DETERMINACION DE GLUCOSA EN

SANGRE Y ORINA POR EL METODO

ENZIMATICO
 I. INTRODUCCIÓN

La alimentación humana normal contiene dos fuentes principales de carbohidratos: la

sacarosa y el almidón, presentes en casi todos los alimentos de origen vegetal.
Especialmente en los tubérculos como la papa y en los distintos tipos de cereales 1,2 .
Los carbohidratos son la principal fuente de energía de la mayoría de las dietas, ellos
cubren aproximadamente el 50 % de los requerimientos energéticos diarios; los más
importantes en la alimentación humana son el almidón y la sacarosa, que constituyen
entre el 80 y el 90 % de los que se ingieren. Antes de ser absorbidos ambos deben ser
escindidos mediante hidrólisis enzimática; la digestión intestinal los transforma en
moléculas más pequeñas y finalmente en monosacáridos absorbibles. La glucosa es el
combustible metabólico más importante para el organismo, tras su transporte celular
se utiliza de inmediato para proveer energía a las diferentes células del organismo
mediante la glucólisis, en el cual se suscitan un conjunto de reacciones enzimáticas
que finalmente condicionan la liberación de energía.

La patología más común relacionada con el metabolismo de los hidratos de carbono

es la diabetes mellitus. El diagnóstico precoz y el control de los pacientes diabéticos,
tienen por objeto evitar la cetoacidosis y las complicaciones de los síntomas
resultantes de la hiperglicemia, mediante el tratamiento adecuado. Dado que existen
múltiples factores causales de hiper o hipoglicemia, debe considerarse en cada caso la
condición fisiológica y/o la patología presente en el paciente en cuestión

TABLA DE CONTENIDO
I. INTRODUCCIÓN................................................................................................1
II. CAPITULO I:.......................................................................................................3
1. DETERMINACION DE GLUCOSA EN SANGRE Y ORINA POR EL METODO
ENZIMATICO.........................................................................................................................3
1.1 GLUCOSA:..................................................................................................................3
1.2 ESTRUCTURA DE LA GLUCOSA:..........................................................................3
1.3 DETERMINACIÓN DE GLUCOSA:..........................................................................4
1.4 GLICEMIA:...................................................................................................................6
1.5. MEDICIÓN DE GLICEMIA EN SANGRE CAPILAR.............................................6
1.6. MEDICIÓN DE GLICEMIA EN ORINA:..................................................................7
1.7. DIABETES..................................................................................................................7
1.8 PROCEDIMIENTOS Y MATERIALES A USAR PARA DETERMINAR LA
GLUCOSA..........................................................................................................................8
III. CAPITULO 2.....................................................................................................12
2.1 ESTUDIO: DETERMINACION DE GLUCOSA EN SANGRE Y ORINA POR EL
METODO ENZIMATICO....................................................................................................12
IV. CAPITULO 3.....................................................................................................17
3.1. Cuestionario............................................................................................................17
1. ¿Cuál es a la diferencia entre suero y plasma sanguínea?...................................17
2. ¿Cuál es la composición o que sustancia bioquímica encontramos en la
sangre?.................................................................................................................................18
3. ¿Qué medidas de bioseguridad debemos tener cuando trabajamos con sangre?
20
4. ¿Cuál es el valor normal de la glucosa en sangre por las mañanas de una
persona sana y de un diabético?......................................................................................21
V. CONCLUSIONES.............................................................................................23
VI. RECOMENDACIONES.....................................................................................24
VII. BIBLIOGRAFIA................................................................................................25
VIII. ANEXOS: SÍMBOLOS:.....................................................................................26

II. CAPITULO I:
 1. DETERMINACION DE GLUCOSA EN SANGRE Y ORINA POR EL
METODO ENZIMATICO
1.1 GLUCOSA:
Es posible que conozcas la glucosa con otro nombre: azúcar en la sangre. La glucosa
es la clave para mantener los mecanismos del cuerpo funcionando de manera óptima.
Cuando tus niveles de glucosa son óptimos, con frecuencia no lo notas. Sin embargo,
cuando se desvían de los límites recomendados, notarás el efecto no saludable que
tiene en el funcionamiento normal del cuerpo.

La glucosa es trascendental para el desarrollo de las funciones del organismo, pues es

una de las fuentes energética más importante. El cerebro y los glóbulos rojos, por
ejemplo, dependen totalmente de la glicemia para poder cumplir efectivamente sus
roles en el cuerpo. Luego de haber ingerido alimentos, una parte de la glucosa se
convierte en glucógeno, el que posteriormente es almacenado en el hígado y en los
músculos esquelético.

1.2 ESTRUCTURA DE LA GLUCOSA:

La glucosa es un monosacárido; es una hexosa (tiene 6 átomos de carbono). La
molécula, (C6H12O6) es una aldohexosa (aldehído pentahidroxilado).

