IDENTIFICACIÓN DE LOS CUERPOS CETONICOS EN LA ORINA.

DETERMINACION SEMICUANTITATIVA DE CUERPOS CETONICOS EN ORINA

I. INTRODUCCION:

La beta oxidación de los ácidos grasos en el hígado, a nivel mitocondrial, produce acetil CoA
que ingresa al Ciclo de Krebs y en parte se utiliza en la síntesis de cuerpos cetónicos
(cetogénesis). Estos son el ácido acetoacético, el ácido beta hidroxibutírico y la acetona. Los
dos primeros pasan a la sangre y son fuente de energía en los tejidos extrahepáticos como el
corazón y el músculo esquelético, incluyendo el cerebro en el ayuno prolongado. Los
cuerpos cetónicos son eliminados por la orina y la acetona también por la respiración.

Su concentración normal en orina es de 125 mg/ 24 horas, y en sangre hasta 1mg/dl.

Aumentan en sangre (cetonemia) y en orina (cetonuria) por condiciones fisiológicas como el
ayuno prolongado, en la dieta pobre en carbohidratos. En condiciones patológicas como la
Diabetes mellitus, el hiperinsulinismo, en la enfermedad de Von Gierke y otras glucogenosis,
en los vómitos, en el síndrome de Fanconi, en toda hipercatabólica como la fiebre,
hipertiroidismo. En la Diabetes mellitus, el aumento de la lipólisis, de la beta oxidación y de
la cetogénesis, al superar la capacidad de oxidación de los tejidos extrahepáticos lleva a
niveles aumentados de cuerpos cetónicos. Dado que éstos son ácidos se produce acidosis
metabólica, la denominada cetoacidosis diabética. El diagnóstico y monitoreo de su
tratamiento se hace con su determinación en sangre o/i orina.

II. REACTIVOS A UTILIZAR:

- Sulfato de amonio, cristales.
- Nitroprusiato de sodio, solución al 10% en H2O
- Cloruro Férrico, solución al 5% en H2O.

III. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES: Procedimiento

INVESTIGACION DE ACETONA

- Disponer de dos tubos que contengan orina normal y orina patológica.

Prueba de Legal

El nitroprusiato de sodio diluido en presencia de cuerpos cetónicos, especialmente de

acetona, rinde un color azul violeta. Procedimiento:
 Armar el siguiente sistema:

Prueba de Rothera

 Trabajar del tubo identificado como orina patológica

 Utilizar nitroprusiato en polvo, de la siguiente manera:
 En una lámina de porcelana con excavaciones colocar 0.2 g de reactivo
sólido de nitroprusiato de sodio en cada una de éstas.
 Diluir la orina al 1/10, 1/20, 1/30, etc; de la siguiente manera:

 Agregar una gota de cada una de las diluciones, en cada una de las
excavaciones que contiene el reactivo.
 Observar la máxima dilución de la orina en el que aparece color azul violeta
y multiplicar por el denominador de la dilución alcanzada por 10 y se tendrá
la cantidad aproximada de acetona en mg por 100ml.

Esto es debido a que el nitroprusiato de sodio en polvo da reacción positiva solo

cuando en la orina sin diluir alcanza la concentración mínima de 10 mg% de acetona y
por eso, para calcular la concentración en orina diluida, se debe multiplicar por 10 el
número de veces que se ha diluido ésta.

Este método con sus dos variantes es posible aplicarlo al suero sanguíneo, para
investigar acetona y tener una cifra aproximada en su cuantía.

Uso de tira reactiva. Sumergir la tira en el frasco conteniendo la orina. Esperar 20

segundos, leer en escala colorimétrico, estimando la concentración como negativo 5,
15, 50, 150 mg/dl.
 INVESTIGACIÓN DE ACIDO ACETOACETICO

- Armar dos sistemas que contengan orina normal y patológica.

Prueba de Cloruro Férrico o de Gerhart. Se basa en que en presencia de cloruro

férrico, el ácido acetoacético rinde una coloración rojo burdeos.

