PRUEBAS BIOQUÍMICAS GN

AGAR DE HIERRO Y TRIPLE AZUC AR

Fundamento
Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color
amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno que reacciona luego con una sal de hierro
proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.
1- Superficie alcalina/profundidad ácida (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente
fermenta la glucosa.

2- Superficie ácida/Profundidad ácida (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta

glucosa, lactosa y/o sacarosa.

3- Superficie alcalina/Profundidad alcalina (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no

fermentador de azúcares.

La presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo

indican que el microorganismo produce gas.

Si produce ácido sulfhídrico (debido a la reducción de las sales de hierro), se presentará un

ennegrecimiento del tubo.
 AGAR DE HIERRO Y LISINA

Decarboxilación de la lisina:
Resultado Positivo: superficie alcalina / profundidad alcalina
(pico violeta / fondo violeta).
Resultado negativo: superficie alcalina /profundidad ácida
(pico violeta / fondo amarillo).
Desaminación de la lisina:
Resultado positivo: superficie rojiza / profundidad ácida.
Producción de SH2
Resultado positivo: ennegrecimiento del medio de cultivo
(especialmente en el límite entre la superficie y
profundidad).
Resultado negativo: el medio de cultivo permanece sin
cambio de color.
 MEDIO MIO

Movilidad:
Resultado positivo: presencia de turbidez o
crecimiento mas allá de la línea de siembra.
Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea
de siembra.
Prueba del indol:
Resultado positivo: color rojo.
Resultado negativo: el color del reactivo revelador
permanece incoloro-amarillento.
Ornitina decarboxilasa:
Resultado positivo: color púrpura.
Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede
desarrollar un color violáceo en la superficie del medio
 PRUEB A DE CITRATO

Fundamento
El medio de cultivo es diferencial en base a que
los microorganismos capaces de utilizar citrato
como única fuente de carbono usan sales de
amonio como única fuente de nitrógeno, con la
consiguiente producción de alcalinidad.

Positivo: crecimiento bacteriano con un intenso

color azul en el pico de flauta.
Negativo: ausencia de crecimiento y
permanencia del color verde
del medio de cultivo.
 PRUEB A DE UREA

Fundamento
Las bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima
ureasa liberan amoníaco y dióxido de carbono. Estos
productos alcalinizan el medio de cultivo haciendo
virar el indicador rojo de fenol del color amarillo al
rojo.

Microorganismos que hidrolizan la urea: el

medio de cultivo es de color rosado-
rojizo.

Microorganismos que no hidrolizan la

urea: el medio de cultivo permanece de
color amarillo.
 PRUEB A DE OXIDASA

Fundamento
Los microorganismos que contienen
la enzima citocromo-c-oxidasa en
su cadena respiratoria se evidencian
porque, en presencia de oxígeno
atmosférico y citocromo c, se oxida
el sustrato presente en los discos a
un compuesto de color rosado a
fucsia.

Positivo: observación de color rosado a

fucsia en el disco y/o solución.

Negativo: el disco permanece sin cambio de

color.
 HIDROLISIS DE GELATINA

Esta prueba se utiliza para determinar la

capacidad de un microorganismo para
producir enzimas proteolíticas que licúan la
gelatina (gelatinasas).
 Β-GALACTOSIDASA (ONPG)

Los microorganismos que la fermentan

rápidamente poseen 2 enzi-mas, la β−galactósido
permeasa que está localizada en membrana
celular y participa en el transporte de la
lactosa al interior de la célula y la enzima
β−galactosidasa, que es intracelular e interviene
en la hidrólisis de la lactosa con liberación de
galactosa y glucosa.Los microorganismos
fermentadores lentos de lactosa son defi-
cientes en la enzima β−galactósido permeasa
pero no en β−ga-lactosidasa, y los
microorganismos no fermentadores no poseen
ninguna de estas 2 enzimas.
ROJO DE METILO Y VOGES-PROSKAUER

Prueba del rojo de metilo:

Resultado positivo: color rojo.
Resultado negativo: color amarillo.

Prueba de Voges Proskauer:

Resultado positivo: desarrollo de un color rojo en pocos minutos después de una
completa agitación del tubo.
Resultado negativo: ausencia de color rojo.
 REDUCCIÓN DE NITRATOS

Con esta prueba se investiga la capacidad

de las bacterias para reducir los nitratos
convirtiéndolos en nitritos o en
nitrógeno, es decir se estudia la presencia
de nitrato reductasa y nitrito reductasa.