Trabajo práctico N°1:

“DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN
DE PROTEÍNAS POR LOS MÉTODOS DE
BIURET Y LOWRY”

PROFESORA: Dr. Guillermo E. Juárez

Dra. Estela M. Galván
MATERIA: Bioquímica
CARRERA: Bioquímica
ALUMNA: CESAR, María Jimena
AÑO: 2021

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INDICE Página

o Consigna del trabajo 3

o Bibliografía 12

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Introducción
OBJETIVOS Y METODOLOGÍA
 Conocer los fundamentos de los principales métodos de cuantificación de
proteínas.
 Construir una curva de calibración con una solución de albúmina de suero
bovino como proteína patrón para cada una de los métodos colorimétricos
de Biuret y Lowry.
 Determinar la linealidad, la sensibilidad, el límite de detección y el rango
de cada uno de los métodos ensayados.
 Determinar la concentración total de proteínas de muestras incógnita.

Método de Biuret
Reactivos
 Solución patrón: suero albúmina bovina (BSA) en concentración 20 mg/ml.
 Soluciones de proteínas de concentración desconocida a determinar.
 Reactivo de Biuret: disolver 1,5 g de CuSO4 + 6 g de Tartrato de sodio y
potasio en 500 ml de H2Od. Agregar 300 ml de NaOH al 10% con agitación
y llevar a 1 litro con agua destilada. Almacenar en frasco oscuro de plástico.

Procedimiento. A 0,4 ml de solución proteica deben agregarse 2 ml del

reactivo de Biuret. Luego de una agitación vigorosa, se dejará 30 min a
temperatura ambiente y medir la absorbancia a 540 nm. Confeccionar una
curva de calibración para dosaje de proteínas. Se dispondrá de una
solución patrón de BSA (20 mg/ml) con la que se deberá cubrir un rango de
cantidad proteica de 1 a 20 mg/ml. Las diluciones se realizarán con agua
destilada, solvente con el que se hará el respectivo blanco de reactivos.
Blanco, patrones y muestras se procesarán por duplicado. Con la curva de
calibración obtenida se deberá determinar la concentración de una muestra
proteica incógnita

Método de Lowry
Reactivos:

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- Solución patrón: albúmina sérica bovina (BSA) en concentración 0,5
mg/ml. - Soluciones de proteínas de concentración desconocida a
determinar.
- Solución alcalina de cobre: Se prepara mezclando las soluciones A: B: C
en relación 0,1: 0,1: 10. La preparación debe realizarse mezclando primero
A + B y luego agregar C. Se prepara antes de usar y se descarta luego de
un día. Solución A: Tartrato de sodio y potasio al 2% en agua. Solución B:
CuSO4.5H2O al 1% en agua. Solución C: Na2CO3 al 2% en NaOH 0.1 N
- Reactivo de Folin-Ciocalteau: mezcla de fosfomolibdato y fosfotungstato
disponible comercialmente que se diluye al 50% con agua destilada.

Procedimiento Se confeccionará una curva de calibración para dosaje de

proteínas siguiendo el protocolo descripto por Lowry y col. El mismo indica
que a 0,4 ml de solución proteica deben agregarse 2 ml de la solución
alcalina de cobre. Luego de una agitación vigorosa, se dejará 10 min a
temperatura ambiente. Finalmente, se agregarán 0,2 ml del reactivo de
Folin y se agitará inmediatamente. Luego, la solución se dejará durante 30
min a temperatura ambiente para luego poder medir la absorbancia a 660
nm. Se dispondrá de una solución patrón de BSA (0,5 mg/ml) con la que se
deberá cubrir un rango de cantidad proteica de 25 µg a 125 µg. Las
diluciones se realizarán con agua destilada, solvente con el que se hará el
respectivo blanco de reactivos. Blanco, patrones y muestras se procesarán
por duplicado. Con la curva de calibración obtenida se deberá determinar la
concentración de una muestra proteica incógnita.

Bibliografía
 http://www.biologia.edu.ar/plantas/epidermis.htm