1.3 DETERMINACIÓN DE GLUCOSA:

métodos. De todo lo anterior se deduce que para el diagnóstico de la diabetes
es necesario determinar la glucemia, pero ¿cómo se cuantifica el nivel de
 glucosa en una muestra? Los métodos para determinar la concentración de
glucosa se clasifican en dos grandes grupos:
a) Métodos basados en el poder reductor de los hidratos de carbono (reacción de
Benedict, método de la o-toluidina)
b) Métodos enzimáticos: son los más utilizados, utilizan enzimas como reactivos
(ej. glucosa oxidasa, hexoquinasa) a fin de aumentar la especificidad. Los dos
métodos que vamos a citar se pueden utilizar para determinar la glucosa en
muestras de suero, orina y líquido cefalorraquídeo.
El método enzimático se basa en que la glucosa es oxidada enzimáticamente
por la glucosa oxidasa a ácido glucorónico y agua oxigenada; el peróxido de
hidrógeno en presencia de la peroxidasa produce la copulación oxidativa del
fenol con la 4-aminofenazona (4 - AF), dando lugar a la formación de un
cromógeno rojo - cereza con absorbancia máxima a 505 nm
b.1.) Método de la hexoquinasa: Es el método de referencia y consiste en
dos reacciones acopladas.
Es el método más específico para la determinación de glucosa. Este
procedimiento enzimático utiliza dos enzimas de gran especificidad, la
hexoquinasa, que transforma la glucosa a glucosa- 6- fosfato. La enzima
glucosa 6 fosfato-deshidrogenasa, que transforma el ester de fosfato en 6-
fosfogluconato.

En la primera reacción (específica), catalizada por la enzima hexoquinasa, se

fosforila la glucosa formándose glucosa 6-fosfato. La glucosa 6-fosfato, en una
reacción posterior (reacción indicadora), se transforma en 6-fosfogluconato
produciéndose NADPH (1 mol por cada molécula de glucosa). La producción
de NADPH origina un aumento de absorbancia a 340nm. El incremento de
absorbancia a esta longitud de onda será directamente proporcional a la
concentración de glucosa.
Este procedimiento, denominado técnica de la hexoquinasa, se ha utilizado
para determinar glucosa en diversos líquidos biológicos (sangre, orina, LCR,
pleurales ascítico, ect.), mostrando una excelente correlación con el método de
la glucosa oxidasa, que es el método por el cual vamos a trabajar.
b.2.) Método de la glucosa oxidasa: Al igual que el anterior consiste en dos
reacciones acopladas.
Es un método específico para la glucosa pues la enzima glucosa oxidasa
(GOD), que actúa oxidando la beta –D-glucosa, con una mínima acción sobre
la alfa-D-glucosa, la cual está presente en la solución en equilibrio con la forma
beta. Habitualmente el punto de equilibrio se obtiene a través de mutorrotación
y se alcanza cuando existe un 36 % en la forma alfa y un 64 % en la forma
beta. Para lograr una oxidación completa de la glucosa, es necesario que la
isómera alfa sea transformada completamente en la forma beta, es decir, debe
producirse una mutorrotación total de alfa a beta está afectada por el pH, la
temperatura y más específicamente por una enzima mutarrotaza, que acelera
específicamente este paso.
La reacción tiene dos fases en la primera la GOD oxida a la beta –D-glucosa:

La segunda fase se basa en la utilización de un sistema enzimático conjugado,

en el cual el H2O2 formada, se acopla a través de una peroxidasa (POD) a
unos receptos 10 cromogénico (aceptor de oxígeno), permitiendo la medida
fotométrica directa de la glucosa.

Se han utilizados diversos receptores cromogènicos (ortodianisidina,fenol-

amino fenazol) que difiere en el color del cromógeno generado la fenol 4-
aminofenasona (reactivo de Trinder )genera un cromógeno rojo. Las sustancias
reductoras (ácido ascórbico) inhibe la formación de cromógeno. Por tanto esta
segunda fase es menos especìficas, porque hay muchas sustancias reductoras
que compiten con el aceptor de oxígeno por el H2 O2 .

MÉTODO DE ENZIMÁTICO (GLUCOSA. OXIDASA – HEXOQUINASA).

1.4 GLICEMIA:
La glicemia se define como el valor de los niveles de azúcar presente en un litro de
sangre. La glucosa que se mide proviene de los alimentos que son ingeridos por el
propio organismo, particularmente los carbohidratos. Este nivel de glucosa es nivelado
por varias hormonas, pero sin duda la principal es la insulina secretada por el
páncreas.

