Fecha

Registro de Laboratorio

Tipo de muestra
Identificación de la Muestra

Hora de Inicio de Análisis

Equipo de bioseguridad
(Guantes,Cubrebocas,Cubrebotas , Lentes de Seguridad y
Cofia)

Sanitización de Campana

No. Id De Balanza

Al preparar la suspensión inicial, tomar

diferentes porciones del alimento. Transferirlo al
Caldo Fraser medio, a fin de obtener una
relación 1:10. Pesar 25g o mL a frascos de
dilución con 225mL del Caldo Fraser medio, para
obtener una dilución 1:10 (masa-volumen o

Homogeneizar por 1 min o 2 min en licuadora o

homogeneizador peristáltico dependiendo del
tipo de alimento.

Enriquecimiento Primario:
Incubar la suspensión inicial (C.6.2) a 30°C ± 1ºC
por 24h ± 2h.
Nota: una coloración obscura puede aparecer,
durante la incubación.

Lote de Caldo Fraser

Fecha y Hora de inicio de Incubación a 30°C ±

1ºC por 24h ± 2h. Incubadora No. Id. 619

Fecha y Hora en que finaliza la incubación a 30°C

± 1ºC por 24h ± 2h. Incubadora No. Id. 619
Preenriquecimiento

Enriquecimiento Secundario:
Transferir 0.1mL del enriquecimiento primario,
después de la incubación inicial por 24h ± 2h, a un
tubo conteniendo 10mL del Caldo Fraser.

No. De Id de la Pipeta utilizada

Cantidad de inoculo empleada para la técnica

(µl)

No. de Certificado: VOL 0894/17

(unidades en µl)

Cantidad de inoculo empleada para la técnica

(Lectura corregida)

Lote de Caldo Fraser

Fecha y Hora de inicio de Incubación a 48h ± 2h

a 36°C ± 1°C. Incubadora No. Id. 443

Fecha y Hora en que finaliza la Incubación a 48h

± 2h a 36°C ± 1°C.. Incubadora No. Id. 443

Sanitización y Uso de Campana

Del enriquecimiento primario, después de las 24h

± 2h de incubación, inocular 2 placas de agar
Oxford y 2 placas de PALCAM por estría cruzada.

Lote Agar Oxford

Lote Agar PALCAM

Del enriquecimiento secundario incubado a 36°C ±

1°C por 48h ± 2h, inocular 2 placas con agar
Oxford y 2 placas con PALCAM por estría cruzada.

Lote Agar Oxford

Lote Agar PALCAM

NOTA: Las placas con agar PALCAM se pueden

incubar en condiciones de microaerofilia (CO2 5% -
12% O2 5%-15%). Despues de la incubacion por
24h, si se observa un crecimiento pobre o si no se
Siembra en medios Selectivos e identificacion

Fecha y Hora de inicio de Incubación de 24hrs de

placas estriadas del enriquecimiento primario /a
30°C ± 1°C°C Incubadora No. Id. 619; a 36°C ±
1°C°C Incubadora No. Id. 443
Fecha y Hora en que finaliza la incubación de
24hrs de placas estriadas del enriquecimiento
primario /a 30°C ± 1°C°C Incubadora No. Id. 619; a
36°C ± 1°C°C Incubadora No. Id. 443
Fecha y Hora de inicio de Incubación de 24hrs de
placas estriadas del enriquecimiento secundario
/a 30°C ± 1°C°C Incubadora No. Id. 619; a 36°C ±
1°C°C Incubadora No. Id. 443
Fecha y Hora en que finaliza de Incubación de
24hrs de placas estriadas del enriquecimiento
secundario /a 30°C ± 1°C°C Incubadora No. Id. 619;
a 36°C ± 1°C°C Incubadora No. Id. 443

Sanitización y Uso de Campana

Selección de Colonias para su confirmación:

Tomar de cada placa de agares selectivos, 5
colonias sospechosas de Listeria spp. Si alguna de
las placas tiene menos de 5 colonias presuntivas,
tomar para su confirmación todas las colonias que

