Acuabio 1 estimula el metabolismo anaerobio y el sistema

INVESTIGACIÓN
inmune innato de las larvas de goldfish y tilapia
Rebeca Martínez1, Yamila Carpio 1, Yoelys Gómez1, Manuel Raíces 2, Antonio Morales 1,
Fidel Herrera1, Osmany González1, Reynold Morales 1,@ Mario P Estrada1
1
Departamento de Biotecnología Acuática, División de Biotecnología Animal
Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología, Apartado Postal Box 6 162,
Ciudad de La Habana, Código Postal 10 600, Cuba
E-mail: mpablo@cigb.edu.cu
2
Grupo de Negociación y Desarrollo de Proyectos
RESUMEN
Acuabio 1 es una mezcla de proteínas y aminoácidos esenciales que ejercen un efecto nutricional importante en las
etapas iniciales del desarrollo de los organismos acuáticos. Su efecto sincroniza y estimula el crecimiento de las
larvas. Con su empleo se activa y acelera el mecanismo de crecimiento desde edades muy tempranas, así como el
desarrollo y la talla de los animales, lo cual provoca, como efecto secundario, una mayor resistencia ante organismos
parásitos. Estas propiedades del Acuabio 1 lo hacen muy atractivo para su utilización en el mejoramiento de la
producción, sobrevida y calidad de las larvas de los organismos acuáticos, etapa crucial en el cultivo de esos
animales. En esta investigación se evidenció la acción estimuladora de Acuabio 1. Se obtuvieron larvas de goldfish
con un peso 3.5 veces mayor, y larvas de tilapia con un peso 1.6 veces mayor, comparando ambos resultados con
el control negativo. A su vez, hubo un estímulo del metabolismo anaerobio y de los factores que median la
respuesta inmune innata. A partir de este estudio, se comprendieron mejor los mecanismos moleculares que activa
este suplemento nutricional.
Palabras clave: peces, crecimiento, sistema inmune innato
Biotecnología Aplicada 2006;23:287-293

ABSTRACT
Acuabio 1 is able to stimulate the anaerobic metabolism and immune system in goldfish and tilapia
larvae. Acuabio 1 is an mixture of essential protein and amino acids able to generate an important effect at
preliminary developmental states of aquatic organisms. When Acuabio 1 is used, it is able to synchronize and
stimulate the offspring growth since early states speeding animal development and growth generating in parallel
a higher resistance to parasites. These qualities made the product very attractive for being used in improving the
survival rate, quality and quantities of aquatic organisms at larvae stage, a moment that is crucial when cultivating
such animals. In this work it is shown the stimulating effect in goldfish, heavier larvae 3.5 times and in the case of
tilapia 1.6 times more than the negative control larvae, also it was detected an increase in the anaerobic metabolism
and in other factors responsible in mediate the innate immunological response in treated larva, helping to understand
the molecular mechanisms released by this food supplement.
Key words: fish, growth, innate immune system

Introducción
La acuicultura constituye una vía alternativa para la
protección de los ecosistemas marinos y de agua dulce.
Sin embargo, las altas densidades de peces que se
alcanzan mediante las tecnologías aplicadas a la
acuicultura, aumentan el estrés en los peces, lo cual
provoca la aparición de enfermedades ocasionales por
agentes patógenos oportunistas restringiendo la
productividad acuícola, requiriendo especial atención
por parte de los investigadores [1]. Uno de los retos de
la acuicultura consiste en aumentar los índices de
producción en el estadio larval. En este período de la
vida de los peces ocurre la mayor pérdida de ejemplares.
Por ello, cualquier intento para mejorar la sobrevivencia
y la calidad de vida de las larvas, ayudará a que un
mayor número de peces alcance el estado adulto, lo que
resultará en un aumento de la producción acuícola.
La biotecnología acuática ha desarrollado múltiples
estrategias experimentales, encaminadas a modificar el
crecimiento en los peces a partir de la administración de
varias hormonas como la prolactina, la insulina, la
hormona de crecimiento (HC) y las hormonas
esteroideas [2], así como la aplicación de dietas ricas en
nutrientes proteicos específicos. Se le ha conferido
particular importancia al mejoramiento genético,
mediante la transferencia de genes y las manipulaciones
cromosómicas. Con el empleo de estas tecnologías se
han obtenido variedades de salmón, trucha, tilapia y de
otras especies comerciales, con mayor tasa de
crecimiento, menor susceptibilidad a las condiciones
ambientales adversas, con necesidades nutricionales
significativamente inferiores y mayor resistencia ante 1. Dautrempuits C, Betoulle S, Vernet G.
las enfermedades [3]. Stimulation of antioxidant enzymes levels
in carp (Cyprinus carpio l.) infected by
Con este propósito, el Departamento de Biotecnología Ptychobothrium sp. (Cestoda). Fish and
Shellfish Immunol 2003;(15):467-71.
Acuática del Centro de Ingeniería Genética y
Biotecnología (CIGB, Ciudad de La Habana, Cuba) ha 2. Pullin RS, McConell RH. The biology and
culture of tilapias. Conference Proceeding
desarrollado el suplemento nutricional Acuabio 1, 7, 432 p. International Center for living
comercializado por la firma Heber Biotec. Este Aquatic Resources Monagement. Manila,
producto es una mezcla de proteínas y aminoácidos Philippines, pages ISSN 0115-4389;
1982.
esenciales, que ejercen un efecto nutricional importante
en las etapas iniciales de desarrollo de los organismos 3. Devlin HR, Sundstrom LF, Muir WM. Inter-
face of biotechnology and ecology for
acuáticos. Su efecto estimula y acelera el crecimiento environmental risk assessments of transgenic
de las larvas de peces, así como el posterior crecimiento fish. TIB 2006;(24):89-97.

