Laboratorio de Bioquímica

Transaminación

TRANSAMINACIÓN
Amaya Cabrera Lina María1; Cuarán Guisella Elena 2; Quintero Peña Daniela3; Quiñonez Correa
Vanessa4
lina.amaya00@usc.edu.co1; guisella.cuaran00@usc.edu.co2, daniela.quintero06@usc.edu.co3,
vanessa.quinonez00@usc.edu.co4
Facultad de Ciencias Básicas, Universidad Santiago de Cali, Cali Colombia.
Entregado: 08 de noviembre del 2023

RESUMEN
El objetivo de la practica consistió en utilizar un corazón de ternero como extracto enzimático para
catalizar la reacción con aminoácidos L-alanina, α-cetoácido y α-cetoglutarato, mediante la
cromatografía de papel en el cual se preparó 5 soluciones, la primera solución se tomó como control
o tiempo cero, la 2 y 3 solución contenían sustrato en el cual diferían la temperatura de la reacción, y
la solución 4 y 5 fueron tomadas como blancos. Se obtuvo como resultado que la solución 3 presentó
el sustrato y la temperatura necesaria para que ocurriera la reacción, en el cual se identificó la Alanina
y Glutamato.

INTRODUCCIÓN
El primer fenómeno químico que acontece durante la degradación de los aminoácidos y en el último
paso en la síntesis de estos, es una transaminación. La transaminación consiste en la transferencia del
grupo amino de un aminoácido a un cetoácido para formar el aminoácido análogo y producir el
cetoácido del donador original del grupo amino 1. Este proceso ocurre en dos etapas (Imagen 1):

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Imagen 1. Transaminación1
Primera etapa: El grupo amino de un aminoácido se transfiere a la enzima, produciendo el cetoácido
correspondiente y la enzima aminada1. Imagen 2.

Imagen 2. Primera etapa de transaminación1

La segunda etapa consiste en la transferencia del grupo α-amino al cetoácido aceptor (α-cetoglutarato)
formando el aminoácido producto (glutamato) y regenerando la enzima1, Imagen 3.

Imagen 3. Segunda etapa de transaminación1

MÉTODOS

• Preparación del extracto enzimático.

1. Pesar aproximadamente 30 g de corazón de ternero fresco.
2. Seguidamente, cortar en pedazos pequeños y colocarlos en la licuadora con 60 ml de
amortiguador de fosfatos 0.01 M, pH 7.4. y homogenizarlo durante unos 3 minutos.

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3. Repartir el volumen en dos tubos de centrífuga.

4. Centrifugar a 3000 r.p.m. durante 15 minutos.
5. Decantar el sobrenadante en un tubo de ensayo y descartar los sedimentos.
• Reacción de transaminación:
6. Preparar cinco tubos de ensayo con las siguientes mezclas de soluciones
7. Para el tubo 1 adicionar 2,00 mL de Amortiguador M/15 pH 7, con 1,00 mL de H20 y 1,00
mL de la solución de (Alanina con acido glutámico)
8. Para el tubo 2 adicionar 1,00 mL de la solución (Alanina con cetoglutarato), adicionar 2,00
mL de amortiguador M15 pH 7.4 y 1,00 mL de extracto enzimático
9. Para el tubo 3 adicionar 1,00 mL de la solución (Alanina con cetoglutarato) adicionar 2,00
mL de amortiguador M/15 pH 7.4 y 1,00 mL de extracto enzimático
10. Para el tubo 4 adicionar 1,00 mL de la solución (Alanina con cetoglutarato), adicionar 2,00
mL de amortiguador M15 pH 7.4 y 1,00 mL de H2O destilada
11. Para el tubo 5 adicionar 2,00 mL de amortiguador M15 pH 7.4 y 1,00 mL de H2O destilada
y 1,00 mL de ácido glutámico.
12. Cuando se mezclen los ingredientes del tubo 1 (control tiempo cero) añadir 0,2 mL de
ácido acético al 4 %, seguidamente mezclar. Colocar el tubo en un baño de ebullición
durante 3 minutos.
13. Dejar enfriar y filtrar en un tubo de ensayo. Luego, descartar el residuo. El filtrado libre
de proteínas del tubo 1 es para la cromatografía.
14. Antes de añadir la enzima, Calentar el tubo 2 a ebullición durante 3 minutos.
Seguidamente, agregar la enzima y añadir 0,5 mL de ácido acético al 4%. Filtrar en un
tubo de ensayo y descartar el residuo.
15. Los tubos 3 y 5 deben ser incubados por 30 minutos en un baño de agua mantenida a 30 –
35ºC
16. Al terminar la incubación, añadir 0,5 mL de ácido acético 4% y colocarlos en el baño de
agua hirviendo por 3 minutos;
17. Seguidamente filtrarlos. Guardar los diferentes tubos para la cromatografía.