Procedimiento (Se utiliza orina filtrada):

CONCLUSIONES:

 En la orina de personas normales no es posible encontrar cuerpos

cetónicos.
 En la orina patológica fue posible identificar los cuerpos cetónicos.
 La prueba de legal es cualitativa, ya que sólo nos permite conocer la
existencia o no de cuerpos cetónicos.
 La prueba de rothera es semicuantitativa, porque podemos conocer
aproximadamente la cantidad de cuerpos cetónicos.

CUESTIONARIO

1. Hacer un esquema de la síntesis y degradación de los cuerpos cetónicos.

 Síntesis y degradación de cuerpos cetónicos.

2. Importancia energética de los cuerpos cetónicos

a. Suministrar energía al corazón y al cerebro en algunas ocasiones

excepcionales.
b. Que sirven como importantes combustibles metabólicos para muchos tejidos
periféricos. Por ejemplo, el cerebro normalmente utiliza glucosa como fuente de
 energía (los ácidos grasos no pueden atravesar la barrera sanguínea cerebral),
pero durante ayuno prolongado, los cuerpos cetónicos son la mayor fuente de
energía del cerebro. Los cuerpos cetónicos son los equivalentes hidrosolubles
de los ácidos grasos.

3. Causas del aumento de los cuerpos cetónicos

a. Descompensación diabética: con cifras elevadas de glucosa en sangre
b. Hipoglucemia
c. Ayuno prolongado

4. Métodos para la determinación de los cuerpos cetónicos.

Existen varios métodos para determinar la presencia de cuerpos cetónicos tanto en orina
como en suero, dentro de los principales tenemos:

- Prueba de Legal, Se utiliza el nitroprusiato de sodioel cual diluido en presencia de

cuerpos cetónicos, especialmente de acetona, rinde un color azul violeta.
- Uso de tira reactiva. Para ello se sumerge la tira en el frasco conteniendo la orina.
Esperar 20 segundos, se lee en escala colorimétrico, estimando la concentración
como negativo 5, 15, 50, 150 mg/dl.
- Prueba de Rothera: Se usa Utilizar nitroprusiato en polvo, este alcanza una
máxima dilución de la orina cuando aparece color azul violeta, luego se multiplicar
por el denominador de la dilución alcanzada por 10 y de esta manera se tendrá la
cantidad aproximada de acetona en mg por 100ml. Esto es debido a que el
nitroprusiato de sodio en polvo da reacción positiva solo cuando en la orina sin
diluir alcanza la concentración mínima de 10 mg% de acetona y por eso, para
calcular la concentración en orina diluida, se debe multiplicar por 10 el número de
veces que se ha diluido ésta.
- Prueba de Cloruro Férrico o de Gerhart. Se basa en que en presencia de cloruro
férrico, el ácido acetoacético rinde una coloración rojo burdeos
.
5. Importancia de la cuantificación de cuerpos cetónicos.

La concentración normal de cuerpos cetónicos normal en orina es de 125 mg/

24 horas, y en sangre hasta 1mg/dl. La importancia de su cuantificación está
relacionado con algunos procesos fisiológico y otros patológico en los cuales los niveles
normales de concentración están aumentados asi tenemos cuando aumentan en sangre
(cetonemia) y en orina (cetonuria), estos niveles pueden estar aumentados en el ayuno
 prolongado, en la dieta pobre en carbohidratos. En condiciones patológicas como la
Diabetes mellitus, el hiperinsulinismo, en la enfermedad de Von Gierke y otras
glucogenosis, en los vómitos, en el síndrome de Fanconi, en toda hipercatabolia como
la fiebre, hipertiroidismo. En la Diabetes mellitus, el aumento de la lipólisis, de la beta
oxidación y de la cetogénesis, al superar la capacidad de oxidación de los tejidos
extrahepáticos lleva a niveles aumentados de cuerpos cetónicos.
El exceso de cuerpos cetónicos en sangre puede producir acidosis metabólica, la
denominada cetoacidosis diabética. El diagnóstico y monitoreo de su tratamiento se
hace con su determinación en sangre u orina.