1.5. MEDICIÓN DE GLICEMIA EN SANGRE CAPILAR.

Actualmente, para el buen control de los enfermos diabéticos se hace imprescindible
conocer sus valores glucémicos de una forma sistemática. En el mercado, existe un
número importante de aparatos medidores (glucómetro) y de tiras reactivas para
determinar la glucemia capilar. Estos glucómetros capilar nos dan lectura de glucemia
aproximada, y que, por tanto todos ellos pueden sernos de utilidad en la práctica
diaria. Ahora bien, para su correcta utilización debemos conocer exactamente sus
limitaciones, la propia capacidad del aparato para realizar una correcta lectura de la
glicemia y, el ser conscientes de que esta lectura puede verse afectada por la
incorrecta manipulación del aparato o de la tira por parte del enfermo. De poco nos
serviría un aparato ideal perfecto si su manipulación fuera muy difícil o no tuviera
sistemas que nos avisen si se está utilizando incorrectamente. Las tiras reactivas son
soporte plásticos (microchips) de distinto tamaño que contienen los reactivos
necesario fijos en una zona especial de la tira (química seca) que en contacto con la
muestra de sangre producen una reacción que permite determinar químicamente la
cantidad de glucemia en sangre. Es producto de un solo uso, que permite realizar de
forma sencilla y fiable la determinación de glucemia en una gota de sangre
habitualmente capilar a personas con diabetes mellitus por sí mismo o por sus
familiares y en su propio domicilio sin alterar su vida normal. Por otro lado, los valores
glucémicos obtenidos por el medidor capilar nos dan una glucemia aproximada pero
no idéntica a la obtenida en el laboratorio.
Las tiras reactivas son soporte plásticos (microchips) de distinto tamaño que contienen
los reactivos necesario fijos en una zona especial de la tira (química seca) que en
contacto con la muestra de sangre producen una reacción que permite determinar
químicamente la cantidad de glucemia en sangre. Es producto de un solo uso, que
permite realizar de forma sencilla y fiable la determinación de glucemia en una gota de
sangre habitualmente capilar a personas con diabetes mellitus por sí mismo o por sus
familiares y en su propio domicilio sin alterar su vida normal. Por otro lado, los valores
glucémicos obtenidos por el medidor capilar nos dan una glucemia aproximada pero
no idéntica a la obtenida en el laboratorio.

1.6. MEDICIÓN DE GLICEMIA EN ORINA:

La orina normal contiene cantidades pequeñas de azúcares dentro de las cuales

encontramos fructosa, levulosa, pentosa, galactosa, glucosa, maltosa, etc., que no son
detectados por esas pruebas rutinarias del laboratorio. En el riñón sano, después de
que la glucosa ha sido filtrada a través del glomérulo, la mayor parte es absorbida por
el 21 túbulo proximal. La determinación de glucosa en orina (glucosuria), suele formar
parte del análisis de orina rutinario. En condiciones normales, no debería haber
glucosa en la orina, pero cuando la cantidad en sangre supera un determinado límite,
empieza a ser eliminada a través del riñón con la orina.

La glucosuria se presenta cuando es sobrepasado el umbral renal, el cual es variable

de persona a persona, sin embargo, está situado generalmente al nivel de glucosa en
sangre de 150 a 180mg / 100ml. Cuanta más cantidad de glucosa haya en la sangre,
más se eliminará por la orina. La determinación en orina es menos exacta y menos útil
que la determinación en sangre. La causa más importante de una glucosuria es la
diabetes mellitus; existen otros padecimientos en los cuales también se presenta
glucosuria, por ejemplo, pancreatitis, trombosis coronaria, glucosuria alimenticia,
cáncer pancreático, embarazo, dolor, hipertiroidismo, traumatismo cráneo – encefálico.

1.7. DIABETES
La Diabetes Mellitus es un desorden metabólico de origen múltiple, caracterizado por
hiperglucemia crónica con disturbios en el metabolismo de los carbohidratos, grasas y
proteínas que resulta de defectos en la secreción y/o en la acción de la insulina.

1 Las consecuencias de la enfermedad pueden llegar a ser devastadoras con

importantes complicaciones principalmente cardiovasculares, pero también renales,
oculares y en el sistema nervioso, que empeoran el pronóstico funcional y vital del
mismo.

4 Entre los síntomas de la hiperglucemia marcada están la poliuria, polidipsia, pérdida

de peso, con frecuencia con polifagia, acompañante y visión borrosa. Las
complicaciones a largo plazo de la diabetes incluyen retinopatía con pérdida potencial
de visión, nefropatía con progresión a insuficiencia renal crónica, neuropatía periférica
con riesgo de úlceras en pies, neuropatía autonómica con repercusión gastrointestinal,
genitourinarias, cardiovascular y disfunción sexual.3-18

1.7.2 CLASIFICACIÓN. Los criterios actuales para el diagnóstico y clasificación de

la diabetes mellitus (DM) fueron desarrollados casi simultáneamente por un comité de

expertos de la Asociación Americana de Diabetes (ADA) y por un comité asesor de la
Organización Mundial de la Salud (OMS) y se basan fundamentalmente en su etiología
y características fisiopatológicas, pero adicionalmente incluye la posibilidad de
describir la etapa de su historia natural en la cual se encuentra la persona.

1.8 PROCEDIMIENTOS Y MATERIALES A USAR PARA DETERMINAR LA

GLUCOSA
A. MATERIALES:

RECURSOS FÍSICOS:

 Laboratorio Clínico

 Equipo de bioquímica clínica automatizado METROLAB PLUS 2300

 Suero

 Algodón

 Alcohol

 Jeringuilla

 Torniquete
 Centrifuga de tubos BOECO

 Gradillas

 Pipetas automáticas

 Puntas descartables

 Baño María MENMER 34

 Reactivo Enzimático (Wienner)

 Bolígrafos

 Computadora ELGIN

 Impresora CANON

 Tinta para impresora

 Hojas de papel bond

 Hojas de encuesta

B.PREPARACIÓN DEL PACIENTE:

El paciente debe tener un ayuno de 8 a 10 horas. Se le extrajo 5 cm de sangre

venosa, se rotula el tubo con el número que le corresponda, se dejó reposar por un
lapso de 45 minutos hasta que se formó el coagulo.

