TINCIÓN TRICÓMICO

La técnica Tricrómica de Wheatley es una modificación de la técnica original de Gomori

para tejidos. Es un procedimiento rápido y simple para la detección de protozoarios, células
humanas (macrófagos, glóbulos rojos, polimorfonucleares) y levaduras. Estas coloraciones
no son recomendadas para huevos o larvas de helmintos debido a que se observan oscuros
por la retención de exceso de colorante. Los ooquistes de Isospora belli se observan mejor
en preparaciones húmedas y los ooquistes de Cryptosporidium parvum y Cyclospora
generalmente no son reconocidas por la coloración Tricrómica. Las muestras pueden ser
materias fecales fresca fijadas inmediatamente en fijador de Schaudinn o materia fecal
conservada en PVA, SAF o MIF. Con una fijación adecuada, el material de base
generalmente toma un color verde ya que los protozoarios tienen un citoplasma que va del
verde azulado al púrpura y la cromatina nuclear y cuerpos de inclusión se tiñen de color
rojo a rojo púrpura.

METODO DE REALIZACION

Reactivos

 Cromótropo 2R 0,6 g
 Verde brillante SF 0,3 g
 Ácido fosfotúngstlco 0,7 g
 Ácido acético (glacial) 1,0 mL
 Agua destilada 100 mL

Agregar 1,0 mL de ácido acético glacial a los componentes secos. Dejar reposar la mezcla
durante 15 a 30 minutos a temperatura ambiente y luego agregar 100 mL de agua destilada.
El colorante debe tener color púrpura. Si se almacena adecuadamente en frascos de vidrio o
de plástico a temperatura ambiente, el vencimiento es a los 2 años.

Procedimiento

1. Usar guantes cuando se manipulan muestras de heces.

 2. Preparar dos frotis sobre portaobjetos de una pequeña porción de la muestra fresca
de heces, usando palillos o un pincel.
3. Sumergir de inmediato los frotis en la solución fijadora de Schaudinn y dejar fijar
durante por lo menos 30 minutos. Es preferible la fijación hasta el día siguiente.
4. Si la muestra es líquida, mezclar varias gotas de heces con tres o cuatro gotas de
PVA sobre un portaobjetos y dejar secar varias horas en estufa de incubación a 37
°C.
5. Si la muestra se encuentra en PVA, colocar una porción de la mezcla sobre un trozo
de papel absorbente para eliminar el PVA. Preparar frotis del material que queda en
el papel como se describió antes.

Procedimiento de tinción

1. Después de fijar y secar adecuadamente los frotis, colocar los portaobjetos en

alcohol etílico al 70% durante 3 minutos.
2. Colocar en solución de alcohol yodado de trabajo durante 2 a 5 minutos.
3. Lavar con dos cambios de alcohol etílico al 70%. uno de 5 minutos y el otro de 2 a 5
minutos.
4. Colocar en la solución colorante tricrómica durante 10 minutos.
5. Colocar en alcohol etílico al 90% acidificado durante 5 segundos.
6. Sumergir y sacar los portaobjetos varias veces en alcohol etílico al 100%.
7. Hacer dos cambios de alcohol etílico al 100%.
8. Eliminar el alcohol con dos cambios de xileno o tolueno, de 2 a 5 minutos cada uno.
9. Colocar medio de montaje y cubrir con un cubreobjetos número 1. Dejar secar toda
la noche.
10. Examinar con objetivo de inmersión en aceite en busca de formas parasitarias.