@ Autor de correspondencia
Rebeca Martínez y cols. Efectos de Acuabio 1 en larvas de peces

y desarrollo de los animales desde edades muy
tempranas, a la vez que provoca, como efecto
secundario, una mayor resistencia ante organismos
parásitos. Además, se ha comprobado que Acuabio 1
estimula la liberación de la hormona de crecimiento
(HC) endógena en sangre, así como la trascripción del
factor del crecimiento tipo insulina en el hígado.
Es conocido que la interacción entre el sistema inmune
y el endocrino, por la vía de las hormonas y las
citoquinas, es importante para ajustar los mecanismos
de defensa tanto en mamíferos como en peces [4]. El
sistema inmune actúa sobre los agentes infecciosos que
tienen contacto con el huésped, y es por ello que su
estudio es básico para el desarrollo de estrategias, con
el objetivo de mejorar el estado inmunológico de los
peces en cultivo.
Hasta el momento no se han realizado estudios
bioquímicos ni ensayos dirigidos a buscar evidencias
de la estimulación del sistema inmune en animales
tratados con Acuabio 1. Por todo ello, el objetivo de
esta investigación fue estudiar algunos parámetros
bioquímicos como las enzimas lactato deshidrogenasa
(LDH), la creatina quinasa (CK), la aspartato amino
transferasa (ASAT), los triacilglicéridos (TAG), así
como los niveles de lisozima, lectinas y la actividad
antiproteasa, indicadores del sistema inmune innato,
en las larvas de goldfish (Carasius auratus) y de
tilapia (Oreochromis sp.) tratadas con el suplemento
nutricional Acuabio1. La tilapia (Oreochromis sp.)
es una de las especies de mayor importancia en la
acuicultura, debido a que tiene elevado nivel proteico,
bajo costo de producción y solo necesita seis meses
para alcanzar el peso comercial de 250 gramos [5].
Por ello, constituye una especie de elección para los
estudios de crecimiento. En la actualidad, existe un
creciente interés mundial por los peces ornamentales
[6], así como por la estimulación del crecimiento de
estas especies. Estos estudios pueden ser modelo
para aplicaciones futuras en peces de interés
económico, lo cual constituye una alternativa
tentadora en la que se pudiera incursionar.
Materiales y métodos
Experimentos de crecimiento
Los experimentos de crecimiento se realizaron en el
Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología (CIGB),
Ciudad de La Habana, en condiciones estables de
temperatura (28 ºC) y con un fotoperíodo controlado
(14 horas de luz y 10 de oscuridad). Para ello se
emplearon larvas de goldfish (Carasius auratus) y de
tilapia (Oreochromis sp.), procedentes del Centro
Acuícola Mampostón (CPAM), del Ministerio de la
Industria Pesquera.
Se conformaron grupos experimentales de 150
larvas, que fueron alimentadas con pienso comercial
pulverizado, proveniente del Centro para la Producción
de Animales de Laboratorios (CENPALAB), suminis-
trado dos veces al día, una cantidad equivalente al
40% del peso corporal.
como controles negativos se les administró placebo a
igual concentración. Transcurrida una hora de
tratamiento, los estanques de goldfish se oxigenaron
mediante goteo y los de tilapias, mediante oxigenación
artificial.
Los animales se anestesiaron con 3-aminobenzoato
de etilo (sal metanosulfonato) (Sigma Chemical Co.),
se midieron, se pesaron y luego se congelaron a -70 ºC
para su posterior uso.
Para el estudio del efecto del suplemento nutricional
Acuabio 1 en las larvas de goldfish (Carasius auratus),
se realizó un experimento de crecimiento durante 19
días. Al inicio de este se pesó un grupo de 15 peces,
para obtener el promedio de la masa inicial (0.0012 g).
Al final del experimento (día 19), se midieron y pesaron
30 peces de cada grupo.
Con los datos de la talla (mm) y el peso (g) de los
peces se calculó el factor de condición (k), según
Rhaman y Maclean [7], mediante la fórmula:
k= peso (g) • 1 000
Longitud (cm)3
La velocidad de crecimiento específica (VCE) se
calculó según Gill y colaboradores [8], por medio de la
fórmula, donde T es el tiempo que duró el experimento:
VCE (%/día) = ln (peso final)- ln (peso inicial) • 1 000
T
Preparación homogénea de extractos de larvas
Las larvas de tilapia se homogeneizaron con Politrón
ULTRA-TURRAX T25 (IKALabortechnik), mediante
una relación de 10 mL de una solución de PBS 1X por
cada gramo de tejido larval. Posteriormente, la mezcla
se centrifugó a 5 000 rpm, durante 15 minutos a 4 °C.
Se tomó el sobrenadante y se almacenó a -70 °C hasta
su posterior uso, 48 horas después.
4. Yada T, Kaiya H, Mutoh K, Azuma T,
Hyodo S, Kangawa K. Ghrelin stimulates
Determinación de los parámetros bioquímicos phagocytosis and superoxide production
LDH, ASAT, CK, TAG y de las proteínas totales in fish leukocytes. J Endocrinol 2006;
1(189):57-65.
Posteriormente, se tomaron 1.5 mL del extracto crudo,
se centrifugaron a 12 500 rpm durante 4 minutos a 4 ºC 5. Maclean, N, Rahman MA, Sohm F, Hwang
G, Iyengar A, Ayad H, Smith A, Farahmand
y se tomó el sobrenadante, a partir del cual se H. Transgenic tilapia and tilapia genome.
Gene 2002;(295):265-77.
determinaron las actividades enzimáticas de LDH,
ASAT, CK, TAG y de las proteínas totales. Para la 6. Mayer F, Antonio A. Perspectives on or-
determinación de las actividades enzimáticas específicas namental fisheries in the upper Paraná
LDH, ASAT, CK y de la concentración de triglicéridos, River floodplain, Brazil. Fisheries Research,
2005;72(1):109-19.
se utilizaron juegos de reactivos comerciales producidos
por HELFA. Diagnósticos. EPB “Carlos J. Finlay”, 7. Rahman A, Maclean N. Chapter 5.
Production of lines of growth enhanced
Quimefa, Cuba. Las determinaciones se realizaron según transgenic tilapia (Oreochromis niloticus)
las recomendaciones del fabricante; la de las proteínas expressing a novel piscine growth hormone
gene. In New Development in Marine
totales, mediante el método del ácido bicinconínico, Biotechonology, edited by Le Gal and
empleando un juego de reactivos de la firma Pierce. Halvorson. Plenum Press, New York, 1998.
Determinación de lisozima 8. Gill JA, Sumpter PJ, Donaldson EM, Dye
HM, Souza L, Berg T, Wypych, Langley
La actividad de lisozima se determinó mediante el K. Recombinant chicken and bovine
growth hormones accelerate growth in
método turbidimétrico, basado en la lisis de aquacultured juvenile pacific salmon
partículas liofilizadas de Micrococcus lysodeikticus Oncorhynchus kisutch. Bio/technology
(Sigma) [9], con el empleo de lisozima de clara de 1985;(3):643-6.

