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En la primera parte de la practica se hizo una mezcla homogénea del agar, esta es una sustancia
nutritiva que ayuda al crecimiento de los microorganismos a estudiar, en este caso fue para
hongos.

1. En primera instancia se pesaron 5.2 gramos del polvo del agar.

2. Después se midió el agua con ayuda de una bureta, en total fueron 80 ml.
3. Se coloco el polvo del agar en un Matraz Erlenmeyer, y se vertieron los 80 ml por las
paredes de este.
4. Se coloca un tapón hecho con gasas y cinta para que así conserve el calor.
5. Posterior lo homogenizamos para poder colocarlo en calor, para que este llegue a su
punto de ebullición.
6. Se retira del calor y se comienza a batir lentamente para garantizar que no existan
grumos.
7. Luego lo colocamos dentro de la autoclave y esperamos unos minutos hasta que llegue a
la presión deseada (121).
8. Después que llega a lo deseado se apaga y se espera para poder sacar los matraces.
9. Al sacarlo se espera a que se enfrié un poco y lo pasaremos a las cajas de Petri ya
rotuladas.
10. Encenderemos los mecheros para el halo de inhibición y pasaremos la tapa por el fuego.
11. Colocamos el líquido en la caja de Petri y la cerramos con su tapa.
12. Esperamos a que solidifique para poder comenzar a sembrar.
13. Ya solidificado, con un asa de cromo previamente esterilizada con calor, tomamos muestra
de nuestro hongo y comenzamos con el estriado.
14. Ya puesta la muestra, sellamos la caja Petri con papel Parafilm y lo metemos a la
incubadora por 48 hrs.
15. Para después poder observarlo al microscopio.
 En esta práctica realizamos 2 técnicas, la Tinción de Gram y Azul Lactofenol, cultivamos hongos en
un agar nutritivo.

Pasos para la tinción de Gram:

1. Toma de muestra con el asa de cromo; dentro del halo de inhibición, cuidando que no se
rompa el agar.
2. Fijar la muestra con calor
3. Aplicar sobre la muestra gotas suficientes (para cubrir la muestra) de Cristal Violeta, dejar
actuar 1 min.
4. Aplicar sobre la muestra gotas de yodo, dejar actuar 1 min y posteriormente escurrirlo.
5. Dejar la laminilla inclinada y aplicar a la muestra de 5-7 gotas de alcohol y dejar escurrir 30
segundos.
6. Colocar en horizontal el portaobjetos y agregar gotas de Safranina, dejar reposar 1 min.
7. Posteriormente escurrir y lavar con agua destilada.
8. Dejar secar en vertical.

Esta técnica ayuda con la identificación de bacterias tanto gramnegativas como grampositivas; ya que las
bacterias dependiendo de que sean será como se tiñan, por decir las bacterias grampositivas se tiñen de
azul-violeta mientras que las gramnegativas se tiñen de rosado-rojizo.

POSITIVAS NEGATIVAS
En nuestra muestra pudimos observar tanto bacterias gramnegativas como grampositivas.
En la tinción con Azul Lactofenol, seguimos los siguientes pasos:

1. De la misma manera colocamos una muestra de nuestro hongo en el portaobjetos.

2. Colocamos unas gotas de azul Lactofenol.
3. Con el asa de cromo previamente esterilizada mezclamos nuestra mezcla con el
Lactofenol.
4. Colocamos el cubreobjetos y observamos al microscopio o en su defecto…
5. Rápidamente lo fijamos con calor con ayuda del mechero

En el microscopio se pudo observar una levadura y algunas bacterias.