Aislamiento: Sembrar por estría cruzada, para

obtener colonias aisladas en cajas con ASTEL

Lote de Agar ASTEL

Fecha y Hora de inicio de Incubación 36±1°C / por

18h a 24h o hasta que el crecimiento sea
satisfactorio (no más de 72h). Incubadora No. Id.
Fecha y Hora en que finaliza la Incubación 36±1°C
/ por 18h a 24h o hasta que el crecimiento sea
satisfactorio (no más de 72h). Incubadora No. Id.
443
Luz de Henry:
Esta prueba tiene carácter informativo. Examinar
las placas de ASTEL con colonias típicas, con el
sistema óptico de Henry

Reacción de Catalasa

Lote de Solucion de peroxido de Hidrogeno

HOJA DE TRABAJO PARA EL AISLAMIENTO DE Listeria monocytogenes en productos de consumo Apendice C Normativo NOM-210-SSA1-2014.

Tinción de Gram
Realizar la tinción de Gram a 1 colonia aislada
obtenida en ASTEL
(Bacilo corto gram Positivo)
Prueba de Movilidad
Tomar 1 colonia aislada de ASTEL, y suspenderla
Pruebas Auxiliares Confirmatorias de Listeria spp.

en un tubo conteniendo CST con extracto de

levadura.

Fecha y Hora de inicio de Incubación a 25°C ± 1ºC

por 8h a 24h o hasta que se observe el medio
turbioNo. Id. 442

Fecha y Hora en que finaliza la incubación a 25°C ±

1ºC por 8h a 24h o hasta que se observe el medio
turbioNo. Id. 442

Prueba alternativa de movilidad:

Utilizando un asa recta, inocular agar de movilidad
picando 1 colonia obtenida en ASTEL
Fecha y Hora de inicio de Incubación a 25°C ± 1ºC
por 48 horas No. Id. 442/ Si el crecimiento no es
suficiente, incubar por 5 dias adicionales y
observar la picadura al termino de este tiempo.
Fecha y Hora en que finaliza la incubación a 25°C ±
1ºC por 48 horas No. Id. 442/ Si el crecimiento no
es suficiente, incubar por 5 dias adicionales y
observar la picadura al termino de este tiempo.

Sanitización de Campana

Prueba de hemólisis

Lote Agar Sangre de Cordero al 5%

Fecha y Hora de inicio de Incubación a 36±1°C /

24±2 hrs Incubadora No. Id. 443

Fecha y Hora en que finaliza la incubación a

36±1°C / 24±2 hrs Incubadora No. Id. 443

Utilización de Carbohidratos (ramnosa y xilosa)

(alternativamente pueden utilizarse sistemas de
bioquímicas miniaturizadas o métodos de biología
molecular).

Fecha y Hora de inicio de Incubación a 36±1°C por

5 diaS Incubadora No. Id. 443
Confirmacion de Listeria monocytogenes

Fecha y Hora en que finaliza la incubación a

36±1°C por 5 dias Incubadora No. Id. 443

Prueba de CAMP

Fecha y Hora de inicio de Incubación a 36±1°C por

12h a 18h Incubadora No. Id. 443

Fecha y Hora en que finaliza la incubación a

36±1°C por 12h a 18 h Incubadora No. Id. 443

Prueba de oxidasa
(Lote de reactivo)

Fecha y hora de Analisis

Sanitización y Uso de Campana

Microorganismo Identificado
Confirmacion por Identificación

Nivel de confianza

Fecha y hora de Análisis

Sanitización y Uso de Campana

Confirmacion por

Presencia /Ausencia de Listeria monocytogenes

Tecnicas Moleculares

Analista

Supervisión cruzada de Analista

Supervisión Director Técnico/Jefe de Laboratorio

Formato
AR1-L210-1

Supervisión de Calidad
Aprobó
Director General
No.

701

Observaciones