CENTRIFUGACIÓN. Poner el tubo de ensayo en la centrífuga de modo balanceado,

poner el reloj por cinco minutos y centrifugar a 3000 r.p.m. Verificar la idoneidad de la
muestra (suero o plasma): Ictericia, presencia de coágulos, hemolisis, turbidez en caso
contrario dar a conocer la no idoneidad de la muestra.

C.MÉTODO ENZIMÁTICO GOD/POD (LÍNEA LÍQUIDA AA). La patología más común

relacionada con el metabolismo de los hidratos de carbono es la diabetes mellitus. El
diagnóstico precoz y el control de los pacientes diabéticos, tiene por objeto evitar la
cetoacidosis y las complicaciones resultantes de la hiperglicemia, mediante el
tratamiento adecuado. Dado que existen múltiples factores causales de hiperglicemia,
debe considerarse en cada caso la condición fisiológica y/o la patología presente en el
paciente.

D.FUNDAMENTOS DEL MÉTODO

El esquema de reacción es el siguiente: La glucosa oxidasa (GOD) cataliza la
oxidación de la glucosa a ácido glucónico y peróxido de hidrógeno, lo cual se valora
mediante la reacción de Trinder, dando lugar a una iminoquinona coloreada.

E.CONTROL DE CALIDAD

Se usarán calibrador A plus y sueros controles; normal y patológico, con

concentraciones conocidas de glucosa respectivamente. VERIFICAR EL
RESULTADO. Si el valor de la glucosa es < 50 mg/dl y ≥ 350 mg/dl, repetir la medida.
Si el valor del resultado repetido es el mismo, se puede entregar el examen.

F.DATOS DE LA METÓDICA. PRECAUCIONES.

Los reactivos son para uso diagnóstico “in vitro”.

G.ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO.

 REACTIVOS PROVISTO: Son estables en refrigerador (2 -10ºC) hasta la fecha

de vencimiento en la caja. No mantener a temperaturas elevadas durante
lapsos prolongados.
 INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOS.
Durante el uso, el reactivo puede colorearse ligeramente no afectando su
funcionamiento siempre que se procese un blanco con cada lote de
determinaciones y un estándar periódico. Desechar cuando las lecturas del
Blanco sean anormalmente bajas.

H.MUESTRA. Suero, plasma, o líquido cefalorraquídeo.

I.ADITIVOS: En caso de que la muestra a emplearse sea plasma se recomienda el

uso de Anticoagulante G para su obtención (el mismo contiene fluoruro como
conservador) o heparina.

J.SUSTANCIAS INTERFERENTES CONOCIDAS. No se observan interferencias por:

Bilirrubina hasta 100 mg/dl. Triglicéridos hasta 500 mg/dl.
K.ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA. La sangre debe centrifugarse dentro de
las 2 horas de la extracción. El sobre nadante límpido se transfiere a otro tubo para su
conservación. De esta forma la glucosa es estable 4 horas a temperatura ambiente o
24 horas refrigeradas. LINEALIDAD. La linealidad de la Glicemia enzimática AA líquida
es hasta 500 mg/dl. SENSIBILIDAD. El mínimo límite de detección es de 4,2 mg/dl.

L.ESPECIFICIDAD. La metódica es específica para la glucosa.

M.PARÁMETRO PARA ANALIZADOR AUTOMÁTICO

Longitud de onda primaria……………………………………. 505nm

Longitud de onda secundaria…………………………………. 600 – 700nm.
Tipo de reacción……………………………………………….. punto final.
Dirección de la reacción………………………………………... aumentada.
Temperatura de reacción………………………………………. 37ºC.
Relación muestra/reactivo…………………………………….. 1:100.
Tiempo de equilibrio…………………………………………… 3 segundos.
Tiempo de retardo……………………………………………… 300 segundos.
Tiempo de lectura………………………………………………. 5 – 20 segundos.
Absorbancia de blanco………………………………………… < 0.250 D.O.
Limite de Absorbancia…………………………………………. 2.000 D.O.
Valor normal inferior………………………………………….. 70mg/dl.
Valor normal superior………………………………………….. 110mg/dl.
Linealidad………………………………………………………. 500mg
N.VALORES DE REFERENCIA.
Suero o Plasma: 70 – 110 mg/dl. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus
propios valores de referencia.
O.CÁLCULOS DE LOS RESULTADOS.
Concentración del estándar = 100 mg/dl
 III. CAPITULO 2
2.1 ESTUDIO: DETERMINACION DE GLUCOSA EN SANGRE Y ORINA POR
EL METODO ENZIMATICO.
a) REACTIVOS PROVISTOS.
Standard*: solución de glucosa 100 mg/dl (1 g/l). A.