BIBLIOGRAFÍA

Murray R, Bender D, Botham K, Kennelly P, Rodwell V, Weil P. Harper, Bioquímica ilustrada.

28º edición. McGraw-Hill, Lange, México D.F. 2012
 DETERMINACION DE PERFIL LIPIDICO

I. REACTIVOS A UTILIZAR:

- Reactivo para determinación de colesterol.

- Reactivo precipitante de HDL.

- Reactivo enzimático para determinación de triglicéridos.

II. PROCEDIMIENTO

DETERMINACIÓN DE COLESTEROL SANGUÍNEO

Armar el siguiente sistema:

COMPONENTE BLANC PROBLE ESTÁNDAR

O MA
Suero ----- 10 ul -----
Estándar 200 mg/dl ----- ----- 10 ul
Reactivo enzimático 1 mL 1 mL 1 mL
Mezclar, incubar 10 minutos de 20…25 ºC ó por 5 minutos a 37 ºC.
Medir la absorbancia del Starndard y de la muestra frente al blanco
de reactivo antes de 60 minutos (ΔA)

CALCULOS

ΔAmuestra
C =200× [ mg/dl ] óC=5 . 17 × ΔAmuestra [ mmol/l ]
ΔAstandard ΔAstandard

DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS

Armar el siguiente sistema:

COMPONENTE BLANC PROBLE ESTÁNDAR

O MA
 Suero ----- 10 ul -----
Estándar 200 mg/dl ----- ----- 10 ul
Reactivo enzimático 1 mL 1 mL 1 mL
Mezclar, incubar 10 minutos de 20…25 ºC ó por 5 minutos a 37 ºC.
Medir la absorbancia del Starndard y de la muestra frente al blanco
de reactivo antes de 60 minutos (ΔA)

III. RESULTADOS

COLESTEROL SANGUÍNEO

 Factor= 855
 Blanco=0.13
 Suero Preprandial= 0.6  401.85 mg/dL
 Suero Postprandial=0.61  410.4 mg/dL

TRIGLICÉRIDOS

 Factor 850
 Blanco 0.25
 Suero Preprandial =0.59  289
 Suero Postprandial =0.68  365.5

IV. CUESTIONARIO:

1. SEÑALE LA IMPORTANCIA DEL COLESTEROL

El colesterol es un lípido (grasa). Se forma en el hígado a partir de alimentos

grasos y es necesario para el funcionamiento normal del organismo. El colesterol está
presente en la membrana plasmática (capa exterior) de todas las células del organismo.
El colesterol se desplaza por la sangre mediante unas moléculas denominadas
Lipoproteínas. Es un compuesto versátil que es vital para la función del cuerpo humano.
También juega un papel importante en la formación de hormonas como el estrógeno y
la testosterona.
 El colesterol es muy importante( en valores normales) porque cumple diferentes
funciones en el organismo como:
 Forma parte de la membrana de cada una de las células del organismo
permitiendo o no el paso de sustancias y participando en procesos fisiológicos
relacionados con ella.
 Es el componente básico de las sales biliares que tienen como función
principal ayudar a la digestión de las grasas, sin ellas se produce un síndrome
de malabsorción.
 Es precursor de hormonas importantes como las corticosteroideas: cortisol y
aldosterona que entre otras cosas regulan el contenido de agua y de sales en el
organismo.
 Es precursor de hormonas sexuales como progesterona, testosterona y
estrógenos que permiten el desarrollo de los caracteres sexuales y la fertilidad.
 Es parte de la vitamina D que deriva del colesterol y participa
fundamentalmente en el metabolismo del calcio.

2. SEÑALE LOS VALORES DE REFERENCIA DEL COLESTEROL, HDL-

COLESTEROL Y LDL-COLESTEROL.