Los peces fueron tratados con Acuabio 1, a una
concentración de 0.01 g/L (dosis que sugiere el
fabricante), por la vía de la inmersión, tres veces por
semana y durante una hora. A los peces identificados
huevo de gallina (Boehringer Mannheim, Alemania)
como control positivo. Los patrones de lisozima se
prepararon a concentraciones de 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 y
10 µg/mL en una solución tampón de fosfato 0.05 M,
9. Ellis AE. Lysozyme assays. In: Stolen JS,
Fletcher TC, Anderson DB, Robertson BS,
van Muiskinwel WB, editors. Techniques in
fish immunology. Fair Haven, N.J: SOS
publications 1990:95-9.

288 Biotecnología Aplicada 2006; Vol.23, No.4

Rebeca Martínez y cols.
pH 6.2. En placas de 96 pocillos, se añadieron 100 µL
de la muestra de interés por duplicado. En cada uno
de estos pocillos, se agregaron 100 µL de la
suspensión del microorganismo, a una concentración
de 0.4 mg/mL, y el volumen final fue de 200 µL. La
densidad óptica se leyó a 450 nm a los 0, 2, 5, 15,
30 y 60 minutos. La variación de 0.001 unidades de
DO en un minuto se consideró como una unidad
(U) de lisozima.
Determinación de lectinas
La sangre de conejo que se utilizó se colectó en una
solución de D-glucosa 0.11M, citrato de sodio 37 mM,
NaCl 72 mM y ácido cítrico 2.9 mM, en una proporción
de 50% volumen-volumen (v-v), almacenada a 4 °C
hasta el momento del ensayo. La sangre colectada se
lavó dos veces en PBS 1X pH 7.2 (NaCl 136mM, KCl
2.6 mM, Na2HPO4 8.0 mM, KH2PO4 1.47 mM). Para
los lavados se centrifugó a 1 500 rpm durante 5 minutos.
Para el ensayo se preparó una suspensión de eritrocitos
al 2% v-v en PBS 1X, pH 7.2. Se hicieron diluciones
seriadas de las muestras de interés en PBS 1X, pH 7.2,
en placas de 96 pocillos de fondo en U (COSTAR, 96
Well Serocluster U-Bottom), en un volumen total de
100 µL en cada pocillo. A cada pocillo se añadieron
100 µL de la suspensión de eritrocitos al 2%, y durante
1 h se incubó la placa a 28 °C. Se incluyó un control
negativo de 100 µL de PBS 1X, pH 7.2 y 100 µL de la
suspensión de eritrocitos al 2%. El título de
hemaglutinación para cada muestra, se determinó
tomando como título de lectinas la mayor dilución de la
muestra, en la cual se observa hemaglutinación completa.
Actividad antiproteasa
Se empleó el método descrito por Magnadottir et al.
[10]. Se tomaron 20 µL de los extractos homogéneos de
larvas y se incubaron con igual volumen de una solución
de tripsina 5 mg/mL durante 10 min a 22 °C.
Posteriormente, se añadieron 200 µL de solución
tampón de fosfato 0.1M pH 7 y 250 µL de azocaseína
al 2%, y se incubó a 22 °C durante 1 hora. Transcurrido
ese tiempo, se añadieron 500 µL de ácido tricloroacético
(TCA) al 10% y se incubó la mezcla durante 30 min a
22 °C. Luego se centrifugó a 6 000 rpm durante 5 min.
Se transfirieron 100 µL del sobrenadante a una placa de
96 pocillos que contenía 100 µL por pocillo de 1N
NaOH. La DO se leyó a 450 nm. Como grupo control
al 100%, se añadió una solución tampón en lugar de los
extractos homogéneos de larvas, y como control
negativo, la solución tampón de fosfato reemplazó los
extractos homogéneos de larvas y la tripsina. El
porcentaje de inhibición de la actividad de tripsina para
cada muestra se calculó en comparación con el grupo
control al 100%. Todas las muestras se analizaron por
duplicado.
Análisis estadístico