Reactivo A: solución conteniendo glucosa oxidasa (GOD), peroxidasa (POD), 4-

aminofenazona (4-AF), buffer fosfatos pH 7,0 y 4-hidroxibenzoato en las siguientes
concentraciones:

b) REACTIVOS NO PROVISTOS:
Calibrador A plus de Wiener lab.

c) INSTRUCCIONES PARA SU USO:

Reactivos Provistos: listos para usar. PRECAUCIONES Los reactivos son para
uso diagnóstico "in vitro". Utilizar los reactivos guardando las precauciones
habituales de trabajo en el laboratorio de química clínica. Todos los reactivos y las
muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local vigente.

d) ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO:

Reactivos Provistos: son estables en refrigerador (2-10o C) hasta la fecha de

vencimiento indicada en la caja. No mantener a temperaturas elevadas durante
lapsos prolongados.

e) INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOS

Durante el uso, el Reactivo A puede colorearse ligeramente no afectando su
funcionamiento siempre que se procese un Blanco con cada lote de
determinaciones y un Standard periódicamente. Desechar cuando las lecturas
del Blanco sean superiores a 0,160 D.O.

f) MUESTRA
Suero, plasma, orina o líquido cefalorraquídeo (LCR)

g) RECOLECCIÓN: - Suero o plasma: se debe obtener suero de la manera usual o

plasma recolectado con anticoagulantes comunes. - Orina: si se trata de una muestra
aislada, utilizar preferentemente orina fresca. En caso de no poder realizar el ensayo
de forma inmediata, conservar la muestra en refrigerador (2-10o C). Puede realizarse
el ensayo en orina de 24 horas. En este caso, recolectar la muestra en un recipiente
oscuro conteniendo 5 ml de ácido acético glacial y conservarlo en hielo. - LCR: en
caso de utilizar LCR, el ensayo debe realizarse en forma inmediata a la obtención de
la muestra.

h) ADITIVOS: en caso de que la muestra a emplear sea plasma, se recomienda el uso

de Anticoagulante G (EDTA/ fluoruro) para su obtención.

i) Sustancias interferentes conocidas: no se observan interferencias por: bilirrubina

hasta 10 mg/dl, triglicéridos hasta 500 mg/dl y hemoglobina hasta 350 mg/dl. El ácido
ascórbico interfiere en la determinación en orina en cualquier concentración. Referirse
a la bibliografía de Young para los efectos de las drogas en el presente método.

j) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la destrucción enzimática de la

glucosa sanguínea (glucólisis) por hematíes y leucocitos es proporcional a la
temperatura a la que se conserva la sangre, siendo máxima a 37o C. Este proceso no
se inhibe aún en estado de congelación, por lo que la sangre debe centrifugarse
dentro de las 2 horas de la extracción. El sobrenadante límpido se transfiere a otro
tubo para su conservación. De esta forma la glucosa es estable 4 horas a temperatura
ambiente o 24 horas refrigerada. En caso de no poder procesarse la muestra de la
forma indicada, deberá adicionarse un conservador en el momento de la extracción. El
LCR puede contaminarse con bacterias y otras células por lo que la determinación
debe realizarse de inmediato. En caso de no poder procesarse de esta manera,
centrifugar el LCR y conservarlo 3 días a 2-10o C o 5 horas a 20-25o

k) CONDICIONES DE REACCION

- Longitud de onda: 505 nm en espectrofotómetro o en fotocolorímetro con filtro verde

(490-530 nm).

- Temperatura de reacción: 37o C

- Tiempo de reacción: 5 minutos

- Volumen de muestra: 10 ul

- Volumen de Reactivo A: 1 ml

- Volumen final de reacción: 1,01 ml Los volúmenes de Muestra y de Reactivo A

pueden variarse proporcionalmente (Ej.: 20 ul Muestra + 2 ml Reactivo A).
l) ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL

El color de reacción final es estable 30 minutos, por lo que la absorbancia debe ser
leída dentro de este lapso.

m) CALCULO DE LOS RESULTADOS

D = lectura de muestra

f= factor

S = lectura de estándar.

Los valores encontrados en el espectrofotómetro fueron comparados con los valores

normales de glucosa en plasma:

n) METODO DE CONTROL DE CALIDAD

Procesar 2 niveles de un material de control de calidad (Standatrol S-E 2 niveles) con

concentraciones conocidas de glucosa, con cada determinación.

o) VALORES DE REFERENCIA
Se analizaron con Glicemia enzimática AA líquida, 120 muestras de individuos en
ayunas, de ambos sexos, con edades comprendidas entre 20 y 45 años, provenientes
de la ciudad de Rosario (Argentina), sin síntomas de diabetes o cualquier otra
enfermedad aparente. Se encontró que el 95% de los resultados cubrieron el siguiente
rango: Suero o plasma: 70 a 110 mg/dl.