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• Cromatografía de papel:
18. Colocar la tira de papel para cromatografía sobre una hoja limpia. Seguidamente, Manejar
el papel solo por las puntas.
19. Luego, trazar una línea fina con un lápiz de grafito a 2 cm del borde inferior. Marque 5
puntos sobre la línea, con 2 cm de separación entre ellos.
20. Utilizar cinco tubos capilares, seguidamente realizar 3 aplicaciones sobre cada uno de los
puntos, secando la muestra antes de volver a aplicar sobre el mismo punto, así (utilice un
capilar diferente para cada muestra). Posteriormente, enrollar la tira de papel teniendo
cuidado de que las muestras queden afuera y manejando el papel solo por el borde superior.
Sujete el borde superior con un “clip” tratando de formar un cilindro.
21. Colocarlo en 30 mL del solvente en el Erlenmeyer sin humedecer las paredes.
22. Introducir el papel enrollado dentro del erlenmeyer, con el borde que contiene las muestras
hacia abajo, en el centro del recipiente evitando el contacto entre el papel y las paredes del
vaso.
23. Tapar el erlenmeyer con el tapón y dejarlo quieto hasta que el frente del solvente haya
llegado a 2 cm del borde superior. Cuando esto ocurra, secar el papel con cuidado y
cuélguelo en un sitio ventilado para que termine el secado.
24. Solicitar al profesor que sea rociado con el reactivo de ninhidrina (evite respirar los
vapores) y colóquelo en una estufa a 110º C por 5 minutos.
25. Observar las manchas de color púrpura que aparecen en el papel. Luego, Trazar el
perímetro de las manchas con lápiz establezca su Rf.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Los aminoácidos desempeñan un papel central en el metabolismo celular y los organismos necesitan
sintetizar la mayoría de ellos. Dentro de sus funciones biológicas se destaca que son metabolitos
energéticos y nutrientes esenciales. Una de las reacciones en la que se ven involucrados los
aminoácidos es la transaminación, la cual es considera esencialmente importante ya que su objetivo

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es recoger los grupos aminos de muchos aminoácidos diferentes en forma de un solo, como es el caso
del glutamato que se encargara de canalizarlos hacia rutas biosintéticas o hacia productos nitrogenados
de excreción, Imagen 4.2 Estos productos nitrogenados que son liberados como amoniaco se reutilizan
en la síntesis de aminoácidos y la parte que es excretada a través de la orina, puede convertirse en urea
la cual tiene un lugar principal en el hígado, donde se lleva a cabo la mayor parte de biosíntesis de
aminoácidos no esenciales.2 De una forma resumida la importancia de la transaminación permite lo
siguiente:
1. Generación de energía
2. Síntesis de glucosa
3. Formación de cuerpos grasos o cetónicos
4. Producción de aminoácidos no esenciales

Imagen 4. Metabolismo de los aminoácidos2

En la experimentación, se llevó a cabo la extracción de la enzima Alanina aminotransferasa, que

cataliza la reacción de transaminación entre L-alanina y el α-cetoglutarato. Posterior a la extracción,
se prepararon soluciones para llevar a cabo la catálisis y obtener la reacción de transaminación

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deseada. Las soluciones muestra se inyectaron en placa TLC, para proceder a realizar la separación
cromatografica.

