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Utilizacin de cidos orgnicos:

Agar citrato de Simmons:


Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato
como nica fuente de carbono y energa.
Composicin:
Sulfato de magnesio.0.2g
Fosfato monoamniaco1.0g
Fosfato dipotsico.1.0g
Citrato de sodio2.0g
Cloruro de sodio 5.0g
Agar. 15.0g
Azul de bromotimol. 0.08g
Agua, aforar a 1000ml
Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el citrato de sodio
es la nica fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano.
Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de
sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color
azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces
de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de
nitrgeno,
con
la
consiguiente
produccin
de
alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs
del ciclo del cido tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y
piruvato. Este ltimo, en presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser
utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces
vira al azul y esto es indicativo de la produccin de citrato permeasa.
Resultados
-Positivo: crecimiento
y
color
azul
en
el
pico,
alcalinidad.
-Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay
cambio de color.
Microorganismo
Klebsiella pneumoniae
S. typhimurium
E. coli

Citrato
Positivo
Positivo
Negativo
Caldo Malonato:

Color del medio


Azul
Azul
Verde

Se determina la capacidad que tiene una bacteria de desaminar la fenilalanina y de usar el malonato
como nica fuente de carbono
El indicador REDOX, es azul de bromotimol el cual tiene como cambios de coloracin pH:6.0
amarillo, pH:6.9 verde, y pH: 7.6 Azul.
METABOLISMO DE AMINOCIDOS
Produccin de cido sulfhdrico e indol.
Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de sulfuro de
hidrgeno en un mismo tubo.
El indol es un compuesto que se genera mediante la desaminacin reductiva del triptfano y esta
reaccin es llevada a cabo por algunas bacterias que poseen las enzimas denominadas en su
conjunto triptofanasas. Para detectar la produccin de indol se utiliza el medio Caldo triptfano y la
lectura de la prueba se realiza con el reactivo de Kovacs (alcohol isoamilo, p-

dimetilaminobenzaldehdo y cido clorhdrico concentrado) con el que el indol producido reacciona


generando una coloracin rojo violceo.

Prueba positiva (+): un anillo rojo en la superficie del medio en la capa alcohlica
Prueba negativa (-): no se produce color en la capa alcohlica; toma el color del reactivo de Kovacs
o de Ehrlich (amarillo)

Las bacterias tienen motilidad por medio de sus flagelos, que se encuentran principalmente entre
los bacilos. Las cepas mviles pueden apreciarse, por la turbidez que producen alrededor de la
puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por la
formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato.

Microorganismo
E. coli
K. pneumoniae
P. mirabilis
S. typhimurium
S. enteritidis
S. flexneri

Movilidad

Indol

+
+
+
+
+
Produccin de amoniaco e indol

Produccin de
cido sulfhdrico
+
+
+
-

Composicin de caldo de triptona:


Peptona de casena.10.0g
Cloruro de Sodio5.0g
Agua, aforar a 1000ml
Ajustar a pH: 7.3
FUNDAMENTO:
Las enzimas triptofanasas oxidan el triptfano para formar tres metabolitos: indol, metil indol y cido
indolactico. Los reactivos de Erhlich o Kovacs contienen DMABA que reacciona con el indol
producido formado un compuesto quinnico color violeta, que se observa por la aparicin de un anillo
en la superficie del medio.
El medio de cultivo tiene consistencia semislida por lo que la movilidad se observa por el crecimiento
del microorganismo en todo el tubo, ms all de la zona de inoculacin (picadura). Los
microorganismos inmviles solo crecern en la zona inoculada.
Posibles resultados:
El desarrollo de un color rojo-fucsia en la interface del reactivo y del medio segundo despus, aadir
el reactivo de Kovacs indica la presencia de indol y por lo tanto una prueba positiva.

Produccin de lisina-descarboxilasa en medio de LIA.


FUNDAMENTO:
En el medio LIA se puede detectar la produccin de la lisina descarboxilasa ya que se produce una
reaccin coloreada por un cambio en el pH del medio, que contiene como indicador prpura de
bromocresol. Un cambio del color original del medio (morado) hacia amarillo en el fondo indica una
reaccin cida por la fermentacin de una pequea cantidad de glucosa en el medio. Si el
microorganismo produce lisina descarboxilasa, la accin de esta enzima sobre la lisina dar lugar a
la cadaverina, la cual provocar un cambio de pH hacia la alcalinidad dando un color morado que
sobrepasa la acidez debida a la glucosa. As pues, un fondo amarillo indica que no se produce lisina
descarboxilasa y un color morado que si es producida.
POSIBLES RESULTADOS:
Descarboxilacin positiva: Color purpura en el fondo del tubo
Descarboxilacin negativa: Color amarillo en el fondo del tubo
Desaminacin positiva: Color rojo naranja en la superficie del medio
Desaminacin negativa: Sin cambio de color en la superficie
Produccin de H2S: Presencia de precipitado negro.
REFERENCIA:
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/simmonscitagar.htm
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/U3c_PruebasBioquimicas_17461.PDF
MacFaddin, Jean F, (2000), Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de importancia
clnica 3 edicin, Editorial Mdica Panamericana, Madrid, Espaa.