En la literatura (Tietz, N.W.) se menciona el siguiente rango de referencia:

 Suero o plasma

Adultos: 74 - 106 mg/dl (4,11 - 5,89 mmol/l)

Niños: 60 - 100 mg/dl (3,33 - 5,55 mmol/l)

Neonatos: 1 día: 40 - 60 mg/dl (2,22 - 3,33 mmol/l)

mayor a 1 día: 50 - 80 mg/dl (2,78 - 4,44 mmol/l)

 Orina aislada fresca

1 - 15 mg/dl (0,06 - 0,83 mmol/l)

 Orina de 24 horas

< 0,5 g/24 hs (< 2,78 mmol/24 hs)

 LCR

Niños: 60 - 80 mg/dl (3,33 - 4,44 mmol/l)

Adultos: 40 - 70 mg/dl (2,22 - 3,89 mmol/l)

Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia,

teniendo en cuenta sexo, edad hábitos alimenticios y otros factores.

p) CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SI

Glucosa (mg/dl) x 0,0555 = Glucosa (mmol/l) Glucosa (g/24 horas) x 55,5 = Glucosa
(mmol/24 hs)

q) LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.

r) PERFORMANCE

Los ensayos fueron realizados en analizador automático Express Plus (*).

s) Reproducibilidad:

procesando 20 replicados de una misma muestra en 5 días diferentes, se obtuvo:

t) Recuperación: agregando cantidades conocidas de glucosa a distintos sueros, se

obtuvo una recuperación entre 99 y 101%.

u) Linealidad: la reacción es lineal hasta 500 mg/dl. Para valores superiores, diluir la
muestra con solución salina y repetir el ensayo, multiplicando el resultado final por el
factor de dilución.

v) Correlación: se determinó el valor de glucosa en 154 muestras de suero en un

rango comprendido entre 23 y 503 mg/dl, con Glicemia enzimática AA líquida de
Wiener lab. y un kit comercial basado en el mismo principio, obteniéndose el siguiente
coeficiente de correlación: r = 0,9997; pendiente b =1, 0257; intersección a = 1,9485

w) Sensibilidad: el mínimo límite de detección es 0,54 mg/dl y la sensibilidad analítica

es de 4,2 mg/dl.
 IV. CAPITULO 3
3.1. Cuestionario

1. ¿Cuál es a la diferencia entre suero y plasma sanguínea?

Plasma y suero son partes importantes de la sangre. La sangre se compone de
plasma, suero, glóbulos blancos y glóbulos rojos. La principal diferencia entre plasma y
suero se encuentra en sus factores de coagulación.

plasma sanguíneo suero sanguíneo

El plasma sanguíneo se define como El suero sanguíneo, también llamado suero

la matriz líquida y acelular de la
sangre donde se encuentran
suspendidos los demás
componentes, como hormonas,
células y nutrientes.
os diferentes componentes de la
sangre se separaran según su peso
y densidad en tres partes:
hemático, es el líquido remanente del
plasma sanguíneo tras consumirse los
factores hemostáticos de coagulación.
Es decir, es la fracción fluida de la sangre
sin fibrinógeno ni elementos formes
(plaquetas, glóbulos rojos y glóbulos
blancos).

RBC (Red Blood Cells): ocupa
aproximadamente el 45% del total de
la muestra.
WBC (White Blood Cells): se sitúa
sobre la fracción RBC y ocupa
alrededor del 1% del volumen de la
muestra. Esta fracción, además de
Al igual que para obtener el plasma, la
muestra de sangre se somete a
centrifugación, pero en esta ocasión no se
añade ni heparina ni EDTA ni ningún otro
agente anticoagulante.
De esta forma, permitimos que la sangre
 linfocitos o glóbulos blancos, también
contiene las plaquetas.
Plasma: es la fracción superior y
ocupa más de la mitad del volumen
de la muestra, aproximadamente un
55%. Es de color amarillento.
coagule. El coágulo quedará en la parte baja
del centrifugado reteniendo todos los
elementos formes, y en la parte superior
quedará el suero.
El suero sanguíneo contiene numerosas
proteínas, antígenos, anticuerpos
(inmunoglobulinas), electrolitos y hormonas,
y se utiliza en el diagnóstico y estudio del
tipo de sangre, niveles de colesterol, niveles
de glucosa, factores que afectan a la presión
arterial, etc.

Una sustancia llamada fibrinógeno es esencial en la coagulación de la sangre. El

plasma sanguíneo contiene este fibrinógeno. Básicamente, cuando se separan el
suero y plasma de la sangre, el plasma aún conserva el fibrinógeno que ayuda a la
coagulación, mientras que el suero es la parte de la sangre que queda después de
quitar este fibrinógeno.

2. ¿Cuál es la composición o que sustancia bioquímica encontramos en la

sangre?
La sangre consta de distintas partes o componentes, que son: los glóbulos
rojos, los glóbulos blancos, las plaquetas y el plasma.

Los glóbulos rojos (llamados también “eritrocitos” o “hematíes”) son células que
trasportan oxígeno por todo el cuerpo. Cada glóbulo rojo vive
aproximadamente cuatro meses. Los glóbulos rojos contienen una proteína
llamada hemoglobina, la cual les permite recoger el oxígeno de los pulmones.
El cuerpo necesita hierro para producir hemoglobina.