El análisis realizado para los resultados obtenidos se presentan a continuación:

1. Solución 1: La solución 1 se denominó control o tiempo cero. Es la solución que permite

conocer el resultado de la inhibicación enzimatica. La inhibicion enzimatica se realiza para
obtener una solución final libre de proteínas y con presencia unicamente de los productos
provenientes de la acción enzimatica. Dicha inhibición se realiza al adicionar ácido acético y
exponer la solución a un baño en ebullición por 3 minutos. Lo anterior, permite la precipitación
de las proteínas sustrato, para posteriormente ser descartadas por filtración, y la
desnaturalización de la enzima (modificación de su estructura tridimensional).

En este caso específico, se observan manchas obtenidas a partir de la solución 1, generando

un resultado contradictorio al esperado. Dado que, no se deben evidenciar manchas al eluir
esta solución. El resultado se deduce que se debe a una contaminación al momento de inyectar.

2. Solución 2: La solución 2 presenta el sustrato necesario para la reacción enzimatica, pero sin
la condición de temperatura requerida para que se lleve a cabo la reacción. Posterior a la
inhibicion enzimatica e inyección de la muestra, se obtuvieran dos manchas en la placa; siendo
este un resultado contradictorio al esperado.
De acuerdo a lo obtenido, si fue posible desarrollar la reacción enzimatica sin las condiciones
necesarias para ello; siendo esto contradictorio a lo planteado. El resultado se deduce que es
debido a contaminación al momento de inyectar o a un posible mal tratamiento de la muestra,
que acarreara el desarrollo de la catalisis enzimática.

3. Solución 3: La solución 3 presenta el sustrato necesario para desarrollar la reacción enzimática

y la condicion de temperatura (incubación) requerida para ello, asemejando la temperatura
corporal. Al realizar la inhibición enzimatica y la inyección, se ovbtuvieron 2 manchas

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correspondienres a la Alanina y Glutamato. La alanina al ser un aminoácido no polar, posee

baja afinidad por el solvente, generando que la distancia recorrida en la placa de TLC sea
menor con respecto a la del Glutamato. En el caso contrario, el Glutamato es un amino acido
polar y presenta gran afinidad por el solvente, permitiendo una mayor distancia recorrida al
eluir.

4. Soluciones 4 y 5: Las soluciones 4 y 5 son empleadas como blanco, para determinar la posición
de las manchas obtenidas en la solución 3 (solución en la que se llevó a cabo la
transaminación).

En la imagen 5 se presenta la TLC obtenida, mientras que, en la tabla 1 se presentan los valores de Rf
calculados mediante la ecuación 1. Adicional, en la reacción 1 se describre la reacción de
transaminación desarrollada.
𝐴𝑙𝑎𝑛𝑖𝑛𝑎 + α − cetoglutarato ↔ Piruvato + Glutamato
Reacción 1. Reacción de transaminación, catalizada por la Alanina aminotransferasa.

Glutamato

Alanina

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4(blanco) Tubo 5(blanco)

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Imagen 5. Cromatografía de capa fina: transaminación,

𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑎𝑐𝑖𝑑𝑜

𝑅𝑓 =
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒
Ecuación 1.

Tabla 1. Valores de Rf característicos de Alanina y Ácido glutámico

Tubo Distancia Distancia Rf Alanina Rf Glutamato
recorrida recorrida
Alanina (cm) Glutamato (cm)
3 3,8 4,2 0,44 0,49
Distancia recorrida por el solvente= 8,6 cm

PREGUNTAS

1. ¿En qué tubos ocurrió la reacción de transaminación?