Los peces tratados y los no tratados con Acuabio 1
crecieron expuestos a las mismas condiciones
ambientales, con el objetivo de minimizar los efectos
del medio ambiente y la variación [11]. Los datos se
presentan como la media ± el error estándar de esta. Las
medias de todos los parámetros analizados entre los
animales tratados y los no tratados se compararon
289
Efectos de Acuabio 1 en larvas de peces
mediante la prueba estadística t de Student. Las
diferencias se consideraron significativas para p < 0.05.
Resultados
Crecimiento de las larvas de golfish
Los resultados del experimento de crecimiento de las
larvas de goldfish se muestran en la tabla 1 y en las
figuras 1 y 2.
Al finalizar el ensayo, se apreció una diferencia
significativa en la talla, el peso y el factor de conversión
de las larvas tratadas con Acuabio 1. Estas crecieron
2.38 mg/día, mientras que las larvas tratadas con el
placebo, crecieron 0.61 mg/día. Esto indica que el
crecimiento de los peces que recibieron el tratamiento
con Acuabio 1 fue 3.9 veces más rápido que el de los
peces controles.
Parámetros bioquímicos 10. Magnadottir B, Jonsdottir H, Helgason
S, Bjornsson B, Jorgensen T, Pilstrom L.
Con el objetivo de relacionar la estimulación del Humoral immune parameters in Atlantic
cod (Gadus morhua L.). II: the effects of size
crecimiento provocado por el Acuabio 1 en los goldfish and gender under different environmental
con algunos parámetros bioquímicos, se determinaron conditions. Comp Biochem Physiol B
1999;(122):181-8.
la actividad enzimática específica (AEE) de las enzimas
asociadas con el metabolismo anaeróbico (LDH y CK), 11. Dunham RA, Ramboux AC, Duncan PL,
el metabolismo de aminoácidos (ASAT), así como las Hayat M, Chen TT, Lin CM, Kight K,
Gonzalez-Villsensor LI, Powers DA. Transfer,
concentraciones de triacilglicéridos (TAG) y de expression, and inheritance of salmonid
lisozima en los estractos homogéneos de peces. Las growth hormone gene in chanel catfish,
Ictalarus punctatus, and effect on perfor-
enzimas líticas, como la lisozima, son elementos de mance traits. Mol Mar Biol Biotechnol
defensa importantes, especialmente contra las 1992;(21):380-9.
Tabla 1. Factor de condición y velocidad de crecimiento
específica de las larvas de goldfish (Carasius auratus)
tratadas con Acuabio 1
Grupo experimental Factor de condición (k) VCE (%/día)
CN 10.13 ± 1.03 11.19 ± 0.722
Acuabio 1 13.23 ± 0.78 * 18.77 ± 0.435 *
Los datos se expresan como la media ± el error estándar.
(*) indican las diferencias significativas entre los animales
tratados con el Acuabio 1 y los tratados con el placebo para un
valor de p < 0.05.
VCE: Velocidad de crecimiento específica.
CN: Grupo control negativo tratado con el placebo.
A B
0.06
18
16 * 0.05
*
14
0.04
12
Pe so (g)
Talla (m m)
10 0.03
8
0.02
6
4
0.01
2
0 0
CN Acuabio 1 CN Acuabio 1
Figura 1. Efecto del suplemento nutricional Acuabio 1 en el crecimiento de larvas de goldfish (Carasius
auratus). Datos de talla (A) y peso (B) obtenidos al final del experimento.
Leyenda:
El asterisco(*) indica las diferencias entre el grupo tratado con Acuabio 1 y el grupo tratado con el
placebo (CN); p < 0,05 (test t).
n = 30 peces de cada grupo. Los datos se representan como la media ± error estándar.
Biotecnología Aplicada 2006; Vol.23, No.4
Rebeca Martínez y cols. Efectos de Acuabio 1 en larvas de peces