Los glóbulos blancos (llamados también “leucocitos”) son células que forman
parte del sistema inmunitario del cuerpo, y ayudan a combatir las infecciones y
las enfermedades. Hay distintos tipos de glóbulos blancos: neutrófilos,
linfocitos, monocitos, eosinófilos y basófilos. Según el tipo de célula, los
glóbulos blancos viven durante varios días, meses o años.
 Las plaquetas (llamadas también “trombocitos”) son células que ayudan a
coagular la sangre. Tras una cortada o magulladura, las plaquetas se adhieren
entre sí para formar un coágulo o “tapón” que ayuda a controlar el sangrado,
impidiendo que el cuerpo pierda demasiada sangre. Las plaquetas viven en el
cuerpo entre 7 y 10 días.

El plasma es la parte líquida de la sangre. Este líquido trasporta los distintos

tipos de células de la sangre a todas las partes del cuerpo; además, el plasma
trasporta unas proteínas llamadas “factores de coagulación” que ayudan a las
plaquetas a formar coágulos.

Los análisis bioquímicos de la sangre miden los niveles de determinadas sustancias

en la sangre que le indican al médico si los distintos órganos están sanos y funcionan
bien o no durante el tratamiento. Los análisis se realizan para medir lo siguiente:

 los niveles de enzimas hepáticas (proteínas especiales que participan en las

reacciones químicas vitales) y la bilirrubina (una sustancia que ayuda a
descomponer la grasa), para evaluar la función hepática
 los niveles de potasio, cloruro y nitrógeno ureico, que reflejan la salud del
hígado y los riñones durante y después del tratamiento

 los niveles de calcio, para determinar la salud de los huesos y los riñones

 los niveles de glucemia, que son importantes en las personas que padecen
diabetes y personas que toman esteroides (medicamentos para reducir la
hinchazón, el dolor y otros síntomas de la inflamación)

Los resultados anómalos de los análisis bioquímicos de la sangre pueden indicar que
el cáncer de mama se ha propagado hacia los huesos o el hígado. En este caso, el
médico solicitará un estudio de diagnóstico por imágenes, como una exploración ósea
o una tomografía axial computarizada, con el fin de reunir más información.

3. ¿Qué medidas de bioseguridad debemos tener cuando trabajamos con

sangre?

Normas de Bioseguridad

1. Evita el contacto de la piel y mucosas con la sangre y otros líquidos

corporales provenientes de cualquier paciente, y no solamente tomes medidas
de precaución con aquellos que ya tengan diagnosticada una enfermedad
infecciosa.

2. Usa siempre guantes para todo procedimiento realizado en los pacientes y

que implique el contacto con sangre y otros fluidos corporales que se
consideren líquidos de precaución universal, piel no intacta, membranas
mucosas o superficies contaminadas con sangre.

3. Lávate las manos inmediatamente antes y después de realizar cualquier

procedimiento, de tener contacto con sangre o líquidos corporales o de atender
cualquier paciente. Los guantes nunca son un sustituto del lavado de las
manos, dado que la calidad de los guantes es variable y no previenen las
punciones.

4. Usa mascarilla y gafas de protección durante los procedimientos que

generen gotas de sangre o líquidos corporales; con esta medida se previene la
exposición de las membranas mucosas de la boca, la nariz y los ojos.
 5. Emplea delantales protectores (impermeables) cuando durante el contacto
con un paciente exista la posibilidad de generar salida explosiva o a presión de
sangre o líquidos corporales: drenaje de abscesos.

6. Utiliza siempre los elementos necesarios para llevar a cabo una adecuada
reanimación cardiorrespiratoria, de manera que no se exponga a fuentes
potenciales de infección.

7. Pon especial atención en la manipulación de los utensilios de trabajo de

manera que se puedan evitar todos los accidentes con agujas, bisturíes y
cualquier elemento cortopunzante. Para ello se recomienda, además de la
concentración en las actividades, evitar todo procedimiento de reempaque de
agujas, ruptura de láminas de bisturí o cualquier tipo de manipulación diferente
al uso indicado. Todos los implementos cortopunzantes deben descartarse en
guardianes, dispuestos en cada servicio para este fin.

8. Cuando presentes piel no intacta por lesiones exudativas o dermatitis, evita

el contacto directo con pacientes que puedan estar eliminando sangre o
líquidos corporales activamente.

4. ¿Cuál es el valor normal de la glucosa en sangre por las mañanas de una

persona sana y de un diabético?
Los cuadros de azúcar en la sangre son una guía de referencia para comprender los
resultados de las pruebas. De tal forma, los cuadros de azúcar en la sangre son
herramientas importantes para el manejo de la diabetes.

La mayoría de los planes de tratamiento para la diabetes incluyen mantener los niveles
de azúcar en la sangre tan cerca de lo normal o deseado como sea posible. Esto
requiere pruebas frecuentes en casa o con orden del médico, junto con la comprensión
de cómo se comparan los resultados con los niveles deseados.