La reacción de transaminación ocurrió en la Solución 3. Esta solución contenía el sustrato necesario
para la reacción enzimática y se incubó a la temperatura requerida para que ocurriera la
transaminación. Las manchas correspondientes a la alanina y el glutamato en la placa de TLC indican
la presencia de los productos de la reacción de transaminación en esta solución.
2. ¿En los que la reacción no se llevó a cabo, por qué sucedió esto?
La reacción de transaminación no se llevó a cabo en las Soluciones 1 y Soluciones 2
la solucion 1, se denominó tubo de control . Esta solución que permite conocer el resultado de la
inhibicación enzimatica. Lo cual tenia como objetivo desnaturalizar la enzima y eliminar las proteínas
sustrato. En la solución 2, se proporcionó el sustrato necesario para la reacción enzimática, pero no se
cumplieron las condiciones de temperatura requeridas para que la reacción se lleve a cabo.
3. ¿Cuál es la importancia de las reacciones de transaminación en el metabolismo celular?
Las reacciones de transaminación son esenciales para el metabolismo celular, ya que facilitan la
síntesis de aminoácidos, la eliminación de grupos nitrogenados, la producción de energía y la

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interconexión de rutas metabólicas. Estas reacciones desempeñan un papel fundamental en la

homeostasis del organismo y son esenciales para mantener la función celular y el equilibrio
metabólico. 3
• Síntesis de aminoácidos no esenciales: Estas reacciones permiten la conversión de
aminoácidos intermedios o precursores en aminoácidos específicos.importante para mantener
un suministro adecuado de aminoácidos en el organismo.
• Eliminación de grupos nitrogenados: los grupos amino de aminoácidos se transfieren a un
aceptor, generalmente el alfa-cetoglutarato, formando productos como el glutamato. Esto
permite la eliminación de grupos nitrogenados en forma de amoníaco o urea. La eliminación
de amoníaco evita la toxicidad en el cuerpo y mantiene un equilibrio de nitrógeno.
• Producción de energía: Los productos de estas reacciones pueden alimentar el ciclo de Krebs
en la respiración celular, lo que resulta en la producción de ATP.

• Interconexión de rutas metabólicas: Esto permite la conversión de metabolitos entre rutas,

importante para mantener el equilibrio metabólico y satisfacer las demandas energéticas y
sintéticas del organismo. 3

CONCLUSIONES
La transaminación es una reacción bioquímica esencial en el metabolismo celular que tiene un impacto
significativo en la síntesis de aminoácidos, la eliminación de nitrógeno y la producción de energía.
Los resultados en la solución 3, indicaron que la transaminación se llevó a cabo con éxito, generando
los productos deseados alanina y glutamato, lo que demuestra la importancia de las condiciones
adecuadas y la presencia de sustrato y enzima para que la reacción ocurra.
En algunas soluciones se observaron resultados contradictorios, lo que podría atribuirse a la
contaminación de las muestras o al mal tratamiento de estas.
Los resultados obtenidos nos permiten enfatizar la importancia de controlar adecuadamente las
condiciones de la práctica, para así obtener mejores resultados.

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BIBLIOGRAFÍA

[1] Cuamatzi, O. (2019). Bioquímica de los procesos metabólicos. Editorial; Reverté. p 260.
https://www.google.com.co/books/edition/Bioqu%C3%ADmica_de_los_procesos_metab%C3%B3li
cos/SarRDwAAQBAJ?hl=es&gbpv=1&dq=en+que+consiste+la+transaminacion+en+bioquimica&p
g=PA259&printsec=frontcover

[2] Metabolismo de Proteínas y aminoácidos. (24 de abril de 2019). Universidad Las Palmas de Gran
Canaria. https://www2.ulpgc.es/hege/almacen/download/23/23973/tema1415.doc

[3] Metabolismo de aminoácidos. Pilar Carbonero Zalduegui. Universidad Politecnica Madrid

https://oa.upm.es/54762/1/METABOLISMO.pdf

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