Acuabio 1 CN Acuabio 1 Tabla 3. Experimento de crecimiento con el suplemento

nutricional Acuabio 1 en tilapias (Oreochromis sp.)
Tiempo Talla de larvas (mm) Talla de larvas (mm)
(días) CN Acuabio 1
0 15.22 ± 0.5 (n = 23) 15.22 ± 0.5 (n = 23)
15 24.00 ± 1.12 (n = 11) 27.10 ± 0.94 (n = 10)
27 27.92 ± 0.53 (n = 51) 31.69 ± 0.38* (n = 162)
Los datos se expresan como la media ± el error estándar.
Los asteriscos (*) indican las diferencias significativas entre los
animales tratados con Acuabio 1 y los tratados con el placebo
(CN) para un valor de p < 0.05.
La n indica el número de peces analizados individualmente.

La diferencia de peso de los animales tratados con

Figura 2. Fenotipo de las larvas de goldfish al término del
experimento.
Leyenda:
Acuabio 1: Larvas tratadas con el suplemento nutricional
Acuabio 1.
CN: Larvas tratadas con el placebo.
bacterias. Los resultados de las determinaciones se
muestran en la tabla 2.
La determinación de la AEE de la LDH y de los
valores de la concentración de lisozima en los extractos
homogéneos de goldfish, mostró diferencias
significativas entre las larvas tratadas con Acuabio 1
(n = 9) y las larvas tratadas con el placebo (n = 8).
Por el contrario, no hubo diferencias significativas
entre los grupos, al analizar la AEE de la CK, otra de
las enzimas anaeróbicas, y la ASAT. Algo similar
ocurrió con las concentraciones de TAG.
Crecimiento de las larvas de tilapia
Con el objetivo de estudiar el efecto del suplemento
nutricional Acuabio 1 en las larvas de tilapias
(Oreochromis sp.), se observó su crecimiento durante
27 días. Los peces se midieron y pesaron al inicio (día
respecto a los animales controles, se manifestó a los
15 días de tratamiento, y la velocidad específica de
crecimiento de los peces tratados con Acuabio 1, fue
mayor 1.21 veces que la de los peces tratados con el
placebo (Tabla 4).
Parámetros bioquímicos
Posterior al estudio de crecimiento, se evaluaron
determinados parámetros bioquímicos, tales como la AEE
de enzimas relacionadas con el metabolismo anaeróbico
(LDH y CK) o con el metabolismo de aminoácidos
(ASAT), así como las concentraciones de triacilglicéridos
(TAG), como se observa en la tabla 5.
Los valores de AEE de las enzimas anaeróbicas LDH
y CK indican una diferencia significativa entre los
organismos tratados y los no tratados con Acuabio 1.
Las larvas de los peces no desarrollan inmunidad
específica durante las etapas tempranas de desarrollo.
Entre los parámetros de la inmunidad innata se
destacan las lectinas. Estas son glicoproteínas que se
han podido aislar de diversas especies de peces, y que
Acuabio 1
CN
0.8

*
0), en el día 15, y al final del ensayo (día 27). Al principio
del experimento, la talla promedio de las larvas fue 15.22 0.7
± 0.5 mm y el peso, 0.065 ± 0.01 g (los resultados se
muestran en la tabla 3 y en la figura 3). 0.6

