Tinción de Gram

1.- ¿Cuál es la utilidad de la tinción de Gram?

Una tinción de Gram es un examen utilizado para identificar bacterias. Es una
de las formas más comunes de diagnosticar rápidamente una infección
bacteriana en el cuerpo.

2.- ¿Menciona los colorantes que se utilizan para esta Tinción?

 Tinción de Feulgen
 Naranja de acridina
 DAPI
 Bromuro de etidio
3.- ¿Cuáles son las diferencias de la pared células de las bacterias Gram + y
Gram –?
Las bacterias Gram positivas tienen una capa gruesa de peptidoglicano y no
tienen una membrana lipídica externa, mientras que las bacterias Gram
negativas tienen una capa delgada de peptidoglicano y tienen una membrana
lipídica externa.

4.- ¿Cómo se realiza la extensión en el portaobjeto?

Para llevar a cabo las extensiones en portaobjeto se coloca una gota de
sangre de 3 a 4 mm de diámetro, a unos 2 o 3 cm de uno de los extremos del
portaobjetos, este se coloca en una superficie plana y lisa.

5.- ¿Explica paso a paso el procedimiento de la tinción?

En primer lugar, para realizar una tinción, lo que tenemos que tener son
microorganismos sembrados. Dichos microorganismos los hemos el día
anterior mediante la técnica de siembra de estría múltiple, los hemos dejado
incubar durante 24 horas a 37ºC en la incubadora para así obtener las
colonias de los diferentes microorganismos. En este caso son
microorganismos de la orofaringe. Siempre que “destapemos” una placa con
colonias, deberá hacerse en condiciones de esterilidad. Para conseguir estas
condiciones podemos utilizar un mechero Bunsen o un mechero de alcohol.
Con el mechero, conseguiremos que se forme un ambiente de esterilidad
alrededor de la llama, por lo tanto, si trabajamos cerca del mechero,
tendremos un ambiente estéril. A la hora de comenzar con la tinción, lo
primero que hay que realizar es un frotis del microorganismo, para ello hay
que añadir una gota pequeña de agua destilada (cuanto mayor sea la gota,
tardará más tiempo en secarse). Debemos coger la muestra con el asa
bacteriológica previamente esterilizada. Para ello encendemos el mechero de
alcohol y ponemos el asa en posición vertical encima del mechero hasta que
el hilo del extremo del asa se quede totalmente incandescente. Después
debemos esperar a que se enfríe porque si tocamos con el hilo incandescente
las colonias podemos matar al microorganismo. Abrimos la placa con las
bacterias y con el asa tocamos en el agar para comprobar que éste está frío.
A continuación, cogemos unas colonias de las bacterias y las extendemos
sobre la gota de agua destilada. Una vez extendido, volvemos a esterilizar el
asa, ya que todo material debe ser esterilizado antes de volver a ser
guardado. A continuación, lo que tenemos que hacer es fijar la muestra, la
cual se puede fijar con metanol o se puede fijar con calor. En este caso
utilizaremos la fijación por calor. Tenemos que hacer movimientos circulares
o en zig zag por encima de la llama del mechero, levantando constantemente
la muestra para que no se nos queme el tiempo suficiente para que la
muestra quede totalmente seca y por lo tanto fijada. Una vez fijada la
muestra apagamos el mechero por seguridad. Ahora, vamos a teñir nuestra
siembra de microorganismos en el portaobjeto con diferentes tipos de
tinciones para poder visualizar cada microorganismo (bacteria) al
microscopio. Las tinciones se realizan en un cristalizador, también utilizamos
varillas de tinciones y el porta con la muestra. Vamos a utilizar diferentes
reactivos para la tinción. En primer lugar el cristal violeta, en segundo lugar el
lugol, usaremos también alcohol de 96º (el decolorante puede estar formado
por una mezcla de alcohol, alcohol-acetona y por diferentes mezclas), y por
último la safranina.
6.- ¿Cuál es la función del lugol en la tinción de Gram?
Funge el papel de mordiente e impedirá la salida de cristal violeta mediante
la formación de un complejo cristal violeta-yodo que satura los espacios del
péptidoglicano presente en la pared bacteriana.
7.- ¿Cuál es la función del alcohol de 96 grados en la extensión?

8.- ¿Cuál es la función de la Safranina?

La colorante safranina O es comúnmente utilizado para teñir tejidos
biológicos, y sirve como herramienta en la detección de estructuras en
células eucariontes y pro- cariontes.
9.- ¿Dibuja los bacilos Gram+?

10.- ¿Dibuja los bacilos Gram -?