1650 1650
Boric Acid 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2
Calcium Chloride, Anhydrous 333 333 333 332.2 333
Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025
Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025
Na2EDTA•2H2O 37.25
Ferrous Sulfate•7H2O 27.85
Magnesium Sulfate, Anhydrous 181 181 181 180.74 181
Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9
Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25
Potassium Iodide 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83
Potassium Nitrate 1900 1900 1900 1900 1900
Potassium Phosphate, Monobasic 170 170 170 170 170
Zinc Sulfate•7H2O 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6
L-Ascorbic Acid 20
6-Benzylaminopurine (BA) 4.5
Gelrite 2000
D-Glucose 2.0
Glycine (Free Base) 2.0 2.0
6-γ,γ-Dimethylallylaminopurine (2iP) 3.0
Indole-3-acetic Acid 3.0 0.175
Kinetin 0.04
myo-Inositol 100 100 100 100
α-Naphthaleneacetic Acid 0.03
Nicotinic Acid (Free Acid) 0.5 0.5
Pyridoxine•HCI 0.5 0.5
Sucrose 30,000
Thiamine•HCI 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
Grams of powder to prepare 1 liter 4.41 4.41 4.4 36.36 4.41
pH±0.5 at RT 4.8 4.8 4.8 4.3 NS
NS = No Specification Established 46
18
Vitamins
Product Package
Number Size
C149 CHU N6 VITAMIN SOLUTION (1000x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins as described by Chu (1975). Soluble In Water
E330 ERIKSSON VITAMIN SOLUTION (1000x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins as described by Eriksson (1965). Soluble In Water
G249 GAMBORG VITAMIN POWDER (1000x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins as described by Gamborg, et al. (1968). Soluble In Water
G219 GAMBORG VITAMIN SOLUTION (1000x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins as described by Gamborg, et al. (1968). Soluble In Water
K421 KAO & MICHAYLUK VITAMIN SOLUTION (100x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins described by Kao & Michayluk (1975). Soluble In Water 500 mL
Plant Tissue Culture Tested 1L
M533 MURASHIGE & SKOOG VITAMIN POWDER (1000x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins as described by Murashige & Skoog (1962). Soluble In Water 250 mL
M553 MURASHIGE & SKOOG VITAMIN SOLUTION (1000x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins as described by Murashige & Skoog (1962). Soluble In Water
M547 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED VITAMIN POWDER (1000x) 100 mL
Murashige & Skoog (1962) vitamins modified with additional Thiamine•HCl. 250 mL
M557 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED VITAMIN SOLUTION (1000x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Murashige & Skoog (1962) vitamins modified with additional Thiamine•HCl. Soluble In Water
N608 NITSCH & NITSCH VITAMIN POWDER (1000x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins as described by Nitsch & Nitsch (1969). Soluble In Water 250 mL
N603 NITSCH & NITSCH VITAMIN SOLUTION (1000x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins as described by Nitsch & Nitsch (1969). Soluble In Water
S826 SCHENK & HILDEBRANDT VITAMIN POWDER (100x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins as described by Schenk & Hildebrandt (1972). Soluble In Water 1L
Gamborg Vitamin
Gamborg Vitamin
Kao & Michayluk

Eriksson Vitamin
Solution (1000x)
Solution (1000x)
Solution (1000x)
Solution (1000x)
Vitamin Solution
Vitamin Solution
Vitamin Solution
Powder (1000x)
Powder (1000x)
Chu N6 Vitamin
Vitamin Powder
Vitamin Powder
Vitamin Powder
Nitsch & Nitsch
Nitsch & Nitsch

MS Modified
MS Modified
Hildebrandt
MS Vitamin
MS Vitamin
Schenk &
All components
(1000x)
(1000x)
(1000x)
(1000x)
(100x)
(100x)
expressed in mg/L
COMPONENT C149 E330 G249 G219 K421 M533 M553 M547 M557 N608 N603 S826
p-Aminobenzoic Acid 2.0
L-Ascorbic Acid 200
D-Biotin 1.0 50 50
D-Calcium Pantothenate 100
Choline Chloride 100
Cyancobalamin, Vit B12 2.0
Folic Acid 40.0.0 500 500
Glycine (Free Base) 2000 2000 2000 2000 2000 2000 2000 2000
myo-Inositol 100000 100000 10000 100000 100000 100000 100000 100000 100000 100000
Nicotinamide 100
Nicotinic Acid (Free Acid) 500 500 1000 1000 500 500 500 500 5000 5000 500
Pyridoxine•HCl 500 500 1000 1000 100 500 500 500 500 500 500 50.0
Riboflavin 20.0
Thiamine•HCI 1000 500 10000 10000 100 100 100 1000 1000 500 500 500
Vitamin A 1.0
47
Grams of powder to prepare 1 L N/A N/A 112 N/A N/A 103.1 N/A 104 N/A 108.55 N/A 101.05
Rev 11/2005

Manual CTV May2009

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INSTITUTO TECNOLÓGICO

Fecha de Efectividad: 05 de Febrero de 2009

De Técnicas de Cultivos Vegetales.