VALORES REFERENCIA DEL COLESTEROL TOTAL:

Valor Estado
Colesterol Total < 200 mg/dl Deseable
200-239 mg/dl Alto limítrofe
>=240 mg/dl Alto

VALORES REFERENCIA DE LDL-COLESTEROL:

Valor Estado
Colesterol LDL <100 mg/dl Óptimo
100-129 mg/dl Cercano al óptimo
130-159 mg/dl Alto limítrofe
160-189 mg/dl Alto
>=190 mg/dl Muy alto

VALORES REFERENCIA DE LDL-COLESTEROL:

Valor Estado
Colesterol HDL <40 mg/dl Bajo,
40-59 mg/dl Normal deseable
 >=60 mg/dl Alto = Protector

3. CAUSAS DE HIPERCOLESTEROLEMIA:

Las causas de la hipercolesterolemia pueden ser múltiples es por ello que para una
mejor comprensión se lo dividirá en causas modificables y no modificables.

Causas No Modificables

Predisposición genética: Generalmente se debe a una elevación de colesterol

por defecto en los receptores del colesterol LDL. Esta predisposición puede ser
transmitida por uno o de ambos padres, aunque debe aclararse que es más común la
transmisión genética de sólo uno de ellos. Esta situación afecta a hombres y mujeres
por igual. Los hombres pueden desarrollar enfermedad coronaria entre los 30 y 50 años,
en cambio las mujeres entre los 50 y 60 años.

Causas Modificables:
 Alimentación: El aumento de consumo de grasas saturadas y trans en
detrimento del consumo de ácidos grasos insaturados. El aumento de colesterol
sanguíneo se debe en su gran medida al aumento del consumo de grasas
saturadas, un consumo diario mayor a 400 mg de colesterol produce un
incremento en la concentración de colesterol en sangre. Es importante saber que
una reducción de 100 mg de colesterol por cada 1000 calorías modifica
alrededor de 12 mg/dl. la concentración de colesterol en sangre.
 Vida sedentaria: La falta de ejercicio físico puede generar un metabolismo
graso más lento, ayudando no sólo al aumento de colesterol en sangre, sino
también al depósito del mismo en las paredes arteriales.
 Estrés: Situaciones estresantes o angustiantes, pueden llevar a consumir más
alimentos ricos en grasas y pueden desencadenar una serie de mecanismos en
el organismo, por los cuales se comience a depositar el colesterol en las paredes
de las arterias, reduciendo el calibre de las mismas.
  Cigarrillo: El monóxido de carbono proveniente del cigarrillo aumenta el
colesterol LDL y reduce el colesterol HDL, de esta forma el cigarro agrava aún
más la situación si ya existe una hipercolesterolemia previa.
 Obesidad: La excesiva cantidad de kilos, sobre el peso ideal o habitual,
produce un exceso de tejido graso, lo que aumenta las posibilidades de una alta
concentración de colesterol sanguíneo.
 Enfermedades: Hipotiroidismo, enfermedades renales, enfermedades
obstructivas, hipertensión arterial, enfermedades hepaticas, etc.

4. IMPORTANCIA DEL HDL- COMO ANTIATEROGÉNICO

Varias propiedades de las HDL tienen el potencial de proteger contra el desarrollo

de aterosclerosis:
a) La propiedad mejor documentada es su habilidad de promover el eflujo de
colesterol desde macrófagos en la pared arterial
b) Uno de los mecanismos por medio del cual las HDL evitan la formación del
ateroma, es el transporte inverso del colesterol desde células extrahepáticas hacia el
hígado: La disminución de las HDL afecta el transporte reverso de colesterol, que
es la vía metabólica responsable de la remoción del colesterol excedente de las
células periféricas y su transporte hacia el hígado para reciclarlo o eliminarlo.
En efecto, los niveles bajos de C-HDL suelen correlacionar con hipertrigliceridemia
y se asocian comúnmente con la presencia de partículas LDL pequeñas y densas
que son altamente aterogénicas.
c) Protección a las LDL contra la oxidación
d) Preservación de la función del endotelio vascular
e) Regulación de la expresión de moléculas de adhesión y de los procesos de
coagulación y fibrinolíticos que participan en el proceso ateroscleroso.