Con frecuencia, los médicos proporcionan recomendaciones para el azúcar en la

sangre A1C en los cuadros. Tienden a dar los resultados de A1C en porcentajes y el
nivel promedio de azúcar en la sangre en miligramos por decilitros (mg/dl).

Para ayudar a interpretar y evaluar los resultados del azúcar en la sangre, los
siguientes cuadros describen los niveles de azúcar en la sangre normales y anormales
para aquellas personas con o sin diabetes.
Aunque un médico proporcionará esta guía, también individualizará un plan para
controlar la glucosa e incluirá más o menos objetivos personales rigurosos.

Una prueba de A1C mide los niveles promedio de azúcar en la sangre de una persona
durante un período de 3 meses, el cual proporciona una perspectiva más amplia del
control general de sus niveles.

La importancia de emitir resultados útiles y confiables hace necesario verificar el

funcionamiento y rendimiento del método que se utiliza en la rutina diaria, estos se
reportarán de acuerdo a la aplicación médica y valores señalados en la CLIA´88. Con
el paso de los años se han desarrollado diferentes métodos para determinar glucosa.
En la actualidad, los métodos reductores y químicos se encuentran obsoletos, por lo
cual se hará referencia únicamente a los métodos enzimáticos, que se caracterizan
por poseer gran especificidad ya que utilizan enzimas purificadas que actúan
únicamente sobre molécula de glucosa.
 V. CONCLUSIONES

El método enzimático para la determinación de glucosa hexoquinasa GLUC 3 de

Roche Diagnostics es preciso en términos de repetibilidad y reproducibilidad, es decir
existe un alto grado de concordancia entre los resultados de mediciones sucesivas del
mismo mesurando intra o intercorrida al compararlos con los valores descritos por el
fabricante.

El método es veraz para los puntos de decisión médica es decir: hipoglucemia, valor
normal y prediabetes, los que demuestran que el sesgo obtenido es menor al descrito
por el fabricante.

 El monitoreo de la temperatura, humedad, paso de controles no tenía una frecuencia

establecida, estos elementos influyen en el desempeño del método por tal motivo se
estableció horarios de toma de temperaturas tanto ambiental como de los
refrigeradores y humedad y el paso obligatorio de controles dos veces al día.
 VI. RECOMENDACIONES

Se recomienda a las autoridades responsables del laboratorio clínico capacitar

adecuadamente al personal técnico para que puedan identificar los diferentes
tipos de errores que pueden darse en las corridas diarias de los controles, y
generar acciones correctivas oportunas que eviten la presencia de este tipo de
errores. .
Previo a la adquisición de un nuevo equipo se debería realizar la calificación
técnica detallada en el manual de operaciones, con la finalidad de adquirir
equipos eficientes los cuales incrementen la relación costo beneficio del
laboratorio además de emitir resultados de manera oportuna.
Para futuras verificaciones se debe analizar minuciosamente que el equipo
este en óptimas condiciones, además contar con muestras de concentración
mayor a las de decisión médica y principalmente no tener errores sistemáticos
para lo cual se debe hacer un seguimiento de los tres últimos meses.
 VII. BIBLIOGRAFIA

 Arellano, M. (2008). Sistema de gestión de alidad. Laboratorio Clinico.

 Arboli, A. (Agosto de 2009). Espectrometría ultravioleta-visible. Espectrometría

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Recuperado de http://www4.ujaen.es/~esiles/TEMA%201-200607.pdf
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Asignatura, Universidad Autónoma de Zacatecas, Ciencias de la Salud. Brambila,
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 Brandan, N. (Julio de 2008). Enzimas para el Diagnóstico Clínico. Recuperado de
https://diagnosticoclinico.wikispaces.com/file/view/Tema+Enzimas.pdf
 Burbano, A. (Enero de 2007). Evaluación al cumplimiento de estándares de
acreditación en los laboratorios clínicos de la ciudad de Quito. Evaluación al
Cumplimiento de Estándares de Acreditación en los Laboratorios Clínicos de la Ciudad
de Quito (tesis de maestría inédita) , 39-50. Quito, Pichincha, Ecuador
 VIII. ANEXOS: SÍMBOLOS:

Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnóstico de
ENCUESTA: Responda las siguientes preguntas:
Edad:
Sexo:
Peso:
Talla:
Perímetro abdominal:
IMC:
HÁBITOS ALIMENTICIOS:
¿Cuántas comidas realiza al día?
¿Qué clase de alimentos predominan en sus comidas diarias?
Carne Pollo Pescado Carbohidratos Frutas Vegetales
ESTILO DE VIDA:
Hace ejercicio físico: SI No
Consume alcohol: SI No
Consume tabaco: Si No
ANTECEDENTES PATOLÓGICO FAMILIARES: Diabético Hipertensión arterial (HTA )
Dislipidemia ANTECEDENTES PATOLÓGICO PERSONAL: Diabético Hipertensión
arterial (HTA) Dislipidemia NIVEL EDUCATIVO: Primario Secundario Superior
ZONA DONDE VIVE: Rural Urbana
EJEMPLO

EQUIPOS. CENTRIFUGA – BAÑO MARIA