Elaboró: Revisó: Autorizó:

El cultivo de tejidos vegetales o cultivo in vitro de tejidos vegetales, es una técnica de

A diferencia de las técnicas tradicionales de cultivo, esta poderosa herramienta permite la

Cultivo in vitro de árboles frutales o Multiplicación o reproducción de frutal in vitro

El cultivo in vitro es un método de propagación de plantas de aplicación profesional, puesto que

Lo fundamental es que se hace en unas condiciones muy controladas y totalmente estériles:

La planta ya desarrollada en el cultivo in vitro necesita una primera aclimatación en el

Fase de aclimatación en invernadero

Aplicaciones prácticas del cultivo in vitro:

• Propagación vegetativa. Esto es lo más práctico. Dos técnicas: Micropropagación de

• Producción de plantas libres de virus mediante dos técnicas:

• - Micro injerto in vitro

• Eliminar la inhibición de germinación de las semillas. El cultivo in vitro es lo más eficaz

• Prevención del aborto embrionario como resultado de incompatibilidad. Se da en

• Producción de haploides. Cruzamientos o cultivo de polen (anteras).

• Obtención rápida de homocigotos.

• - Producción de híbridos (frutos puros).

Equipo necesario para el cultivo in vitro

- Cámara de flujo laminar

Condiciones del cultivo in vitro

• En la cámara de flujo laminar no puede entrar material contaminado. El problema más

• En el autoclave no se pueden meter determinadas sustancias, como vitaminas,

• Los reguladores de crecimiento (hormonas) son imprescindibles, ya que sin ellos no se

• El pH ideal es 6, pero puede oscilar entre 5,5 y 6,5.

• Se necesita agar y medio sólido 0,6-0,9%.

• El medio de cultivo es secreto, y se pueden tardar dos años en prepararlo.

• En la cámara de cultivo se aplican cantidades variables de luz (16-20 horas). También

• Igualmente, en el éxito de esta técnica de propagación también influyen determinadas

• En cuanto a los recipientes, deben permitir el intercambio de gases, pero evitar la

Ocurre entonces lo siguiente:

- El medio nutritivo se agota y se seca.

1. Toma un ápice meristemático (0,2-1 mm).

Fases del cultivo de embriones

Se utiliza mucho en manzano.

1. Se desinfecta el fruto en alcohol. Se flamea.

Se parte de una yema, de bráctea o axilar.

Se empieza a desarrollar en el medio de cultivo.

El número de subcultivos depende del material vegetal.

Ejemplo de micropropagación de Kiwi:

- Se parte de un trozo de tallo.

Cultivo de callo in vitro

A partir de entonces se desarrolla normalmente.

Obtención de plantas haploides

Normalmente se trabaja con la antera en su totalidad, no con granos de polen en particular.

• Embriogénesis: se forman células (poliembriones).

No se riega nunca por aspersión (riesgo de patógenos), siempre con regadera.

Problemas en el cultivo in vitro

Reporte de práctica: Selecciones la(s) opciones a solicitar

Parte 2.-Explante libre de Contaminación (Confirmación).

Reporte de práctica: Selecciones la(s) opciones a solicitar

Reporte de práctica: Selecciones la(s) opciones a solicitar

En caso de no contar con el medio de cultivo en el laboratorio; preparar las soluciones a

1 - PREPARACIÓN DE LA Murashige y SK00G BASAL MEDIO (EM)

1.- FORMULACION DEL MURASHIGE Y SK00G BASAL MEDIO (EM)

Solución Stock B MgSO4

Solucion Stock D Vitaminas

100 ml de solución madre A

2.- PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN VGA * (VITAMINAS Y ÁCIDO GIBERÉLICO)

1.- Para 500 ml de mezcla VGA mesclar lo siguiente:

3.- Distribuir esta solución en viales de 20 ml.

3.- PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE VITAMINAS

Calcium chloride (CaCl22H2O) 96mg/l Na2EDTA2H2Oa 37.2mg/lb

Magnesium sulfate (MgSO47H2O) 370mg/l Cupric Sulfate (CuSO45H2O) 0.25mg/l

Calcium nitrate (Ca(NO3)24H2O 556mg/l Zinc Sulfate (ZnSO47H2O) 8.6mg/l

PyridoxineHCl 0.5mg/l Thiamine HCl 1.0mg/l