5. IMPORTANCIA DE LA LDL COMO ATEROGÉNICO.

El evento desencadenante del proceso aterogénico es la oxidación de las LDL

en el ambiente subendotelial. Estas LDL oxidadas activan al endotelio vascular
originando la expresión de moléculas de adhesión, citoquinas y factores de crecimiento
que inician el reclutamiento de células proinflamatorias e interrelacionan los distintos
tipos celulares que intervienen en la formación de la placa ; seguidamente se produce
una acumulación lipídica en los macrófagos dando lugar a la formación de células
espumosas; y finalmente ocurre la proliferación y migración de las células musculares
lisas hacia la íntima arterial.

La aterosclerosis se considera como una enfermedad inflamatoria crónica a nivel

de la pared vascular, caracterizada por el depósito lipídico, que comienza con la
activación endotelial causada por las LDL oxidadas o por un proceso inflamatorio
crónico.

6. HAGA UN ESQUEMA DE LA ESTRUCTURA DE LOS TRIGLICÉRIDOS

7. CAUSAS DE HIPERTRIGLICERIDEMIA.

La hipertrigliceridemia familiar es causada por un defecto genético que se transmite

de manera autosómica dominante.

En general, corresponden a defectos leves a moderados del metabolismo de

VLDL, ya que los defectos severos se expresan como hiperlipidemia mixta, debido al
contenido significativo del colesterol de las VLDL.
a) Como causas genéticas, se reconoce a las Dislipidemias Familiares
Combinadas, los déficit leve de Apo C2 y lipasa liproteica periférica y la sobre-
expresión de Apo C3.
b) Como causas patológicas secundarias, a la obesidad, Diabetes y a la insuficiencia
renal y al síndrome nefrósico en etapas tempranas.
c) Como causas ambientales, al consumo excesivo de hidratos de carbono
especialmente refinados y de alcohol, al uso de betabloqueadores, estrógenos y
diuréticos tiazidicos.
 d) En el Sindrome de Resistencia a la Insulinia e hiperinsulinemia hay
incremento de la síntesis de VLDL y se acelera el catabolismo de las HDL. Este se
encuentra asociado a la obesidad de predominio abdominal y a la diabetes tipo
2 y entre sus componentes existe la dislipidemia que característicamente se
expresa como una hipertrigliceridemia con nivel de Col-HDL bajo. Los
betabloqueadores y diuréticos tiazidicos, acentúan la resistencia insulínica. En la
diabetes tipo 1 y en la insuficiencia renal pueden encontrarse estas dislipidemias a
causa de una inhibición del sistema lipasa lipoproteico periférico.
e) Los estrógenos administrados por vía oral y el alcohol inducen un incremento de
la síntesis y secreción de VLDL. Su efecto es dosis dependiente y magnificado en
la presencia de otras condiciones que alteren el metabolismo de las VLDL.
f) Una dieta rica en fructosa, glucosa , sacarosa o con una alta proporción de
caloría glucídicas puede inducir hipertrigliceridemia aislada

8. EXPLIQUE POR QUÉ LA HIPERTRIGLICERIDEMIA ES UN FACTOR DE

RIESGO CORONARIO

La prevalencia de síndrome coronario agudo se incrementa después de la

aparición de alteraciones en el endotelio y se acentúa de forma paralela al incremento de
los triglicéridos, colesterol y lipoproteínas de baja densidad.

El alto riesgo de síndrome coronario agudo que se observa en los pacientes

después de la elevación de los lípidos ha evidenciado que el aumento de los triglicéridos
juega un papel importante en la aterogénesis.

BIBLIOGRAFÍA

- Murray R, Bender D, Botham K, Kennelly P, Rodwell V, Weil P. Harper,

Bioquímica ilustrada. 28º edición. McGraw-Hill, Lange, México D.F. 2012.