Tabla 2. Efecto del suplemento nutricional Acuabio 1 en

los parámetros bioquímicos estudiados en larvas de
*
0.5
goldfish (Carasius auratus).
Parámetros CN Acuabio 1 0.4
Pe so (g)

LDH 0.466 ± 0.056 0.814 ± 0.084*

(U/mg prot.) (n = 8) (n = 9) 0.3
CK 0.094 ± 0.024 0.136 ± 0.037
(U/mg prot.) (n = 8) (n = 10)
0.2
ASAT 0.127 ± 0.017 0.123 ± 0.016
(U/mg prot.) (n = 8) (n = 8)
TAG 0.218 ± 0.025 0.288 ± 0.040 0.1
(mmol/L) (n = 9) (n = 10)
Lisozima 28.25 ± 1.05 33.48 ± 0.00*
0
(µg/g tej.) (n = 4) (n = 4)
0 10 20 30
Los datos se expresan como la media ± el error estándar.
(*): Indican las diferencias significativas entre los animales Tiempo (días)
tratados con el Acuabio 1 y los tratados con el placebo (CN)
para un valor de p < 0.05.
Figura 3. Comportamiento del peso de las larvas de tilapia tras el experimento de crecimiento con el
n: Indica el número de grupos de goldfish de 250 mg suplemento nutricional Acuabio 1.
aproximadamente, analizados en los ensayos. Leyenda: Los datos se expresan como la media ± el error estándar. Los asteriscos (*) indican las
U/mg prot.: Unidades por miligramos de proteínas totales. diferencias significativas entre los animales tratados con Acuabio 1 y los animales tratados con el placebo
µg/g tej.: Microgramos por gramos de tejido larval. (CN); p < 0.05 (test t); n = 162.

290 Biotecnología Aplicada 2006; Vol.23, No.4

Rebeca Martínez y cols. Efectos de Acuabio 1 en larvas de peces

Tabla 4. Factor de condición (k) y velocidad de 100

crecimiento específica (VCE) obtenidas en el
experimento de crecimiento de larvas de tilapia 90 *
(Oreochromis sp.) 80
Parámetros CN Acuabio 1 70

Título de lectinas
20.04 ± 0.47 21.38 ± 0.75
Factor de condición (k) 60
(n = 51) (n = 162)
6.862 ± 0.224 8.327 ± 0.145* 50
VCE (%/día)
(n = 51) (n = 162)
Los datos se expresan como la media ± el error estándar. 40
(*): Indican las diferencias significativas entre los animales
tratados con Acuabio1 y los tratados con el placebo (CN), para 30
un valor de p < 0.05. 20
n: Indica el número de peces analizados individualmente.
VCE: Velocidad de crecimiento específica. 10

funcionalmente pueden estar involucradas en la defensa
del hospedero. Se observó actividad hemaglutinante
en los extractos homogéneos de larvas. Las larvas de
tilapia tratadas con Acuabio 1 mostraron una actividad
de hemaglutinación mayor. El título de lectinas fue 2.5
veces mayor en las larvas tratadas con Acuabio 1, en
comparación con el control negativo (Figura 4).
Muchas bacterias producen toxinas proteolíticas
que digieren las proteínas de los tejidos hospederos
como una fuente de aminoácidos; por tanto, la actividad
antiproteasa constituye otro factor importante de la
inmunidad innata. En este experimento la actividad
antiproteasa fue 1.8 veces mayor en los extractos
homogéneos de larvas tratadas con Acuabio 1, en
comparación con el control negativo (Figura 5).
Discusión
El estado larval de los peces es el estadio en que ocurre
la mayor pérdida de individuos, por lo que cualquier
intento por mejorar la sobrevivencia y la calidad de
0
CN Acuabio 1
Figura 4. Título de lectinas. Se determinó el título de
hemaglutinación para cada muestra, y se consideró como título
de lectinas, la mayor dilución de la muestra a la cual se
observa hemaglutinación completa.
Leyenda:
Los datos están expresados como la media geométrica ±
intervalos de confianza (n = 10).
El grupo tratado con Acuabio 1 mostró mayor actividad
hemaglutinadora en comparación con el control negativo (CN).
Los asteriscos (*) indican las diferencias significativas entre los
animales tratados con Acuabio 1 y los animales tratados con el
placebo (CN) (p < 0.05; test t). La n indica el número de peces
analizados individualmente.
por lo que es importante el momento y la vía de
administración.
En los experimentos realizados en este estudio se 12. Cahu CL, Zambonino Infante JL,
estimuló el crecimiento de las larvas de goldfish y de Quazuguel P, Le Gall MM. Protein hydrlysate
vs. fish meal in compound diets for 10-day
tilapia al administrarles el suplemento nutricional old sea bass Dicentrarchus labrax larvae.
Acuabio 1. Se observó un aumento de la talla, el peso Aquaculture 1999;(171):109-19.

vida de estas posibilitará que un mayor número de

larvas alcance el estado adulto, lo que llevaría a un
Actividad antiproteasa (porcentaje de inhibición

aumento de la producción acuícola.

En investigaciones precedentes se demostró que 16
las dietas que incluían hidrolizados de proteínas
14 **
concentrados, estimulaban la velocidad de crecimiento
de la actividad de tripsina)

de las larvas de carpa común y de besugo [12]. Se ha 12

observado que la forma en que se administra la fuente
proteica pudiera ejercer efectos temporales en el 10
desarrollo de las larvas de peces, probablemente
relacionado con la ontogenia del tracto digestivo [13], 8

6
Tabla 5. Efecto del suplemento nutricional Acuabio 1 en
4
los parámetros bioquímicos estudiados en larvas de
tilapia (Oreochromis sp.). 2
Parámetros CN Acuabio 1
LDH 308.8±67.23 567.7 ± 82.66* 0
(U/mg prot. ) (n = 6) (n = 7) CN Acuabio 1
CK 0.028 ± 0. 005 0.048 ± 0.008*
(U/mg prot.) (n = 8) (n = 7)
ASAT 0.064 ± 0.010 0.070 ± 0.009 Figura 5. Actividad antiproteasa (porcentaje de inhibición de la
(U/mg prot.) (n = 10) (n = 9) actividad de la tripsina) en los extractos homogéneos de larvas
TAG 0.753 ± 0.075 0.698 ± 0.048 de tilapia.
(mmol/L) (n = 10) (n = 10) Leyenda:
Los datos se expresan como la media ± el error estándar. Los datos se representan como la media ± la desviación
estándar. Todas las muestras se analizaron por duplicado (n =
(*): Indican las diferencias significativas entre los animales 10). El grupo tratado con Acuabio 1 mostró mayor actividad
tratados con Acuabio 1 y los tratados con el placebo (CN), para
antiproteasa en comparación con el control negativo (CN). Los
un valor de p < 0.05.
asteriscos (*) indican las diferencias significativas entre los
n: Indica el número de peces analizados individualmente. animales tratados con Acuabio 1 y los animales tratados con el
U/ mg prot.: Unidades por miligramos de proteínas totales. placebo (CN) (p < 0.01, test t). La n indica el número de peces
µg/g tej.: Microgramos por gramos de tejido larval. analizados de manera individual.

291 Biotecnología Aplicada 2006; Vol.23, No.4

Rebeca Martínez y cols.
y la velocidad de crecimiento. Resultados similares se
obtuvieron en goldfish alimentados con hormona de
crecimiento recombinante de carpa [14] y en salmones
diploides y triploides inyectados con hormona de
crecimiento porcina recombinante [15] o alimentados
con hidrolizados de proteínas [16].
El piruvato formado en la glucólisis en los tejidos
animales, puede tomar dos rutas catabólicas
alternativas. En condiciones aeróbicas, el piruvato se
oxida a acetilcolina (CoA), el cual entra en el ciclo del
ácido cítrico, y se oxida a CO2 y H2 O. La otra ruta
del catabolismo del piruvato es su reducción a lactato
por la enzima lactato deshidrogenasa (LDH), que
ocurre en condiciones de anaerobiosis. La oxidación
anaeróbica del piruvato que produce lactato, es una
vía alternativa del músculo para obtener ATP en
condiciones estresantes. La creatina quinasa (CK)
cataliza la fosforilación directa del ADP a partir de la
fosfocreatina, lo que brinda el ATP necesario durante
los primeros 30 segundos de la contracción rápida en
el músculo blanco. Se ha sugerido que las actividades
específicas de estas enzimas son indicadores de la
capacidad anaeróbica de los peces [17].
El aumento significativo de los niveles de LDH de
las larvas de goldfish y de tilapia tratadas con Acuabio
1, con respecto a las larvas controles, sugiere un
aumento de las capacidades anaeróbicas de estos peces.
Variaciones similares fueron descritas en estudios
efectuados en trucha arcoiris [18] y en el hipogloso de
California [19], en los que ocurrió un aumento de la
actividad de esta enzima que llevó al aumento de la
masa y del tamaño del animal.
En este estudio hubo un aumento significativo de la
actividad de la CK en las larvas de tilapia tratadas con
Acuabio 1 y, aunque en las larvas de goldfish la
diferencia no fue significativa, sí se apreció un aumento
de la actividad de la CK. Resultados similares se
obtuvieron en otra especie, trucha arcoiris, en la cual
las actividades relativamente altas de PK o LDH no
necesariamente se correlacionaron con el aumento de
las actividades de CK [18]. Los resultados de esta
investigación sugieren que en las larvas que recibieron
el tratamiento con Acuabio 1, el aporte energético
proviene en gran medida del metabolismo anaeróbico.
Se plantea que este aumento en la actividad de la LDH
es un mecanismo potencial para mantener una máxima
velocidad de desplazamiento, independientemente del
tamaño del pez, (ndistancia recorrida por el pez en un
segundo) [17, 18].
En esta investigación, no hubo diferencias
significativas en la actividad de la ASAT de los extractos
homogéneos de larvas de goldfish y de tilapia tratados
con Acuabio 1, con respecto a los grupos controles.
En los tejidos adiposo y hepático, los efectos
indirectos de la HC promueven la lipólisis y la
liberación de ácidos grasos [19]. En este estudio no se
observaron diferencias significativas en la concentración
de los TAG en las larvas de goldfish y de tilapia tratadas
con Acuabio 1, lo cual indica que el tratamiento no
alteró, el metabolismo de los TAG en ninguna de las
dos especies analizadas.
La estimulación de las funciones inmunes por la HC
es independiente de su efecto en el crecimiento [20]. Se
sabía que el Acuabio 1 estimula la liberación de la
hormona de crecimiento endógena, y además se detectó
292
Efectos de Acuabio 1 en larvas de peces
que estimula la producción de lisozima en las larvas de
goldfish. Se ha observado que la administración de
homólogos de la HC estimula la lisozima en el plasma
[21, 22]. La inyección de HC de salmón en la trucha
arcoiris mantenida en agua dulce, aumenta los niveles
de lisozima en el plasma [22]. Cuando se traslada la
trucha parda (Salmo trutta) de agua dulce a agua salada
se aprecia, además, un incremento en las trazas de HC
en el plasma y disminuyen las trazas de las hormonas
tiroideas. Esto se ha relacionado con el incremento de la
actividad fagocítica de los leucocitos del riñón cefálico
y con elevadas concentraciones de lisozima en el plasma
[23]. Yada et al., (2004) [24] reportaron que la HC y la
prolactina aumentan los niveles de la lisozima en el
plasma de la trucha arcoiris, en dependencia de la dosis.
Estos experimentos mostraron, además, que la HC y la
prolactina estimulan la producción de la lisozima por
los leucocitos, sin afectar su proliferación. En este
sentido se ha demostrado que los neutrófilos granulares,
un tipo de leucocitos en la trucha, constituyen los
mayores productores de lisozima en la sangre [25].
Otro parámetro de la inmunidad innata analizado en la
tilapia fue la actividad de las lectinas. Estas proteínas del
plasma se detectan mediante ensayos de hemaglutinación
por ser bivalentes o polivalentes en su interacción con
los azúcares de las glico-proteínas o de los glicolípidos, y
por su capacidad de formar enrejados con distintos tipos
celulares, lo cual provoca el fenómeno de aglutinación.
Suzuky y Otake (2000) [26] encontraron que las larvas
de Anguilla japonica tienen elevada actividad de lectinas
en la piel, y que las células que producen estas proteínas
aparecen en una etapa temprana del desarrollo larval: a
los 8 días después de la eclosión. Estas proteínas se han
identificado también en huevos de salmón [27], de
Paralichthys olivaceus [28] y en larvas de S. aurata [29].
Recientemente se demostró que el suministro de HC en
los seres humanos aumenta los niveles de las lectinas que
unen manosa, lo que sugiere que tal vez en los peces la
influencia de Acuabio 1 sobre este parámetro esté mediada
por la HC [30].
En este estudio, la actividad antiproteasa de los
extractos homogéneos de las larvas tratadas con
Acuabio 1 fue mayor, comparada con el control
negativo. Se ha descrito que el plasma de los peces
contiene numerosos inhibidores de proteasas,
principalmente α1-antiproteinasa y α 2-macro-
globulina [31]. Se ha demostrado que la diferencia en
la actividad de la á2-macroglobulina entre dos especies
de trucha está relacionada con la resistencia ante la
infección por A. salmonicida [32]. Por tanto, un
aumento de este parámetro es beneficioso para la salud
de los peces tratados con Acuabio 1.
Conclusiones
Mediante ensayos controlados de crecimiento de
larvas de goldfish y de tilapia, se corroboró la actividad
estimuladora del crecimiento que caracteriza al
suplemento nutricional Acuabio 1. Además, se estudio
la actividad de enzimas relacionadas con las vías
metabólicas de energía, así como el incremento de
factores asociados con la inmunidad innata de estas
larvas. Ello explica, a su vez, la resistencia que
adquieren estos peces frente a agentes patógenos, tras
el empleo del suplemento nutricional en los ensayos
de campo.
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